هنا، ونحن وصف نموذج الماوس من الإقفاري الشبكية عن طريق انسداد الشريان السباتي المشترك الثنائية العابرة باستخدام خياطة بسيطة ومشابك. يمكن أن يكون هذا النموذج مفيدًا لفهم الآليات المرضية لتروية الشبكية الناجمة عن تشوهات القلب والأوعية الدموية.
يمكن أن تؤدي أمراض الأوعية الدموية المتنوعة مثل اعتلال الشبكية السكري، وانسداد الأوردة الشبكية أو الشرايين ومتلازمة نقص التروية العينية إلى نقص التروية الشبكية. من أجل تحري الآليات المرضية لاقفارية الشبكية، يجب تطوير نماذج تجريبية ذات صلة. تشريحيا، والأوعية الرئيسية لتوريد الدم الشبكية هو الشريان العيني (OpA) و OpA ينبع من الشريان السباتي الداخلي من الشريان السباتي المشترك (CCA). وهكذا، يمكن أن يسبب اضطراب CCA فعلياً نقص التروية الشبكية. هنا، أنشأنا نموذج الماوس من الإقفاري الشبكية عن طريق انسداد الشريان السباتي المشترك الثنائي العابر (tBCCAO) لربط CCA اليمنى مع خياطة الحرير 6-0 وocclude CCA اليسار عابرة لمدة 2 ثانية عن طريق المشبك، وأظهرت أن tBCCAO يمكن أن تحفز هتكيمي الشبكية الحادة مما يؤدي إلى خلل الشبكية. الطريقة الحالية يقلل الاعتماد على الأدوات الجراحية فقط باستخدام الإبر الجراحية والمشبك، ويختصر الوقت انسداد للحد من الموت الحيواني غير متوقع، والذي غالبا ما ينظر في نماذج الماوس من انسداد الشريان الدماغي الأوسط، ويحافظ على قابلية التكاثر من النتائج التروية الشبكية الشائعة. ويمكن استخدام هذا النموذج للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية من اعتلال الشبكية الإقفي في الفئران ، ويمكن استخدامها كذلك في فحص المخدرات في الجسم الحي.
الشبكية هي نسيج عصبي للبصر. منذ هناك حاجة إلى كمية كبيرة من الأوكسجين لوظيفة بصرية، ومن المعروف شبكية العين باعتبارها واحدة من أعلى الأوكسجين تطالب الأنسجة في الجسم1. الشبكية عرضة لأمراض الأوعية الدموية كما يتم تسليم الأكسجين من خلال الأوعية الدموية. أنواع مختلفة من أمراض الأوعية الدموية، مثل اعتلال الشبكية السكري والأوعية الدموية الشبكية (الأوردة أو الشرايين) انسداد، يمكن أن تحفز الإقفاريات الشبكية. للتحقيق في الآليات المرضية لاقفية الشبكية ، تعتبر النماذج التجريبية القابلة للتكاثر والملاءمة سريريًا من نقص التروية الشبكية ضرورية. انسداد الشريان الدماغي الوسطى (MCAO) عن طريق إدراج خيوط داخل الغدد هو الأسلوب الأكثر استخداما عموما لتطوير في نماذج القوارض في الجسم الحي من الإقفاريات الدماغية التجريبية2،3. نظرا لقرب الشريان العيني (OpA) إلى MCA، وتستخدم أيضا نماذج MCAO في وقت واحد لفهم الفيزيولوجيا المرضية من الإقفاري الشبكية4،5،6. للحث على نقص التروية الدماغية جنبا إلى جنب مع الإقفار الشبكية، وعادة ما يتم إدراج خيوط طويلة من خلال شق الشريان السباتي المشترك (CCA) أو الشريان السباتي الخارجي (ECA). هذه الطرق صعبة الأداء، تتطلب وقتا طويلا لإكمال الجراحة (أكثر من 60 دقيقة ماوس واحد)، وتؤدي إلى تباينات عالية في النتائج بعد الجراحة7. ولا يزال من المهم وضع نموذج أفضل لتحسين هذه الشواغل.
في هذه الدراسة، استخدمنا ببساطة قصيرة عابرة CCA الانسداد الثنائي (tBCCAO) مع الإبر ومشببك للحث على نقص التروية الشبكية في الفئران وتحليل النتائج النموذجية لإصابات الإقفاري في شبكية العين. في هذا الفيديو، سوف نقدم مظاهرة من الإجراء tBCCAO.
في الدراسة، وقد أظهرنا أن tBCCAO، وذلك باستخدام الغرز البسيطة ومشابك، يمكن أن تحفز الإقفاري الشبكية والخلل الوظيفي الشبكي المصاحبة. وعلاوة على ذلك، فقد أثبتنا لدينا بروتوكول الحالي لتطوير نموذج الماوس من الإقفاري الشبكية هو أسهل وأسرع بالمقارنة مع البروتوكولات السابقة الأخرى لتطوير نماذج…
The authors have nothing to disclose.
وقد دعم هذا العمل من خلال المنح في المعونة للبحث العلمي (KAKENHI) (18K09424 إلى Toshihide Kurihara و20K18393 إلى يوكيهيرو ميوا) من وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا (MEXT).
Atipamezole hydrochloride | Zenoaq | Antisedan | For anti-anesthesia |
Applied Biosystems 7500 Fast | Applied Biosystems | – | For qPCR |
Butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | For anesthesia |
BZ-II Analyzer | KEYENCE | – | For an image merge |
BALB/cAJc1 | CLEA | – | Mouse strain |
β-Actin (8H10D10) Mouse mAb | CST | 3700 | For western blot |
Clamp Forcep | World Precision Instruments | WPI 500451 | For surgery |
Dumont forceps #5 | Fine Science Tools | 11251-10 | For surgery |
DAPI solution | Dojindo | 340-07971 | For IHC |
Envisu SD-OCT system | Leica | R4310 | For OCT |
FITC-dextran | Merk | FD2000S | For retinal blood perfusion |
Fluorescence microscope | KEYENCE | BZ-9000 | For fluorescence detection |
Gatifloxacin hydrate | Senju Pharmaceutical | Gachifuro | For anti-bacterial infection |
GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10) | Thermo | 13-0300 | For IHC |
Heating pad | Marukan | RH-200 | For surgery |
HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb | CST | 36169 | For western blot |
ImageQuant LAS 4000 mini | GE Healthcare | – | For chemiluminescence |
Midazolam | Sandoz K.K | SANDOZ | For anesthesia |
Microtome Tissue-Tek TEC 6 | Sakura | – | For sectioning |
Medetomidine | Orion Corporation | Domitor | For anesthesia |
Needle holder | Handaya | HS-2307 | For surgery |
PuREC | MAYO Corporation | – | For ERG |
Scissor | Fine Science Tools | 91460-11 | For surgery |
Sodium hyaluronate | Santen Pharmaceutical | Hyalein | For eye lubrication |
Tropicamide/Penylephrine hydrochloride | Santen Pharmaceutical | Mydrin-P | For mydriasis |
6-0 silk suture | Natsume | E12-60N2 | For surgery |