एक जिगर उत्थान रणनीति के रूप में तीन आयामी कोलेजन मैट्रिक्स पाड़ प्रत्यारोपण
Summary
लिवर की बीमारियां कई कारणों से प्रेरित होती हैं जो फाइब्रोसिस या सिरोसिस को बढ़ावा देती हैं। स्वास्थ्य ठीक करने के लिए प्रत्यारोपण ही एकमात्र विकल्प है। हालांकि, प्रत्यारोपण योग्य अंगों की कमी को देखते हुए, विकल्प ों का पता लगाया जाना चाहिए । हमारे शोध एक पशु मॉडल से जिगर के ऊतकों में कोलेजन मचान के प्रत्यारोपण का प्रस्ताव है ।
Abstract
दुनिया भर में लिवर की बीमारियां मौत का प्रमुख कारण हैं। अत्यधिक शराब की खपत, एक उच्च वसा वाले आहार, और हेपेटाइटिस सी वायरस संक्रमण फाइब्रोसिस, सिरोसिस, और/या हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा को बढ़ावा देते हैं । लिवर प्रत्यारोपण उन्नत रोग चरणों में रोगियों के जीवन काल में सुधार और विस्तार करने के लिए चिकित्सकीय अनुशंसित प्रक्रिया है। हालांकि, प्रत्यारोपण के केवल 10% सफल रहे हैं, अंग की उपलब्धता, presurgical और पोस्टर्जिकल प्रक्रियाओं के साथ, और ऊंचा लागत सीधे उस परिणाम के साथ सहसंबद्ध । ऊतक बहाली के लिए एक विकल्प के रूप में अतिरिक्त सेल्युलर मैट्रिक्स (ईसीएम) मचान उभरे हैं। जैव अनुकूलता और भ्रष्टाचार स्वीकृति उन बायोमैटेरियल्स की मुख्य लाभकारी विशेषताएं हैं। यद्यपि यकृत के आकार और सही कार्य को बहाल करने की क्षमता का मूल्यांकन यकृत हेपेटेक्टॉमी मॉडल में किया गया है, लेकिन एक्सटिरेटेड यकृत द्रव्यमान की मात्रा को बदलने के लिए मचान या किसी प्रकार के समर्थन का उपयोग मूल्यांकन नहीं किया गया है।
एक चूहे के जिगर में एक गोजातीय कोंडील से कोलेजन मैट्रिक्स पाड़ (सीएमएस) के ज़ेनोइम्प्लांटेशन के साथ आंशिक हेपेटेक्टोमी किया गया था। बाएं जिगर पालि ऊतक हटा दिया गया था (लगभग ४०%), और सीएमएस का एक समान अनुपात शल्य चिकित्सा प्रत्यारोपित किया गया था । सर्जिकल प्रक्रिया से पहले और बाद में लिवर फंक्शन परीक्षणों का मूल्यांकन किया गया था। 3, 14 और 21 दिनों के बाद, जानवरों को इच्छामृत्यु दी गई, और स्थूल और हिस्टोलॉजिक मूल्यांकन किए गए। 3 और 14 दिनों में, सीएमएस के आसपास आदिपोज ऊतक देखा गया था, जिसमें अस्वीकृति या संक्रमण का कोई नैदानिक सबूत नहीं था, जैसा कि 21 दिन में पोत नियोफॉर्मेशन और सीएमएस पुनर्अभवितरण था। हेमटॉक्सीलिन और ियोसिन (एच एंड ई) और मैसन के ट्राइक्रोम स्टेनिंग के साथ मनाया गया, सीएमएस में एक तुच्छ सूजन प्रक्रिया और आसन्न कोशिकाओं के प्रवास का हिस्टोलॉजिक सबूत था। सीएमएस जिगर के ऊतकों में अच्छा प्रदर्शन करने के लिए दिखाया गया था और ऊतक उत्थान और पुरानी जिगर की बीमारियों में मरंमत का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी विकल्प हो सकता है ।
Introduction
लिवर होरोस्टेसिस और प्रोटीन उत्पादन को बनाए रखने में शामिल सबसे महत्वपूर्ण अंगों में से एक है1. दुर्भाग्य से, जिगर की बीमारी दुनिया भर में मौत का प्रमुख कारण है। यकृत क्षति के उन्नत चरणों में, जिसमें सिरोसिस और हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा शामिल हैं, यकृत प्रत्यारोपण चिकित्सकीय रूप से अनुशंसित प्रक्रिया है। हालांकि, दानदाताओं की कमी और सफल प्रत्यारोपण की कम दर के कारण, ऊतक इंजीनियरिंग (टीई) और पुनर्योजी चिकित्सा (आरएम) में नई तकनीकोंको 2,3विकसित किया गया है।
टीई में सूजन, फाइब्रोटिक, और एडेमेटस अंगों और ऊतकों की बहाली को बढ़ावा देने के लिए स्टेम सेल, मचान और विकास कारकों4 का उपयोग शामिल है1,5,6। मचान में उपयोग किए जाने वाले बायोमैटेरियल्स देशी ईसीएम की नकल करते हैं, जो निर्देशित सेलुलर रिमॉडलिंग7के लिए भौतिक, रासायनिक और जैविक संकेत प्रदान करते हैं। कोलेजन डर्मिस, टेंडन, आंत और पेरिकार्डियम8, 9से प्राप्त सबसे प्रचुर मात्रा में प्रोटीनमेंसे एक है। इसके अलावा, बायोप्रिंटिंग या इलेक्ट्रोस्पिनिंग10, 11के माध्यम से दो और त्रि-आयामी मचानों का उत्पादन करने के लिए कोलेजन को बायोपॉलिमर के रूप में प्राप्त किया जासकताहै। यह समूह जिगर के ऊतकों के उत्थान के लिए हड्डी के स्रोत से कोलेजन के उपयोग की रिपोर्ट करने वाला पहला समूह है। एक अन्य अध्ययन में गोजातीय कोलेजन से संश्लेषित मचानों के उपयोग की रिपोर्ट की गई है, जो त्वचा से प्राप्त किया गया था, सजातीय और बारीकी से स्थित छिद्रों के साथ, उनके बीच किसी भी संचार के बिना12।
डिसेलुलराइजेशन देशी ईसीएम को संरक्षित करता है, जिससे स्टेम सेल क्षमता13,14के साथ कोशिकाओं के बाद के समावेश की अनुमति होती है। हालांकि, यह प्रक्रिया अभी भी चूहों, चूहों, खरगोशों, सूअरों, भेड़, मवेशियों और घोड़ों3,14से यकृत, हृदय, गुर्दे, छोटी आंत और मूत्राशय में प्रायोगिक चरण में है। वर्तमान में, पुनः प्राप्त जिगर द्रव्यमान की मात्रा को किसी भी पशु हेपेटेक्टॉमी मॉडल में प्रतिस्थापित नहीं किया जाता है। हालांकि, अतिरिक्त सहायता या नेटवर्क (बायोमैटेरियल्स) का उपयोग जो सेल प्रसार और एंजियोजेनेसिस को सक्षम बनाता है, यकृत पैरान्चिमल कार्यों की त्वरित बहाली के लिए आवश्यक हो सकता है। इस प्रकार, मचानों को पुराने यकृत रोगों में ऊतकों को पुनर्जीवित करने या मरम्मत करने के लिए वैकल्पिक दृष्टिकोण के रूप में नियोजित किया जा सकता है, बदले में, दान और यकृत प्रत्यारोपण की नैदानिक जटिलताओं के कारण सीमाओं को नष्ट करना।
Protocol
Representative Results
Discussion
अंग प्रत्यारोपण लिवर फाइब्रोसिस या सिरोसिस वाले मरीजों में इलाज का मुख्य आधार है। कुछ रोगियों को इस प्रक्रिया से लाभ होता है, जिससे प्रतीक्षा सूची में रोगियों के लिए चिकित्सीय विकल्प प्रदान करना आवश?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों को प्रायोगिक चिकित्सा इकाई की प्रयोगशाला पशु सुविधा के कर्मियों का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं, नर्स कैरोलिना Baños जी तकनीकी और शल्य चिकित्सा समर्थन के लिए, मार्को ई. Gudiño जेड microphotos में समर्थन के लिए, और एरिक अपो जिगर हिस्टोलॉजी में समर्थन के लिए । राष्ट्रीय परिषद ने विज्ञान और प्रौद्योगिकी के लिए इस शोध(CONACyT),अनुदान संख्या SALUD-2016-272579 और PAPIIT-UNAM TA200515 का समर्थन किया ।
Materials
| Anionic detergent | Alconox | Z273228 | |
| Biopsy cassettes | Leica | 3802453 | |
| Camera DMX | Nikon | DXM1200F | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5424 | |
| Chlorhexidine gluconate 4% | BD | 372412 | |
| Cover glasses 25 mm x 40 mm | Corning | 2980-224 | |
| Eosin | Sigma-Aldrich | 200-M | CAS 17372-87-1 |
| Ethyl alcohol, pure | Sigma-Aldrich | 459836 | CAS 64-17-5 |
| Flunixine meglumide | MSD | Q-0273-035 | |
| Glass slides 75 mm x 25 mm | Corning | 101081022 | |
| Hematoxylin | Merck | H9627 | CAS 571-28-2 |
| Hydrochloric acid 37% | Merck | 339253 | CAS 7647-01-0 |
| Ketamine | Pisa agropecuaria | Q-7833-028 | |
| Light microscopy | Nikon | Microphoto-FXA | |
| Microtainer yellow cape | Beckton Dickinson | 365967 | |
| Microtome | Leica | RM2125 | |
| Model animal: Wistar rats | Universidad Nacional Autónoma de México | ||
| Nylon 3-0 (Dermalon) | Covidien | 1750-41 | |
| Polypropylene 7-0 | Atramat | SE867/2-60 | |
| Povidone-iodine10% cutaneous solution | Diafra SA de CV | 1.37E+86 | |
| Scaning electronic microscopy | Zeiss | DSM-950 | |
| Sodium hydroxide, pellets | J. T. Baker | 3722-01 | CAS 1310-73-2 |
| Software ACT-1 | Nikon | Ver 2.70 | |
| Stereoscopy macroscopy | Leica | EZ4Stereo 8X-35X | |
| Sterrad 100S | Johnson and Johnson | 99970 | |
| Surgipath paraplast | Leica | 39601006 | |
| Synringe of 1 mL with needle (27G x 13 mm) | SensiMedical | LAN-078-077 | |
| Tissue Processor (Histokinette) | Leica | TP1020 | |
| Tissue-Tek TEC 5 (Tissue embedder) | Sakura Finetek USA | 5229 | |
| Trichrome stain kit | Sigma-Aldrich | HT15 | |
| Unicell DxC600 Analyzer | Beckman Coulter | BC 200-10 | |
| Xylazine | Pisa agropecuaria | Q-7833-099 | |
| Xylene | Sigma-Aldrich | 534056 | CAS 1330-20-7 |
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