पूरे बीज के आकार राल अनुभाग और उसके अनुप्रयोगों को प्राप्त करने के लिए एक सरल सूखी अनुभाग विधि
Summary
यह तकनीक बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के अवलोकन और विश्लेषण के लिए पूरे बीज के आकार के राल अनुभाग की तेज और सरल तैयारी के लिए अनुमति देती है।
Abstract
बीज में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों की आकृति विज्ञान, आकार और मात्रा बीज के वजन और गुणवत्ता का निर्धारण करती है। वे बीज के विभिन्न क्षेत्रों के बीच काफी अलग हैं। कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों की मॉर्फोलोजी को स्पष्ट रूप से देखने के लिए, और मात्रात्मक रूप से उनके आकृति विज्ञान मापदंडों का सही विश्लेषण करने के लिए, पूरे बीज के आकार के अनुभाग की आवश्यकता होती है। हालांकि पूरे बीज के आकार के पैराफिन अनुभाग बीजों में भंडारण सामग्री के संचय की जांच कर सकते हैं, लेकिन मोटी धारा के कम संकल्प के कारण कोशिकाओं और भंडारण सामग्री के आकृति विज्ञान मापदंडों का मात्रात्मक विश्लेषण करना बहुत मुश्किल है। पतली राल अनुभाग में उच्च संकल्प है, लेकिन नियमित राल खंड विधि एक बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री के साथ परिपक्व बीजों के पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने के लिए उपयुक्त नहीं है। इस अध्ययन में, हम पूरे बीज के आकार के राल अनुभाग को तैयार करने के लिए एक सरल शुष्क खंड विधि प्रस्तुत करते हैं। यह तकनीक उच्च स्टार्च सामग्री वाले बड़े बीजों के लिए भी एलआर व्हाइट राल में एम्बेडेड विकासशील, परिपक्व, अंकुरित और पके हुए बीजों के क्रॉस और देशांतर पूरे बीज के आकार के वर्गों को तैयार कर सकती है। पूरे बीज के आकार के खंड को फ्लोरोसेंट ब्राइटनर 28, आयोडीन और कूमासी शानदार नीले R250 के साथ दाग दिया जा सकता है ताकि विशेष रूप से कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों की आकृति विज्ञान को स्पष्ट रूप से प्रदर्शित किया जा सके। प्राप्त छवि का मात्रात्मक विश्लेषण भी किया जा सकता है ताकि बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के आकृति विज्ञान मापदंडों को दिखाया जा सके।
Introduction
पौधों के बीजों में स्टार्च और प्रोटीन जैसी भंडारण सामग्री होती है और लोगों के लिए ऊर्जा और पोषण प्रदान करते हैं। आकार, आकार, और कोशिका और भंडारण सामग्री की मात्रा बीज के वजन और गुणवत्ता का निर्धारण। बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं और भंडारण सामग्रियों में काफी अलग-अलग मॉर्फोलोजी होते हैं, खासकर कुछ उच्च-एमीलोज अनाज फसलों के लिए स्टार्चब्रांचिंग एंजाइमआईआईबी 1,2,3के अवरोध के साथ। इसलिए, बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं और भंडारण सामग्री की मॉर्फोलोजी की जांच करना बहुत महत्वपूर्ण है।
पैराफिन सेक्शनिंग पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने के लिए एक अच्छी विधि है और बीज की ऊतक संरचना और बीज4, 5, 6के विभिन्न क्षेत्रों में भंडारण सामग्री के संचय को प्रदर्शित करसकताहै। हालांकि, पैराफिन वर्गों में आमतौर पर कम रिज़ॉल्यूशन के साथ 6-8 माइक्रोन मोटाई होती है; इस प्रकार, सेल और भंडारण सामग्री की आकृति विज्ञान का स्पष्ट रूप से निरीक्षण और मात्रात्मक विश्लेषण करना बहुत मुश्किल है। राल के खंडों में आमतौर पर 1-2 माइक्रोन मोटाई और उच्च संकल्प होता है और यह कोशिका और भंडारण सामग्री की आकृति विज्ञान का निरीक्षण और विश्लेषण करने के लिए बहुत उपयुक्त होते हैं7. हालांकि, नियमित राल खंड विधि पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने में कठिनाई होती है, विशेष रूप से बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री वाले बीजों के लिए; इस प्रकार, बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं और भंडारण सामग्री की आकृति विज्ञान का निरीक्षण और विश्लेषण करने का कोई तरीका नहीं है। एलआर व्हाइट राल एक ऐक्रेलिक राल है और कम चिपचिपाहट और मजबूत पारमशीलता प्रदर्शित करता है, जिससे बीजों के राल अनुभाग को तैयार करने में इसके अच्छे अनुप्रयोग होते हैं, विशेष रूप से बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री के साथ अनाज परिपक्व गुठली के लिए। इसके अलावा, एलआर व्हाइट राल में एम्बेडेड नमूने को प्रकाश या फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप7के तहत कोशिकाओं और भंडारण सामग्री की आकृति को स्पष्ट रूप से प्रदर्शित करने के लिए कई रासायनिक रंगों के साथ आसानी से दाग दिया जा सकता है। हमारे पिछले कागज में, हम परिपक्व अनाज राल में एंबेडेड के पूरे बीज के आकार के वर्गों को तैयार करने के लिए एक सूखी खंड विधि की सूचना दी है । विधि भी विकसित, अंकुरित और पकाया अनाज गिरी8के पूरे बीज के आकार के खंड तैयार कर सकते हैं । प्राप्त पूरे बीज के आकार के खंड में माइक्रोमॉर्फोलॉजी अवलोकन और विश्लेषण में कई अनुप्रयोग हैं, विशेष रूप से बीज8,9के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिका और भंडारण सामग्री के आकृतिविज्ञान मतभेदों को स्पष्ट रूप से देखने और मात्रात्मक रूप से विश्लेषण करने के लिए।
यह तकनीक शोधकर्ताओं के लिए उपयुक्त है जो हल्के माइक्रोस्कोप का उपयोग करके बीज के विभिन्न क्षेत्रों में ऊतक के सूक्ष्म संरचना और कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के आकार और आकार का निरीक्षण करना चाहते हैं। कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं, और प्रोटीन निकायों के प्रदर्शन के लिए विशेष रूप से दाग पूरे बीज के आकार के वर्गों की छवियों को बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के आकृति विज्ञान मापदंडों को मात्रात्मक रूप से मापने के लिए आकृति विज्ञान विश्लेषण सॉफ्टवेयर द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है। तकनीकी प्रयोज्यता और पूरे बीज के आकार के खंड अनुप्रयोगों को प्रदर्शित करने के लिए, हमने इस अध्ययन में मक्का और तिलहन बलात्कार के परिपक्व बीजों और चावल के विकासशील, अंकुरित और पकाई गई गुठली की जांच की है । प्रोटोकॉल में चार प्रक्रियाएं होती हैं। यहां, हम परिपक्व मक्का गिरी का उपयोग करते हैं, जो बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री के कारण पूरे बीज के आकार के वर्गों को तैयार करने में सबसे कठिन है, एक नमूने के रूप में कदम से कदम प्रक्रियाओं को प्रदर्शित करने के लिए ।
Protocol
Representative Results
Discussion
बीज भोजन, चारा, और औद्योगिक कच्चे माल के लिए सबसे महत्वपूर्ण नवीकरणीय संसाधन हैं, और स्टार्च और प्रोटीन जैसे भंडारण सामग्री में समृद्ध हैं । कोशिकाओं की आकृति विज्ञान और मात्रा और भंडारण सामग्री की सा?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
वित्त पोषण चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (३२०७१९२७), यांगझोउ विश्वविद्यालय की प्रतिभा परियोजना और जियांग्सू उच्च शिक्षा संस्थानों के प्राथमिकता अकादमिक कार्यक्रम विकास द्वारा प्रदान किया गया था ।
Materials
| Acetic acid | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A501931 | |
| Compact glass staining jar (5-Place) | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | E678013 | |
| Coomassie brilliant blue R-250 | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A100472 | |
| Coverslip | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | F518211 | |
| Double-sided blade | Gillette Shanghai Co., Ltd. | 74-S | |
| Ethanol absolute | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A500737 | |
| Flattening table | Leica | HI1220 | |
| Fluorescence microscope | Olympus | BX60 | |
| Fluorescent brightener 28 | Sigma-Aldrich | 910090 | |
| Glass strips | Leica | 840031 | |
| Glutaraldehyde 50% solution in water | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A600875 | |
| Glycerol | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A600232 | |
| Iodine | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A500538 | |
| Isopropanol | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A507048 | |
| Light microscope | Olympus | BX53 | |
| LR White resin | Agar Scientific | AGR1281A | |
| Oven | Shanghai Jing Hong Laboratory Instrument Co.,Ltd. | 9023A | |
| Potassium iodide | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A100512 | |
| Slide | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | F518101 | |
| Tweezers | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | F519022 | |
| Sodium phosphate dibasic dodecahydrate | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A607793 | |
| Sodium phosphate monobasic dihydrate | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A502805 | |
| Ultramicrotome | Leica | EM UC7 |
References
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