यह लेख एक छोटे चीरे के साथ चूहों में तीव्र इस्केमिया स्थापित करने के लिए एक कुशल शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण को दर्शाता है। इस दृष्टिकोण को किसी भी प्रयोगशाला उन्नयन के बिना अधिकांश अनुसंधान समूहों द्वारा लागू किया जा सकता है।
इस अध्ययन का उद्देश्य चूहों में तीव्र इस्केमिया को प्रेरित करने के लिए एक संशोधित शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण को लागू करना और मूल्यांकन करना है जिसे अधिकांश पशु प्रयोगशालाओं में लागू किया जा सकता है। फेमोरल धमनी (डीएलएफए) के दोहरे बंधन के लिए पारंपरिक दृष्टिकोण के विपरीत, डीएलएफए करने के लिए समीपस्थ फेमोरल धमनी (एफए) को बेनकाब करने के लिए सही इंजीनियङ्क्षरग क्षेत्र पर एक छोटा चीरा बनाया गया था। फिर, एक 7-0 सीवन का उपयोग कर, चीरा घुटने क्षेत्र के लिए घसीटा गया था डिस्टल एफए का पर्दाफाश करने के लिए । द्विपक्षीय हिंद अंगों पर चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) सर्जरी के बाद एफए occlusion का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया गया था । सर्जरी के 0, 1, 3, 5 और 7 दिनों में, हिंद अंगों की कार्यात्मक वसूली का नेत्रहीन मूल्यांकन किया गया था और टारलोव पैमाने का उपयोग करके वर्गीकृत किया गया था। डीएलएफए के 7 दिन बाद जानवरों को इच्छामृत्यु देने के बाद हिस्टोलॉजिक मूल्यांकन किया गया था। प्रक्रियाओं को सफलतापूर्वक दस ApoE में दाहिने पैर पर प्रदर्शन कियागया-/चूहों, और कोई चूहों बाद में अवलोकन के दौरान मर गया । सभी 10 चूहों में चीरा आकार 5 मिमी (4.2 ± 0.63 मिमी) से कम थे। एमआरआई परिणामों से पता चला है कि इस्कीमिक पक्ष में एफए रक्त प्रवाह स्पष्ट रूप से अवरुद्ध था । टारलोव स्केल के परिणामों ने दिखा दिया कि प्रक्रिया के बाद हिंद अंग समारोह में काफी कमी आई और धीरे-धीरे अगले 7 दिनों में बरामद हुआ। हिस्टोलॉजिक मूल्यांकन ने इस्कीमिक पक्ष पर एक महत्वपूर्ण भड़काऊ प्रतिक्रिया दिखाई और इस्कीमिक हिंद अंग में माइक्रोवैस्कुलर घनत्व कम कर दिया। अंत में, यह अध्ययन डीएलएफए का उपयोग करके हिंद अंग इस्केमिया (एचली) करने के लिए एक लघु चीरा का उपयोग करके एक संशोधित तकनीक का परिचय देता है।
परिधीय धमनी रोग (पैड) जैसे संवहनी रोगों में अनुसंधान के लिए प्रीक्लिनिकल पशु मॉडल की अपूर्ण आवश्यकता है। निदान और उपचार में उन्नत विकास के बावजूद, 20181में पैड के साथ 200 मिलियन से अधिक रोगी थे, और उनकी संख्या लगातार बढ़ रही है। यद्यपि कई उपन्यास चिकित्सीय दृष्टिकोण2,3,4,5,6, 7 का वर्णन किया गया है, लेकिन नैदानिक अनुप्रयोग में इन चिकित्सीय तौर-तरीकों का सफल अनुवाद एक चुनौतीपूर्ण कार्य बना हुआ है। इसलिए , मानव रोग की स्थिति का अनुकरण करने वाले वीवो प्रयोगात्मक मॉडलों में विश्वसनीय और प्रासंगिक होना आवश्यक है ताकि पैड6,7के इलाज के लिए इन नए चिकित्सीय दृष्टिकोणों के संभावित तंत्र और दक्षता की जांच की जा सके ।
हाइपरलिपिडेमिया और एथेरोस्क्लेरोसिस (एएस) पैड के विकास के लिए मुख्य जोखिम कारक हैं। ApoE-/-चूहों (एक उच्च वसा आहार पर) असामान्य वसा चयापचय और हाइपरलिपिडेमिया प्रदर्शित करते हैं और बाद में चिकित्सकीय प्रासंगिक पैड अनुकरण करने के लिए सबसे अच्छा विकल्प के रूप में ApoE-/-चूहों प्रतिपादन atherosclerotic सजीले टुकड़े विकसित करते हैं । प्रीक्लिनिकल एचली पशु मॉडल फेमोरल धमनी (डीएलएफए) के दोहरे बंधन के माध्यम से उत्पन्न होते हैं, जो दुनिया भर की प्रयोगशालाओं में सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला दृष्टिकोण है8,9,10,11,12,13,14, 15 तीव्र-ऑन-क्रॉनिक इस्केमिया का अनुकरण करने के लिए। हालांकि, इस दृष्टिकोण को आमतौर पर अपेक्षाकृत बड़े और आक्रामक चीरा की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, यह अनिवार्य रूप से जानवरों (विशेष रूप से चूहों) को दर्द की चोट और सूजन से पीड़ित करता है, जो बाद के प्रयोगात्मक परिणामों को भी प्रभावित करता है5,6,16,17। यह कागज एक बहुत छोटे चीरा का उपयोग करके APOE में एक तीव्र पर पुरानी HLI मॉडल का वर्णन करताहै-/चूहों ।
यह अध्ययन किसी भी आवश्यक प्रयोगशाला उन्नयन के बिना 3-4 मिमी चीरा के माध्यम से एफए के समीपस्थ और डिस्टैल क्षेत्रों में डबल लिगेशन का उपयोग करकेAPOE-/-चूहों में एक HLI मॉडल स्थापित करने के लिए एक संशोधित, सर?…
The authors have nothing to disclose.
लेखक उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए विटोरिया स्कुड, अलेक्जेंडर श्लुंड और फेलिक्स होर्नर का धन्यवाद करते हैं।
10x Phosphate buffer saline | Roth | 9143.1 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
30% H2O2 | Roth | 9681.2 | Used for immunohistochemistry stain |
6-0 absorbable sutures | PROLENE | 8776H | Used for stitching the skin |
6-0 absroable suture | PROLENE | EP8706 | Used in Surgery |
7-0 absorbable sutures | PROLENE | EH8021E | Used for ligating the artery |
7-0 absroable suture | PROLENE | EP8755 | Used in Surgery |
Acetic acid | Roth | 6755.1 | Used for haematoxylin and eosin stain |
Albumin Fraktion V | Roth | 8076.2 | Used for immunohistochemistry stain |
Autoclave | Systec GmbH | Systec VX-150 | Used for the sterilisation of the surgical instruments |
Axio vert A1 microscope | Carl Zeiss | ZEISS Axio Vert.A1 | Used for viewing and taking the pictures from haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Bruker BioSpec 94/20 AVIII | Bruker Biospin MRI GmbH | N/A | Scan the femoral artery blockage |
Buprenovet Sine 0,3mg/ml | Bayer AG | 2542 (WDT) | Used in post operative pain-management. Dose – 0.1 mg/kg body weight every 8 hours for 48 h after operation |
CD31 antibody | Abcam | ab28364 | Used for immunohistochemistry stain |
Eosin Y solution 0.5 % in water | Roth | X883.1 | Used for haematoxylin and eosin stain |
Epitope Retrieval Solution pH 6 | Leica Biosystems | 6046945 | Used for immunohistochemistry stain |
Ethanol ≥ 99,5 % | Roth | 5054.1 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Fentanyl | Cayman Chemical | 437-38-7 | Used for anesthesia |
Fine point forceps | Medixplus | 93-4505S | Used for separating the artery from nerve and vein |
Glass bead sterilisator | Simon Keller | Type 250 | Used for sterilisation of the surgical instruments |
Graefe iris forceps curved | VUBU | VUBU-02-72207 | Used for blunt separation of skin and subcutaneous tissue |
Hair Remover cream, Veet (with aloe vera) | Reckitt Benckiser | 108972 | Remove hair from mice hind limbs |
Heating plate | STÖRK-TRONIC | 7042092 | Keep the satble temperature of mice |
Hematoxylin | Roth | T865.2 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Leica surgical microscope | Leica | M651 | Enlarge the field of view to facilitate the operation |
Liquid DAB+Substrate Chromogen System | Dako | K3468 | Used for immunohistochemistry stain |
Male ApoE-/- mice | Charles River Laboratories | N/A | Used for establish the Peripheral artery disease mice model |
Medetomidine | Cayman Chemical | 128366-50-7 | Used for anesthesia |
Micro Needle Holder | Black & Black Surgical | B3B-18-8 | Holding the needle |
Micro suture tying forceps | Life Saver Surgical Industries | PS-MSF-145 | Used to assist in knotting during surgery |
Microtome | Biobase | Bk-Mt268m | Used for tissue sectioning |
Midazolam | Ratiopharm | 44856.01.00 | Used for anesthesia |
MR-compatible Small Animal Monitoring and Gating System Model 1025 | SA Instruments | N/a | monitoring vital signs of animal during MRI scan |
Octeniderm farblos | Schülke & Mayr GmbH | 180212 | used for disinfection of the skin |
Ointment for the eyes and nose | Bayer AG | 1578675 | Keep the eyes wet under the anesthesia |
Paraformaldehyde | Roth | 0335.1 | Used for fixation of the tissue |
Pentobarbital | Nembutal | 76-74-4 | Used for anesthesia |
Saline | DeltaSelect | 1299.99.99 | Used for anesthesia |
Spring handle scissors with fine, sharp tips | Black & Black Surgical | B66167 | Used for cutting the artery |
SuperCut Scissors | Black & Black Surgical | B55992 | Used for cutting the skin |
Triton X-100 | Roth | 9002-93-1 | Used for immunohistochemistry stain |
Western diet, 1.25% Cholesterol | ssniff Spezialdiäten GmbH | E15723-34 | Diet for the mice |
Xylene | Roth | 4436.3 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |