Hémorragie pontine massive par double injection de sang autologue

Summary

Nous présentons un protocole pour établir un modèle massif d’hémorragie de pontine chez un rat par l’intermédiaire de la double injection du sang autologous.

Abstract

Nous fournissons un protocole pour établir un modèle massif d’hémorragie pontine chez un rat. Des rats pesant environ 250 grammes ont été utilisés dans cette étude. Cent microlitres de sang autologous ont été pris de la veine de queue et stereotaxically injectés dans le pont. Le processus d’injection a été divisé en 2 étapes: Premièrement, 10 μL de sang ont été injectés dans un endroit spécifique, en position antéropostérieure (AP) -9,0 mm; latéral (Lat) 0 mm; vertical (Vert) -9,2 mm, suivi d’une deuxième injection du sang résiduel situé à AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm avec un intervalle de 20 minutes. L’essai de faisceau d’équilibre, l’essai de placement de membre, et le neuroscore modifié de Voestch ont été utilisés pour évaluer la fonction neurologique. La formation image de résonance magnétique (MRI) a été employée pour évaluer le volume de l’hémorragie in vivo. Les symptômes de ce modèle étaient en ligne avec des patients présentant l’hémorragie massive de pontine.

Introduction

L’hémorragie intracérébrale représente un cinquième des patients ayant subi un AVC. Le pronostic de l’hémorragie intracérébrale dépend de la vitesse, du volume et de l’emplacement du saignement^1,2. Par rapport à l’hémorragie du cerveau avant, l’hémorragie du tronc cérébral a une mortalité et une morbidité plus élevées³. Environ 40% de l’hémorragie du tronc cérébral se produit dans le pont⁴. L’étiologie et la physiopathologie de l’hémorragie pontine sont assez différentes et moins étudiées que l’hémorragie du cerveau avant^5.

Il existe deux types de modèles animaux d’hémorragie pontine. L’un est le modèle d’hémorragie spontanée induite par infusion de collagénase bactérienne dans le pont^6,7,8. Le plus grand avantage de ce modèle est que le saignement est spontané. Cependant, la collagénase ne peut induire qu’un petit volume d’hémorragie pontine. En outre, la collagénase pourrait causer d’autres blessures au cerveau. L’autre modèle est induit par injection stéréotaxique de sang autologue dans le pont^9. L’avantage de ce modèle est qu’il est facile à maîtriser avec un taux de réussite élevé. Théoriquement, les chercheurs pourraient injecter n’importe quel volume de sang dans n’importe quel endroit du pont. Cependant, en raison de la fuite arrière par la voie de l’aiguille, le volume injecté est limité. Récemment, la méthode de double injection a été promue pour réduire la fuite arrière⁹. Cette méthode injecte du sang autologue deux fois avec un intervalle de 20 minutes entre les injections. La méthode à double injection est appliquée pour provoquer une hémorragie légère (30 μL) et modérée (60 μL) des pontines, mais pas une hémorragie pontine massive. En clinique, la majorité des patients atteints d’hémorragie pontine au pronostic sombre ont une hémorragie massive (plus de 10 ml).

Dans l’étude précédente, nous avons fourni un protocole pour établir un modèle d’AVC ischémique pontin chez le rat^10. Dans cette étude, nous modifions la méthode existante de double injection et fournissons un protocole détaillé pour induire une hémorragie pontine massive chez un rat par double injection de sang autologue de 100 μL à deux endroits différents dans le pont.

Protocol

Le protocole a été examiné et approuvé par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux du deuxième hôpital affilié de l’Université médicale de Guangzhou. Des rats ont été fournis par le centre animal de l’université médicale du Sud. Le plan expérimental est illustré à la figure 1. 1. Animal et instruments Utilisez des rats Sprague-Dawley mâles âgés de 8 semaines pesant 250 ± 10 g. Loger les rats pen…

Representative Results

Au total, 25 animaux ont été utilisés, 3 pour des injections de sang de contrôle, 6 pour 30 μL, 6 pour 60 μL et 10 pour des injections sanguines de 100 μL. Un rat qui a reçu une injection de sang autologue de 100 μL (1/10) est décédé dans les 24 heures suivant la chirurgie. Des tests comportementaux ont été effectués le jour 1, le jour 3, le jour 7 et le jour 14 après chirurgie. Les scores pour le groupe témoin …

Discussion

Dans la présente étude, nous avons fourni un protocole pour générer un modèle massif de rat d’hémorragie de pontine. Ce modèle peut être utilisé pour la recherche sur le mécanisme physiopathologique et le pronostic de l’hémorragie pontine massive.

Tout au long de l’expérience, 25 rats ont été utilisés, dont un seul est mort. La vérification de MRI, d’anatomie brute, et de la souillure IL a indiqué que cette méthode a eu un taux de mortalité très bas et un taux de r?…

Materials

100ml Saline solution	Guangdong yixiang	191222201 C1	Preparing heparin diluent
100μl Microinjector	Shanghai Gaoge		Injection of autologous blood
1ml Syringe	Jiangsu Zhiyu	20191014	Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol	Shandong Lierkang		Disinfection of rat tail
Adhesive tape	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Animal anesthesia system	RWD	R510-31S-6	Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Blades	Shanghai Feiying	74-C	For gross anatomy
Bone cement	Shanghai Xinshiji	20180306	Surgicl instruments
Brain tank	Shenzhen LEIYEA		For gross anatomy
Butorphanol tartrate	Jiangsu Hengrui		For pain management
Electric cranial drill	Nanjing  Darwin biotechnology	20180090018	Making a burr hole on the skull
EP tube	Nantong Surui		Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream	Yunnan pharmacy		Eyes protection
HE dye liquor	Solarbio	G1120	For HE staining
Heating pad	Dangerous Jungle	JR01	Keeping warm
Heparin sodium injection	Chengdu Haitong Pharmacal Company	190701	Preparing heparin diluent
IndoPhors	Guoyao of China		Sterilization
Isoflurane	RWD	20080701	Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Micro-injection pump	Baoding Leifu	TFD03-01-C	Injection of autologous blood
MRI system	Philips		Confirmation of infarction in vivo
Needle holder	Shanghai Jinzhong	J32020	Surgicl instruments
Penicilin	Guoyao of China		Infection Prevention
Q-tips	Jiangxi Songhe		Surgicl instruments
Scalp heedle	Jiangxi Hongda	20200313	Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel	Shanghai Kaiyuan	170902	Surgicl instruments
Shearing scissors	Shanghai Jinzhong	Y00040	Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus	RWD	900-00001-00	for surgical positioning
Surgical towel	Xinxiang Huakangweicai	20070601	Surgicl instruments
Suture needle	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Suture scissors	Shanghai Jinzhong	J25041	Surgicl instruments
Tissue holding forcepts	Shanghai Jinzhong	J31080	Surgicl instruments