यह प्रोटोकॉल 5 से 8 दिन पुराने चिकन भ्रूण और उनके कोरियोएलांटोइक झिल्ली (सीएएम) को प्राप्त करने और उपयोग करने के तरीके पर तीन तरीकों का वर्णन करता है ताकि कंट्रास्ट-एन्हांस्ड अल्ट्रासाउंड इमेजिंग और माइक्रोबबल-मध्यस्थता दवा वितरण का अध्ययन किया जा सके।
चिकन भ्रूण और रक्त-वाहिका समृद्ध कोरियोलैंटोइक झिल्ली (सीएएम) बायोमेडिकल प्रक्रियाओं, नई अल्ट्रासाउंड स्पंदन योजनाओं, या कंट्रास्ट-एन्हांस्ड अल्ट्रासाउंड इमेजिंग और माइक्रोबबल-मध्यस्थता दवा वितरण के लिए उपन्यास ट्रांसड्यूसर की जांच करने के लिए विवो मॉडल में एक मूल्यवान है। इसके कारण सीएएम के भ्रूण और पोत नेटवर्क की पहुंच के साथ-साथ मॉडल की कम लागत भी हैं। भ्रूण और सीएएम वाहिकाओं तक पहुंच प्राप्त करने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम अंडे की सामग्री को अंडे के छिलके से बाहर निकालना है। इस प्रोटोकॉल में, इनक्यूबेशन के दिन 5 और 8 के बीच अंडे के छिलके से सामग्री को बाहर निकालने के लिए तीन तरीकों का वर्णन किया गया है, इस प्रकार भ्रूण को इन दिनों तक अंडे के छिलके के अंदर विकसित करने की अनुमति मिलती है। वर्णित विधियों को केवल सरल उपकरणों और उपकरणों की आवश्यकता होती है और एक्स ओवो सुसंस्कृत भ्रूण (~ 50%) की तुलना में 5-दिन के लिए 90%, 6-दिन के लिए 75%, 7-दिन के लिए 50%, और 8-दिवसीय इनक्यूबेट अंडे के लिए 60% की उच्च जीवित रहने की सफलता दर प्राप्त होती है। प्रोटोकॉल यह भी वर्णन करता है कि सीएएम संवहनी प्रणाली में गुहिकायन नाभिक, जैसे माइक्रोबबल्स को कैसे इंजेक्ट किया जाए, ऑप्टिकल रूप से पारदर्शी अध्ययन के लिए भ्रूण और सीएएम युक्त झिल्ली को शेष अंडे की सामग्री से कैसे अलग किया जाए, और विभिन्न प्रकार के अल्पकालिक अल्ट्रासाउंड प्रयोगों में चिकन भ्रूण और सीएएम का उपयोग कैसे किया जाए। विवो चिकन भ्रूण और सीएएम मॉडल कंट्रास्ट-एन्हांस्ड अल्ट्रासाउंड इमेजिंग के लिए नए इमेजिंग प्रोटोकॉल, अल्ट्रासाउंड कंट्रास्ट एजेंटों और अल्ट्रासाउंड स्पंदन योजनाओं की जांच करने और अल्ट्रासाउंड-मध्यस्थता दवा वितरण के तंत्र को उजागर करने के लिए बेहद प्रासंगिक है।
एक्स ओवो चिकन भ्रूण और रक्त-वाहिका समृद्ध कोरियोलैंटोइक झिल्ली (सीएएम) भ्रूणजनन, ऑन्कोलॉजी और दवा वितरण 1,2,3,4 जैसी विभिन्न जैविक और बायोमेडिकल प्रक्रियाओं की जांच के लिए एक उपयुक्त मॉडल साबित हुए हैं। अल्ट्रासाउंड का उपयोग भ्रूण के हृदय के विकास 4,5 की इमेजिंग के लिए और संवहनी दवा वितरण 6,7 के लिए माइक्रोबबल जैसे इंजेक्शन पर गुहिकायन नाभिक को सक्रिय करने के लिए किया गया है। चिकन भ्रूण सस्ती हैं, कम बुनियादी ढांचे और उपकरणों की आवश्यकता होती है, और अन्य पशु मॉडल 8 की तुलना में कम सख्त कानूनहोते हैं। अंडे को खोलने के बाद चिकन भ्रूण और सीएएम वाहिकाएं आसानी से सुलभ होती हैं जबकि स्तनधारी भ्रूण और वाहिकाओं के साथ यह बहुत अधिक कठिन साबित होता है। इसके अलावा, चिकन भ्रूण और सीएएम वाहिकाएं दिल की धड़कन और एक स्पंदित रक्त प्रवाह प्रदान करती हैं। सीएएम स्तनधारियों के साथ पोत शरीर रचना विज्ञान में समानता दिखाता है और इसका उपयोग दवा स्क्रीनिंग 8,9,10 के लिए किया जा सकता है। इन विशेषताओं के कारण, सीएएम वाहिकाओं ने कंट्रास्ट एन्हांस्ड अल्ट्रासाउंड इमेजिंग (सीईयूएस) 11,12,13,14,15,16 की जांच के लिए एक उपयुक्त मॉडल भी साबित किया है। इसके अलावा, मॉडल का उपयोग अल्ट्रा-हाई-स्पीड कैमरे का उपयोग करके अल्ट्रासाउंड क्षेत्र में अल्ट्रासाउंड कंट्रास्ट एजेंटों के व्यवहार की ऑप्टिकल रूप से जांच करने और दवाओं के प्रोपेलिंग, बाइंडिंग और एक्स्ट्रावेसन पर ध्वनिक विकिरण बल के प्रभावकी जांच करने के लिए किया जा सकता है। यद्यपि चिकन भ्रूण और सीएएम दीर्घकालिक प्रयोगों के लिए कम उपयुक्त हैं, वे विवो प्रयोगों में अल्पावधि के लिए फायदेमंद हो सकते हैं।
प्रयोगों के दौरान चिकन भ्रूण और सीएएम पर दृश्यता और नियंत्रण बढ़ाने के लिए, अंडे के छिलके18 से भ्रूण और सीएएम युक्त अंडे की सामग्री लेना महत्वपूर्ण है। अल्ट्रासाउंड कंट्रास्ट एजेंटों से जुड़े पिछले चिकन भ्रूण अध्ययनों में 5 से 6 दिन पुराने भ्रूण 7,11,12,17,19 और 14 से 18 दिन पुराने भ्रूण 13,14,15,16 का उपयोग किया गया था। शेल 18,20,21 से अंडे की सामग्री को बाहर निकालने के लिए कई दृष्टिकोणों का विस्तार से वर्णन किया गया है। हालांकि, हमारे ज्ञान के अनुसार, पहले प्रकाशित दृष्टिकोण इनक्यूबेशन के 3 दिनों के बाद अंडे की सामग्री को अंडे के छिलके से बाहर निकालने पर ध्यान केंद्रित करते हैं (यानी, हैमबर्गर और हैमिल्टन (एचएच) चरण 19-2022), और संस्कृति पूर्व ओवो को जारी रखते हैं। इस एक्स ओवो कल्चर दृष्टिकोण के कई नुकसान हैं जिनमें संस्कृति के दौरान मृत्यु का खतरा (~ 50%) 1,18, एंटीबायोटिक दवाओं का उपयोग18,20, और ओवो विकास23 की तुलना में कुल पोत की लंबाई में कमी शामिल है। चूंकि अंडे के छिलके के भीतर भ्रूण की खेती सबसे प्राकृतिक वातावरण प्रदान कर रही है, इसलिए प्रयोग के दिन तक अंडे के छिलके के भीतर भ्रूण को सेने में सबसे आसान है। इस कारण से, एक दृष्टिकोण जिसमें अंडे की सामग्री को 5 से 8 दिनों के इनक्यूबेशन पर अंडे के छिलके से बाहर निकाला जाता है, विशेष रूप से 5 से 8 दिन के भ्रूण पर प्रयोगों के लिए फायदेमंद होगा।
इस प्रोटोकॉल में, हम अंडे के छिलके से अंडे की सामग्री को बाहर निकालने के लिए तीन तरीकों का वर्णन करते हैं जब भ्रूण विकास के दिन 5 से 8 (एचएच 26-3522) पर होता है, जिससे भ्रूण को प्रयोग के दिन तक अंडे के छिलके के भीतर विकसित करने की अनुमति मिलती है। सीएएम पोत का आकार व्यास में 10-15 μm से होता है, 8 दिन के भ्रूण24 की छोटी केशिकाओं में, 6 और 8 दिन पुराने भ्रूण24,25 के बड़े बर्तन में व्यास में 115-136 μm तक होता है। तीन वर्णित विधियों को केवल बुनियादी प्रयोगशाला उपकरणों की आवश्यकता होती है और प्रयोग शुरू होने से पहले जटिलताओं के जोखिम को कम किया जाता है, जिससे अनावश्यक लागत और श्रम कम हो जाता है। हम माइक्रोस्कोपी अध्ययन के लिए सीएएम को ऑप्टिकल रूप से पारदर्शी बनाने के लिए जर्दी बोरी से भ्रूण और सीएएम युक्त झिल्ली को अलग करने की एक विधि का भी विस्तार करते हैं। क्योंकि भ्रूण और सीएएम युक्त झिल्ली को उदाहरण के लिए ध्वनिक झिल्ली के साथ एक धारक पर पिन किया जा सकता है, सेटअप को ध्वनिक रूप से पारदर्शीभी बनाया जा सकता है, जिससे माइक्रोस्कोपी और अल्ट्रासाउंड अध्ययनों के संयोजन की अनुमति मिलती है जब प्रकाश पथ जर्दी से प्रभावित होगा। अंत में, हम कई अन्य अल्ट्रासाउंड सेटअपों का वर्णन करते हैं जिनका उपयोग अल्ट्रासाउंड या सीईयूएस इमेजिंग के लिए किया जा सकता है।
यह प्रोटोकॉल 5 से 8 दिन पुराने चिकन भ्रूण और उनके सीएएम को प्राप्त करने और उपयोग करने के तरीके पर तीन तरीकों का वर्णन करता है ताकि कंट्रास्ट-एन्हांस्ड अल्ट्रासाउंड इमेजिंग और माइक्रोबबल-मध्यस्थता दवा वितरण का अध्ययन किया जा सके। शेल से 5-दिन पुराने (धारा 1.2) और 6 से 7-दिन पुराने (धारा 1.3) भ्रूण को शेल से बाहर निकालने के लिए सबसे महत्वपूर्ण कदम हैं: 1) अंडे के सफेद भाग को वापस लेने से पहले पूरे अंडे के छिलके के माध्यम से हवा की थैली में जाने के लिए अंडे के शीर्ष में छोटे छेद बनाएं; 2) खोल में बड़े उद्घाटन के लिए चिकनी किनारे बनाएं। शेल से 8 दिन पुराने भ्रूण को बाहर निकालने की विधि के लिए (खंड 1.4) सबसे महत्वपूर्ण कदम हैं: 1) अंडे के साथ एक अच्छी दरार बनाने के लिए पर्याप्त संख्या में इंडेंट बनाएं; 2) अंडे को पीबीएस में डुबोकर रखें। सभी तरीकों के लिए भ्रूण व्यवहार्यता सुनिश्चित करने के लिए अंडे और इसकी सामग्री को 37 डिग्री सेल्सियस पर रखना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, सीएएम धमनी में इंजेक्शन लगाने से बचें। अध्ययन के दौरान भ्रूण की हृदय गति की नेत्रहीन निगरानी भ्रूण जीवन शक्ति सुनिश्चित करने की सिफारिश की जाती है। भ्रूण के सटीक विकास चरण की पुष्टि करने के लिए, हैमबर्गर और हैमिल्टन22 के संकेत का उपयोग किया जा सकता है।
भ्रूण, सीएएम और जर्दी बोरी को नुकसान को रोकना महत्वपूर्ण है। यह क्षति भ्रूण और सीएएम की व्यवहार्यता, रक्त प्रवाह और दृश्यता को प्रभावित कर सकती है। इसके अलावा, जर्दी की बोरी को नुकसान और परिणामस्वरूप झिल्ली की कम कठोरता सीएएम वाहिकाओं में एक इंजेक्शन को असंभव बनाती है। एक 5 दिन के भ्रूण में अपेक्षाकृत छोटी हवा की थैली होती है, इसलिए शेल में पर्याप्त रूप से बड़ा छेद बनाने में सक्षम होने के लिए जिसके माध्यम से अंडे की सामग्री को हटाया जा सकता है, अंडे की सफेदी के 2 एमएल को वापस लेने की आवश्यकता होती है। नतीजतन, अंडे के छिलके और भ्रूण के बीच अधिक जगह बनाई जाती है। अंडे की सफेदी की वापसी के बाद, टेप के एक टुकड़े को उस छेद को बंद करने की आवश्यकता होती है जहां सुई अंदर गई थी। यदि अंडे का सफेद भाग अभी भी लीक होता है, तो टेप का एक और टुकड़ा लागू करें। इसके अलावा, साइड में छेद पर टेप का अनुप्रयोग अंडे के अंदर एक वैक्यूम बनाता है जो चरण 1.2.2.8 में बड़ा छेद बनने पर अंडे की सामग्री को अपने वजन के कारण बाहर गिरने से रोकता है। भ्रूण या सीएएम को नुकसान तब भी हो सकता है जब अंडे के छिलके का किनारा बहुत तेज था या जब अंडे की सामग्री को वजन करने वाली नाव में बहुत कठोरता से गिरा दिया जाता है, इसलिए अंडे के छिलके को वजन करने वाली नाव के बहुत करीब रखा जाना चाहिए। विकास के दिन 5 और 6 के बीच, सीएएम शेल झिल्ली 32 से जुड़ना शुरू करदेता है। यह लगाव अंडे के छिलके से अंडे की सामग्री को बाहर निकालते समय भ्रूण और सीएएम को नुकसान पहुंचाने का खतरा बढ़ाता है। 6 से 7-दिवसीय इनक्यूबेटेड अंडे के लिए या पीबीएस से भरे कंटेनर में पीबीएस के इंजेक्शन के बाद अंडे को खोलने से, जैसा कि 8-दिवसीय इनक्यूबेटेड अंडे के लिए वर्णित है, क्षति का खतरा कम हो जाता है। सीएएम नस में एक इंजेक्शन के बारे में: यदि पहला इंजेक्शन विफल हो जाता है, तो दूसरा इंजेक्शन उसी नस में आगे बढ़ाया जा सकता है यदि नुकसान मामूली था या किसी अन्य सीएएम नस में था। जर्दी से भ्रूण और सीएएम को अलग करने से भ्रूण और सीएएम वाहिकाओं को ऑप्टिकल रूप से पारदर्शी बनाया जाता है। नतीजतन, भ्रूण पोषक तत्वों के अपने प्राथमिक स्रोत को खोदेता है। पोषक तत्वों का यह नुकसान 6-दिवसीय भ्रूण के लिए ~ 190 की तुलना में 80 बीपीएम की कम हृदय गति के लिए एक स्पष्टीकरण हो सकता है जो अभी भी जर्दी30 के संपर्क में है और इस पृथक्करण प्रक्रिया के बाद 2 घंटे का कम जीवित रहने का समय है। एक और कारक जो कम हृदय गति और जीवित रहने के समय में भूमिका निभा सकता है, वह जर्दी-अलग भ्रूण और सीएएम वाहिकाओं को 37 डिग्री सेल्सियस पर रखने की चुनौती है। एक माइक्रोस्कोप चरण इनक्यूबेटर सहायता कर सकता है। इसके अलावा, जर्दी से सीएएम की टुकड़ी संभवतः ऊतक में यांत्रिक परिवर्तन की ओर ले जाती है क्योंकि झिल्ली तनाव कम हो जाता है। निचले झिल्ली तनाव से आंतरिक वाहिका कतरनी दर में वृद्धि हो सकती है जो कम हृदय गति की ओर ले जाती है।
एक्स ओवो चिकन भ्रूण और सीएएम वाहिकाओं में विवो मॉडल की तरह कुछ सीमाएं हैं, जिसमें केवल कम समय के अवलोकन शामिल हैं, इसके विपरीत उन्नत अल्ट्रासाउंड इमेजिंग और माइक्रोबबल-मध्यस्थता दवा वितरण अध्ययन के लिए। दिन 5 पर 100±23 μL और दिन 634 पर 171±23 μL की छोटी रक्त मात्रा के कारण, ~ 5 μL की अधिकतम मात्रा इंजेक्ट की जा सकती है। विकास के बाद के चरणों (दिन 7 और उससे अधिक) में, पोत की कठोरता बढ़ जाती है और जर्दी लोच कम हो जाती है। यह पुराने भ्रूण में एक सफल इंजेक्शन को जटिल कर सकता है। एक बार जब माइक्रोबबल इंजेक्ट किए जाते हैं, तो वे घंटों तक घूमते हैं क्योंकि चिकन भ्रूण में इस चरण35 में पूरी तरह से विकसित प्रतिरक्षा प्रणाली नहीं होती है। इसलिए, माइक्रोबबल को ~ 6 मिनट के भीतर साफ़ नहीं किया जाता है क्योंकि मनुष्यों में36,37 गैर-बाध्य लक्षित माइक्रोबबल को साफ़ करने के लिए 5-10 मिनट की प्रतीक्षा अवधि के साथ विशिष्ट अल्ट्रासाउंड आणविक इमेजिंग अध्ययन करते हैं। माइक्रोबबल को लक्षित करने के लिए, एवियन एंडोथेलियल कोशिकाओं को बांधने में सक्षम उपयुक्त लिगेंड का उपयोग करने की आवश्यकता होती है जैसे कि पहले एंजियोजेनेसिस मार्कर αवीβ37 के लिए वर्णित किया गया था। इस मॉडल के लिए विचार करने वाले अन्य पहलुओं में पुराने भ्रूण (> 8 दिनों) में जर्दी से भ्रूण और सीएएम वाहिकाओं को अलग करने की बढ़ती कठिनाई और मनुष्यों की तुलना में ~ 20% 39 का कम हेमटोक्रिट है। उत्तरार्द्ध माइक्रोबबल दोलनों को प्रभावित कर सकता है क्योंकि यह ज्ञात है कि माइक्रोबबल दोलन अधिक चिपचिपेवातावरण में नम होते हैं। सीएएम धमनियां सीएएम नसों41,42 की तुलना में कम ऑक्सीजन युक्त होती हैं। इस अंतर को ध्यान में रखा जाना चाहिए जब उदाहरण के लिए रक्त ऑक्सीकरण के फोटोएकॉस्टिक इमेजिंग का अध्ययन किया जाता है।
यहां वर्णित विधियां अल्ट्रासाउंड इमेजिंग या दवा वितरण अध्ययन के दिन अंडे की सामग्री को अंडे के छिलके से बाहर निकालने की अनुमति देती हैं, आमतौर पर इनक्यूबेशन के दिन 5 से 8 पर। यह मौजूदा तरीकों से अलग है जहां अंडे की सामग्री को 3-दिवसीय इनक्यूबेशन के बाद खोल से बाहर निकाला जाता है और आगे एक्स ओवो कल्चर 18,20,21 के रूप में विकसितकिया जाता है। इसके फायदे 5-दिन के लिए 90%, 6-दिन के लिए 75%, 7-दिन के लिए 50%, और 8-दिन पुराने इनक्यूबेटेड अंडों के लिए 60% की उच्च जीवित रहने की दर है, जबकि अंडे के छिलके से निकाले गए 3-दिवसीय भ्रूण के लिए ~ 50% की तुलना में और आगे की गई वृद्धि हुई है। ईएक्स ओवो संस्कृति के लिए 20 और बड़े बाँझ इनक्यूबेटर। 6-से-8-दिन पुराने भ्रूण का अस्तित्व कम है क्योंकि सीएएम खुद को शेल21 से जोड़ना शुरू कर देता है जो निष्कर्षण पर सीएएम झिल्ली को टूटने का अधिक खतरा छोड़ देता है। जर्दी के सीएएम के साथ भ्रूण के पृथक्करण को भ्रूण और सीएएम को ऑप्टिकल रूप से पारदर्शी बनाने का भी वर्णन किया गया है।
अंडे की सामग्री को विभिन्न सेटअपों में रखकर, चिकन भ्रूण और सीएएम का उपयोग अल्ट्रासाउंड इमेजिंग अध्ययनों की भीड़ के लिए किया जा सकता है, जैसे आईवीयूएस, फोटोएकोस्टिक, 2 डी और 3 डी में अल्ट्रासाउंड कंट्रास्ट एजेंटों के बिना या उनके साथ। ध्यान नई अल्ट्रासाउंड स्पंदन योजनाओं को विकसित करने या नए ट्रांसड्यूसर का परीक्षण करने पर हो सकता है। इसके अलावा, मॉडल का उपयोग नए अल्ट्रासाउंड कंट्रास्ट एजेंटों और प्रवाह के तहत रक्त वाहिकाओं में उनके व्यवहार की जांच करने के लिए भी किया जा सकता है। चूंकि माइक्रोबबल-मध्यस्थता दवा वितरण का तंत्र अभीभी अज्ञात है, इसलिए विवो सीएएम मॉडल का उपयोग सेलुलर प्रतिक्रिया के संबंध में माइक्रोबबल व्यवहार का अध्ययन करके तंत्र को स्पष्ट करने में मदद कर सकता है। अंत में, सीएएम वाहिकाओं ने जेनोग्राफ्ट ट्यूमर प्रत्यारोपण 44 की जांच के लिए एक उपयुक्त प्रणाली साबितकी है। यह अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके ट्यूमर इमेजिंग की जांच करने और सीईयूएस का उपयोग करके ट्यूमर के अंदर रक्त प्रवाह की जांच करने के लिए एक मॉडल के रूप में सीएएम पोत का उपयोग करने की संभावना बनाता है। ट्यूमर को आम तौर पर 8 या 9 दिन के भ्रूण 1,14,45 के सीएएम वाहिकाओं पर ग्राफ्ट किया जाता है, जिसके लिए भ्रूण को इनक्यूबेशन के दिन 3 में अंडे के छिलके से बाहर निकाला जाता है और आगे एक्स ओवो विकसित किया जाता है। इस प्रोटोकॉल में वर्णित विधियों का उपयोग ट्यूमर ग्राफ्टिंग के दिन तक ओवो में भ्रूण विकसित करने के लिए किया जा सकता है।
लेखकों का मानना है कि यह पेपर उन शोधकर्ताओं के लिए सहायक होगा जो कंट्रास्ट एजेंटों और प्रवाह अध्ययनों के अनुप्रयोगों के लिए एक इनविवो मॉडल के रूप में चिकन भ्रूण और उनके कोरिओलैंटोइक झिल्ली (सीएएम) का उपयोग करना चाहते हैं।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को एप्लाइड एंड इंजीनियरिंग साइंसेज (टीटीडब्ल्यू) (विडी-प्रोजेक्ट 17543) द्वारा समर्थित किया गया था, जो एनडब्ल्यूओ का हिस्सा था। लेखक बायोमेडिकल इंजीनियरिंग विभाग से रॉबर्ट बेउरस्केन्स, लुक्सी वेई और रेजा पाकदमन जांगाबाद और तकनीकी सहायता के लिए प्रायोगिक चिकित्सा इंस्ट्रूमेंटेशन विभाग से मिचिएल मैंटेन और गीर्ट स्प्रिंगलिंग को धन्यवाद देना चाहते हैं, सभी इरास्मस एमसी यूनिवर्सिटी मेडिकल सेंटर रॉटरडैम, नीदरलैंड से।
Agarose | Sigma-Aldrich | A9539 | |
Clamp (Kocher clamp) | |||
Cling film | |||
Holder with acoustic membrane (CLINIcell 25 cm2) | MABIO, Tourcoing, France | CLINIcell25-50-T FER 00106 | |
Demi water | |||
Disposable plastic Pasteur pipets | VWR | 612-1747 | |
Eggs | Drost Pluimveebedrijf Loenen BV, the Netherlands | Freshly fertilized | |
Fridge 15 °C | |||
Glass capillary needles | Drummond | 1-000-1000 | Inside diameter: 0.0413 inch |
Heating plate 37 °C | |||
Humidified incubator 37 °C | |||
Insect specimen pins | |||
Metal egg holder | Custom made by Experimental Medical Instrumentation at Erasmus MC. See figure 1 A,B | ||
Metal weighing boat holder | Custom made by Experimental Medical Instrumentation at Erasmus MC. See figure 1 C,D | ||
Microinjection system | FUJIFILM VisualSonics | ||
Mineral oil | Sigma-Aldrich | M8410-100ML | |
Needle, 19 G | VWR (TERUMO) | 613-5392 | |
Phosphate-bufferes saline (PBS), 1x | ThermoFisher | 10010023 | |
Petri dish, 1 L | Glass | ||
Petri dish, 90 mm diameter | VWR | 391-0559 | |
Preclinical animal ultrasound machine (Vevo 2100) | FUJIFILM VisualSonics | ||
Probe (MS250) | FUJIFILM VisualSonics | 30 MHz transmit and 15 MHz receive frequency | |
Probe (MS550s) | FUJIFILM VisualSonics | transmission frequency of 40 MHz | |
Scalpel | VWR (SWANN-MORTON) | 233-5363 | |
Scissors, small | Fine Science Tools (FST) | 14558-09 | |
Syringe, 5 mL | VWR (TERUMO) | 613-0973 | |
Table spoon | |||
Tape (Scotch Magic tape) | Scotch | ||
Tissue paper | Tork | ||
Tweezers large | VWR (USBECK Laborgeräte) | 232-0107 | See figure 1E |
Tweezers small | DUMONT Medical, Switzerland | 0103-5/45 | See figure 1F |
Ultrasound contrast agent (custum made F-type) | Produced as described by: Daeichin, V. et al. Microbubble Composition and Preparation for Imaging : In Vitro and In Vivo Evaluation. IEEE TRANSACTIONS ON ULTRASONICS. 64 (3), 555–567 (2017). | ||
Ultrasound contrast agent (MicroMarker) | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | ||
Ultrasound contrast agent (Definity) | Lantheus medical imaging, United States | ||
Ultrasound gel | Aquasonic | ||
Waxi film (Parafilm) | Parafilm | ||
Weighing boats (85 × 85 × 24 mm) | VWR | 611-0094 |