यहां हम मध्यस्थ रिलीज परख पेश करते हैं, मानव आईजीई रिसेप्टर से संक्रमित चूहे बेसोफिलिक ल्यूकेमिया सेल लाइन का उपयोग करके, आमतौर पर टाइप 1 एलर्जी प्रतिक्रियाओं में देखे जाने वाले प्रभावक कोशिकाओं के डीग्रानुलेशन का अनुकरण करने के लिए। यह विधि एलर्जी की जैविक गतिविधि को अत्यधिक संवेदनशील, प्रजनन योग्य और सिलाई तरीके से जांचती है।
मध्यस्थ रिलीज परखें विट्रो इम्यूनोग्लोबुलिन ई (आईजीई) में विश्लेषण करती हैं- मध्यस्थता डेग्रेशन और इम्सेक्टर कोशिकाओं द्वारा मध्यस्थों के स्राव, जैसे मस्तूल कोशिकाएं और बासोफिल, ख्यात एलर्जी के धारावाहिक कमजोर पड़ने के साथ उत्तेजना पर। इसलिए, ये परख एक आवश्यक उपकरण का प्रतिनिधित्व करते हैं जो वीवो डिग्रेशन प्रक्रिया की नकल करता है, जो संवेदनशील रोगियों में या त्वचा चुभन परीक्षणों में एलर्जी के संपर्क पर होता है। इसके अतिरिक्त, इन परखों को आमतौर पर प्रोटीन की एलर्जी क्षमता और रोगियों की सेरा की प्रतिक्रियाशीलता की जांच करने के लिए नियोजित किया जाता है । इसके साथ- इसके साथ, हम एक अमर चूहे बेसोफिल ल्यूकेमिया सेल लाइन का उपयोग करके एक साधारण 2-दिवसीय प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं जो मानव उच्च-आत्मीयता आईजीई प्लाज्मा-झिल्ली रिसेप्टर (एफसीεआरआई) के साथ संक्रमित और मानवीकृत है। मध्यस्थ रिलीज परख का यह संस्करण ठोस मैट्रिस के लिए एंटीजन को स्थिर करने की आवश्यकता के बिना एक मजबूत, संवेदनशील और प्रजनन योग्य इन विट्रो सेल-आधारित प्रणाली है। प्रोटोकॉल में निम्नलिखित चरण शामिल हैं: (1) मानव सेरा की निष्क्रियता, (2) कोशिकाओं की कटाई, सीडिंग और निष्क्रिय संवेदीकरण, (3) एंटीजन के साथ उत्तेजना मध्यस्थ रिहाई का कारण बनती है, और (4) जारी भड़काऊ मध्यस्थों के लिए किराए के रूप में β-हेक्सामिनिरेसे गतिविधि को मापने, जैसे कि हिस्टामाइन। परख सेल डिग्रेशन को ट्रिगर करने के लिए एलर्जी-आईजीई क्रॉस-लिंकिंग की क्षमता का आकलन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण का प्रतिनिधित्व करती है और एलर्जी अर्क को मानकीकृत करने के लिए लागू किया जा सकता है, मरीजों की प्रतिक्रियाशीलता की तुलना मामूली या प्रमुख एलर्जी और एलर्जिक अर्क (पराग, बिल्ली डैंडर, आदि) से करने के लिए, एलर्जी के मुताबिकलोगों, आइसोफॉर्म, और गुना-वेरिएंट (जैसे, हाइपोएलर्जिनिटी) की शक्ति की जांच करने के साथ-साथ एलर्जिक गतिविधि पर लिगांड के प्रभावों की तुलना करना। एक और हाल ही में आवेदन एलर्जी इम्यूनोथेरेपी के पाठ्यक्रम में उपचार प्रभावकारिता की निगरानी करने के लिए परख का उपयोग भी शामिल है।
टाइप I अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाएं, जो एक संबंधित एंटीजन के लिए विशिष्ट इम्यूनोग्लोबुलिन ई (आईजीई) उत्पादन की विशेषता है, दुनिया की लगभग एक तिहाई आबादी को प्रभावित करती है। ये प्रतिक्रियाएं अस्थमा और राइनोकॉनजंक्टिवाइटिस जैसे कई एलर्जी अभिव्यक्तियों से जुड़ी हुई हैं और यहां तक कि प्रणालीगत जीवन-धमकी वाली प्रतिक्रियाओं का कारण बन सकती हैं1। वीवो परीक्षणों के विपरीत, एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसोरेंट परख (एलिसा) जैसे इम्यूनोकेमिकल दृष्टिकोण एंटीबॉडी के लक्ष्य बाध्यकारी की जांच के लिए पूरी तरह से उपयुक्त हैं, लेकिन प्रोटीन के कार्यात्मक पहलू को संबोधित नहीं करते हैं जो तत्काल अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं का कारण बन सकता है। ठोस समर्थन (जैसे, एलिसा प्लेट्स) पर एलर्जी का स्थिरीकरण उनकी संरचनात्मक अखंडता में परिवर्तन और एलर्जी प्रासंगिकएपिटोप्स 2के विनाश का कारण बन सकता है। यहां तक कि त्वचा चुभन परीक्षण (एसपीटी), कुछ एलर्जी के खिलाफ संवेदीकरण की पुष्टि करने के लिए सबसे आम उपकरण, रोगसूचक आईजीई-मध्यस्थता खाद्य एलर्जी या एलर्जी उपलब्धता3,4का पता लगाने से संबंधित उनकी सीमाएं हैं। एलर्जी की जैविक शक्ति का परीक्षण करने के लिए एक नैतिक, अत्यधिक विशिष्ट, संवेदनशील और लागत प्रभावी विधि खोजने के लिए एक प्रकार मैं अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रिया पैदा करने के लिए, तथाकथित मध्यस्थ रिलीज परख स्थापित की गई है।
इन परखों का सिद्धांत संवेदीकरण चरण और आईजीई की साथ-साथ क्षमता के बाद की घटनाओं पर निर्भर करता है कि वे प्रभावकार कोशिकाओं की सतह पर व्यक्त किए गए उच्च-आत्मीयता रिसेप्टर्स की α-श्रृंखला से बांधें, जैसे मस्तूल कोशिकाएं और बासोफिल। आईजीई मुख्य रूप से म्यूकोसल से जुड़े लिम्फोइड ऊतक में प्लाज्मा कोशिकाओं द्वारा उत्पादित होता है। यद्यपि यह रक्त में सबसे कम प्रचुर मात्रा में इम्यूनोग्लोबुलिन (गैर-अटॉपिक व्यक्तियों में लगभग 0.05%) है, लेकिन इसके पास एलर्जी के लक्षणों का मुख्य कारण असाधारण रूप से उच्च जैविक गतिविधि है। आईजीई का आधा जीवन 2-3 दिनों से कई हफ्तों और यहां तक कि महीनों तक बढ़ सकता है जब प्रभावक कोशिकाओं पर इसके रिसेप्टर्स से बंधे होते हैं। दो रिसेप्टर-बाउंड आईजीई अणुओं के चर क्षेत्र में एंटीजन के बाद बाध्यकारी होने के बाद उनके क्रॉस-लिंकिंग हो जाते हैं जिसके बाद प्रभावक कोशिका में डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग कैस्केड को शामिल किया जाता है जिससे डिग्रेंशन होता है और कई भड़काऊ मध्यस्थों की रिहाई होती है, जिससे वेसोडिलेशन होता है, जैसे हिस्टामाइन, सेरीन प्रोटीज (जैसे, ट्राइप्टास), और प्रोस्टैगलैंडिन5,67,और प्रोस्टैगलैंडिन्स। इंटरल्यूकिन 4 (आईएल-4) और आईएल-13 जैसे साइटोकिन्स का स्राव भड़काऊ टी हेल्पर 2 (टीएच 2) प्रतिक्रिया के रखरखाव और बी कोशिकाओं के कक्षा-स्विचन को आईजीई-उत्पादक प्लाज्मा कोशिकाओं5,8,9के रखरखाव के लिए जिम्मेदार है। दूसरी ओर, जारी थ्रोमबॉक्सेन ब्रोंकोकोकंस्ट्रक्शन का कारण बनता है, और ल्यूकोट्रिन चिकनी मांसपेशियों के संकुचन के साथ-साथ संवहनी रिसाव को उत्तेजित करते हैं, और वायुमार्ग सूजन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं जिससे अस्थमा या एलर्जी राइनाइटिस10,11होता है।
उपरोक्त मध्यस्थों के अधिकांश विश्लेषण के लिए अनुसंधान उपकरण स्थापित किया गया है, हालांकि कुछ प्रमुख नुकसान के साथ । ट्राइप्टाज़ परख मास्ट सेल एक्टिवेशन के माध्यम से प्रणालीगत एनाफिलैक्सिस के माप के लिए उपयुक्त नैदानिक दृष्टिकोण हैं लेकिन एलर्जी निदान में उनकी संवेदनशीलता और विशिष्टता एसपीटी जैसे सोने के मानक तरीकों की तुलना में बहुत गलत है। दूसरी ओर, सिस्टीनाइल ल्यूकोट्रिन का कहना है कि β-लैक्टम या गैर-स्टेरॉयड विरोधी भड़काऊ दवाओं के लिए एलर्जी का निदान करने में सक्षम नहीं हैं12। एलर्जी प्रतिक्रियाओं में जारी एक प्रमुख मध्यस्थ के रूप में हिस्टामाइन के माप के लिए प्रोटोकॉल पहले से ही 1960 के दशक में स्थापित किए गए थे । एक बार परिधीय रक्त में जारी होने के बाद, हिस्टामाइन को तुरंत हिस्टामाइन मिथाइलट्रांसफेरेस द्वारा अपमानित किया जाता है जिसके परिणामस्वरूप केवल कुछ मिनटों का प्लाज्मा आधा जीवन होता है, जिससे इसका विश्लेषण काफी चुनौतीपूर्ण13हो जाता है। इसकी अस्थिरता के अलावा, हिस्टामाइन की निगरानी में दवा एलर्जी के साथ-साथ वाणिज्यिक खाद्य प्रोटीन और ततैया विष12के लिए कम विशिष्टता और संवेदनशीलता दिखाई गई थी।
प्रभावक सेल लाइनों के साथ इन विट्रो मॉडल को रिलीज परख करने के लिए एलर्जी रोगियों से अलगाव और बेसोफिल की खेती की श्रम-गहन प्रक्रियाओं के विकल्प के रूप में पेश किया गया है। इसलिए, आरबीएल-2H3 सेल लाइन का उपयोग करके चूहा बेसोफिलिक ल्यूकेमिया-(आरबीएल-) आधारित परख3 स्थापितकी गई है। चूंकि यह सेल लाइन मानव आईजीई को बाध्यकारी करने में सक्षम नहीं है, इसलिए यह पहली बार मानव आईजीई प्लाज्मा-झिल्ली रिसेप्टर (एफसीεआरआई) की α-, β-और γ-श्रृंखला से संक्रमित थी। मानव α-श्रृंखला के अभिव्यक्ति के स्तर और एकरूपता के लिए कई क्लोन उत्पन्न और परीक्षण किए गए हैं, जिनमें से क्लोन आरबीएल-30/25 इन विट्रो परीक्षण के लिए सबसे होनहार उम्मीदवार के रूप में उभरा । ट्रांस संक्रमित क्लोन के रिसेप्टर सक्रियण पर प्रेरित सिग्नलिंग झरना कैल्शियम जुटाने परख के माध्यम से परीक्षण किया गया था। हिस्टामाइन रिलीज के लिए डिग्रेशन और सरोगेट के लिए एक संकेतक के रूप में, ग्लिसोसोमल एंजाइम β-हेक्सोमिनिडास मापा गया था, जिसमें उच्च स्थिरता का महत्वपूर्ण लाभहै 14। RBL-30/25 कोशिकाओं का उपयोग कर मध्यस्थ रिलीज १००% तक पहुंचता है और इसलिए, एलर्जी रोगियों से प्राप्त सेरा का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जाता है । परख वाणिज्यिक एलर्जी अर्क के साथ संवेदनशील कोशिकाओं को चुनौती देने के बाद मध्यस्थ रिहाई के लिए परीक्षण किया गया था । इससे यह निष्कर्ष आया कि विभिन्न निर्माताओं से प्राप्त एलर्जी अर्क की संरचना (कुल प्रोटीन सामग्री के बारे में 60 गुना तक) में जबरदस्त भिन्नता है और इसका उपयोग नैदानिक (जैसे, एसपीटी) या चिकित्सीयदृष्टिकोण3,15, 16के लिए कियाजाताहै।
इसके साथ ही, हम एलर्जी दाताओं से सीरम का उपयोग करके मध्यस्थ रिलीज परख करने के लिए आरबीएल प्रोटोकॉल का विस्तृत विवरण प्रदान करते हैं। निष्क्रिय संवेदीकरण के दौरान, सीरम में आईजीई को बासोफिलिक कोशिकाओं की सतह पर व्यक्त उच्च आत्मीयता FcεR1 रिसेप्टर द्वारा कब्जा कर लिया जाता है। एंटीजन-उत्तेजना पर, एंटीजन के लिए विशिष्ट बाध्य आईजीई क्रॉस-लिंक्ड हैं, सेल डिग्रेंशन को ट्रिगर करते हैं और मध्यस्थ β-हेक्सोसामिनिडास की रिहाई होती है। β-हेक्सामिनिडास की गतिविधि को बाद में उपयुक्त सब्सट्रेट का उपयोग करके मापा जाता है। परख के लिए, huRBL-2H3 कोशिकाओं का उपयोग किया गया था, और निम्नलिखित प्रोटोकॉल में huRBL करार दिया। प्रोटोकॉल 1 μg/mL से 0.1 pg/ml एलर्जी से लेकर 8 कदम पतला 1:10 के साथ एक मानक एंटीजन कमजोर ताव श्रृंखला का वर्णन करता है ।
इसके साथ वर्णित huRBL सेल आधारित मध्यस्थ रिलीज परख एक मजबूत तरीका है कि आसानी से प्रदर्शन किया जा सकता है और किसी भी प्रयोगशाला में लागू किया जा सकता है । एकमात्र आवश्यकता यह है कि कोशिकाओं को बाँझ परिस्थितियों में खेती करने की आवश्यकता है । परख का उपयोग मरीजों के आईजीई-क्रॉसलिंकिंग और बेसोफिल डिग्रेशन17को पैदा करने के लिए एलर्जी या एलर्जिक स्रोत की संभावना का आकलन करने के लिए किया जाता है। परख आसानी से किसी भी एलर्जी या एलर्जी स्रोत के लिए अनुकूलित किया जा सकता है जब तक कि रोगी के सीरम विशिष्ट आईजीई के उच्च स्तर के साथ, ब्याज की एलर्जी को पहचानने के लिए उपलब्ध है। किसी भी संभावित साइटोटॉक्सिक प्रभावों के लिए खाते में मध्यस्थ रिलीज परख के अलावा सेल व्यवहार्यता परख करने की सिफारिश की जाती है जिसके परिणामस्वरूप खराब परख प्रदर्शन हो सकता है। यह सीरा या अन्य सीरम-व्युत्पन्न साइटोटॉक्सिक प्रभावों के अधूरे पूरक-निष्क्रियता के कारण हो सकता है। यहां तक कि एंटीजन ही, उदाहरण के लिए, प्रोटियोलिटिक/एंजाइमेटिक गतिविधि के कारण, हुर्बल कोशिकाओं को नुकसान पहुंचा सकता है । हम आमतौर पर संभावित साइटोटॉक्सिक प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए एमटीटी (3-(4,5-डिमेथिल्थियाजोल-2-आईएल)-2,5-डिफेनिल्टेट्राजोलम ब्रोमाइड के साथ सेल व्यवहार्यता परख का उपयोग कर रहे हैं। परख आसानी से सेल सुपरनैंट एकत्र और स्थानांतरित किया गया था के बाद छोड़ दिया huRBL कोशिकाओं के साथ किया जा सकता है (प्रोटोकॉल के चरण 6.3. देखें) । एलर्जेन-आईजीई बाइब्लूजन के आधार पर व्यक्तिगत एलर्जी या जटिल अर्क की एलर्जी क्षमता का निर्धारण करने के लिए, एलिसा और पश्चिमी ब्लॉटिंग जैसे अन्य इम्यूनोकेमिकल तरीकों की तुलना में, यह परख न केवल आईजीई की बाध्यकारी एलर्जी का पता लगा सकती है बल्कि आईजीई-मध्यस्थता बेसोफिल डिग्रेशन 18 को भड़काने के लिए आईजीई-मध्यस्थता बेसोफिल डिग्रेंगुलेशन 18 को भड़काने के लिए आईजीई-मध्यस्थता बेसोफिल डिग्रेशन18को भड़काने के लिए न केवल आईजीई की कार्यक्षमता को माप सकती है। इस प्रकार, यह मरीजों के सेरा का उपयोग कर पूर्व वीवो एलर्जी लक्षणों की गंभीरता का अध्ययन करने में सहायता कर सकता है । परख को शास्त्रीय निष्क्रिय क्यूटनेस एनाफिलैक्सिस परीक्षणों की तुलना में अधिक सुसंगत और कुशल बताया गया है क्योंकि परख आरबीएल-2H3 कोशिकाओं का उपयोग करती है, जो प्राथमिक कोशिकाओं की तुलना में परिणामों में कम परिवर्तनशीलता को संभालने और उत्पादन करने में अपेक्षाकृत आसान हैं, जैसे मस्तूल कोशिकाएं या मानव बासोफिल19,20। इसके अलावा, परख एलर्जी की जैविक गतिविधि का एक अच्छा प्रतिनिधित्व प्रदान करता है और किसी दिए गए जटिल नमूने3में कुल एलर्जी सामग्री का सटीक अनुमान लगा सकता है। प्रोटोकॉल में कुछ कदमों की समस्या निवारण के लिए कृपया तालिका 1का उल्लेख करें ।
मध्यस्थ रिलीज परख के इस संस्करण की प्रयोज्यता के बारे में, यह ज्यादातर अनुसंधान प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल किया गया है, लेकिन यह भी उनकी जैविक गतिविधि के आधार पर एलर्जी अर्क के मानकीकरण के लिए । इसमें एसपीटी समाधानों के विभिन्न बैचों, उकसावे परीक्षण समाधान के विश्लेषण के साथ-साथ एलर्जी-विशिष्ट इम्यूनोथेरेपी के लिए उपयोग किए जाने वाले अर्क शामिल हैं; जैसा कि पराग, बिल्ली डैंडर, हाउस डस्ट माइट, और मूंगफली के अर्क के साथ – साथ मधुमक्खी के जहर3,17,21के लिए दिखाया गया है। इस तकनीक को विशेष रूप से खाद्य एलर्जी के निदान में लागू किया जा सकता है, क्योंकि यह मूंगफली, दूध, गेहूं और अंडे22जैसे जटिल खाद्य उत्पादों में एलर्जी घटकों की न्यूनतम मात्रा का भी पता लगा सकता है। इस संबंध में, पशु खाद्य एलर्जी की एलर्जी के आकलन के लिए एक मूल्यवान उपकरण के रूप में भी सूचित किया गया है, जैसे कि ट्रोपोमायोसिन, और गैर-एलर्जी23से शक्तिशाली एलर्जी को अलग करने में सहायता कर सकते हैं। एक शोध उपकरण के रूप में, परख का उपयोग खाद्य प्रसंस्करण के प्रभाव का अध्ययन करने के साथ-साथ एलर्जी के लिए बाध्यकारी लिगांड के प्रभाव और एलर्जी24, 25पर इसके प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए कियाजाताहै। उदाहरण के लिए, बेट वी 1 के बंधन को एलर्जेन-आईजीई क्रॉस-लिंकिंग को प्रभावित नहीं करने के लिए दिखाया गया था, हालांकि इसकी थर्मल और प्रोटियोलिटिकस्थिरता 25में वृद्धि हुई। परख का उपयोग मामूली और प्रमुख एलर्जी के लिए रोगी की प्रतिक्रियाशीलता की तुलना करने के साथ-साथ एलर्जेन समरूपों और आइसोफॉर्म की क्रॉस-रिएक्टिविटी की जांच करने के लिए किया जा सकता है, जैसा कि बेट वी 1 और अक्षजमान खाद्य एलर्जी कोर ए 1(चित्रा 3)का उपयोग करके हमारे उदाहरण में दिखाया गया है। एलर्जेन आइसोफॉर्म के बारे में, मध्यस्थ रिलीज परख का उपयोग प्रमुख एलर्जेन अम्ब को रैगवीड पराग(एम्ब्रोसिया आर्टेमिसिफोलिया)में सबसे शक्तिशाली आईजीई-रिएक्टिव आइसोफॉर्म के रूप में 1.01 की पहचान करने के लिए किया गया था। इसकी तुलना में, रैगवीड पराग अर्क, अम्ब ए १.०२ और अम्ब ए १.०३ में पहचाने गए अन्य दो पहचाने गए आइसोफॉर्म ने मरीजों के आईजीई26के प्रति कम प्रतिक्रिया दिखाई ।
हाल के वर्षों में, परख संभावित एंटी-एलर्जिक यौगिकों और एलर्जी के उपन्यास हाइपोएलर्जेनिक वेरिएंट का अध्ययन करने के लिए लागू की गई है, जो एलर्जी-विशिष्ट इम्यूनोथेरेपी27, 28के लिए उपयुक्त उम्मीदवारों की पहचान में सहायता कर रही है। एक और उपन्यास दृष्टिकोण एलर्जी-विशिष्ट इम्यूनोथेरेपी के दौरान उपचार प्रभावकारिता की निगरानी करने के लिए परख का उपयोग करना है। इस संबंध में, हमारे अनुसंधान समूह ने एक एचआरबीएल परख अवरोध प्रणाली विकसित की, जो एलर्जी-विशिष्ट इम्यूनोथेरेपी29के दौरान रोगी के लक्षण स्कोर की कमी के साथ अच्छी तरह से सहसंबद्ध है। परख भी एलर्जी प्रेरित IgE-मध्यस्थता degranulation30पर TGFο1 के इम्यूनोसप्रेसिव प्रभावों का अध्ययन करने का प्रस्ताव किया गया है ।
परख की सीमाएं यह हैं कि भले ही हुर्बल कोशिकाओं में मस्तूल कोशिकाओं या बेसोफिल की कुछ विशेषताएं होती हैं, लेकिन वे इन प्रभावक कोशिकाओं के प्राकृतिक कार्य की पूरी तरह से नकल नहीं करते हैं। उदाहरण के लिए, मस्त कोशिकाएं व्यापक रूप से पैटर्न मान्यता रिसेप्टर टोल-जैसे रिसेप्टर 4 (टीएलआर 4) को व्यक्त करती हैं, जो रोगजनक मान्यता के लिए आवश्यक है, जबकि आरबीएल-2H3 कोशिकाओं31में इसकी पूरी तरह से कमी है। कार्यक्षमता में इस अंतर के कारण, परख पूरी तरह से वास्तविक जीवन की स्थिति की नकल नहीं करता है, जिसे डेटा की व्याख्या करते समय ध्यान में रखा जाना चाहिए। इसके अलावा, चूंकि हुर्बल कोशिकाएं कैंसर बेसोफिलिक कोशिकाएं हैं, इसलिए संस्कृति की स्थितियों में परिवर्तन और लंबे समय तक खेती करने से फेनोटाइपिक मतभेद हो सकते हैं जिससे विभिन्न प्रयोगशालाओं के बीच परिणाम बदल सकते हैं20। एक अन्य पहलू एलर्जी एकाग्रता का विकल्प है जिसे इस विधि को अनुकूल करते समय ध्यान में रखा जाना चाहिए क्योंकि उच्च एलर्जी सांद्रता के परिणामस्वरूप प्रोटीज या एंडोटॉक्सिन18की उच्च मात्रा की उपस्थिति के कारण गैर-आईजीई मध्यस्थता डेग्रेशन हो सकता है। अन्य सीमाएं अपेक्षाकृत उच्च विशिष्ट आईजीई स्तर (आरएएसटी वर्ग 5-6) के साथ मानव सेरा पर निर्भरता हैं, और सेल संस्कृति प्रणालियों की आवश्यकता है, जो एक बाधा बनी हुई है जिसे दैनिक नैदानिक दिनचर्या में तकनीक को लागू करने के लिए दूर करने की आवश्यकता है।
इन सीमाओं के अलावा, एचयूआरबी परख एलर्जी रोगों के निदान और उपचार के लिए एक मूल्यवान अनुसंधान उपकरण का प्रतिनिधित्व करती है और इसका उपयोग विभिन्न प्रकार के अनुप्रयोगों में किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
लेखक मानवीकृत/एफसीडब्ल्यूआरआई-संक्रमित आरबीएल कोशिकाओं को उपलब्ध कराने और इस शोध पद्धति पत्र को लिखने के लिए अपनी सहमति देने के लिए आणविक एलर्जी विज्ञान विभाग के प्रो डॉ स्टीफन विथ्स, पॉल-एहरलिच-इंस्टीटयूट, लैंगन, जर्मनी को धन्यवाद देना चाहते हैं । हम उत्कृष्ट प्रतिक्रिया प्रदान करने के लिए प्रो डॉ फातिमा फरेरा का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । हम आगे प्रो डॉ रोनाल्ड वान री और प्रायोगिक इम्यूनोलॉजी विभाग के डॉ जाप Akkerdaas, एम्स्टर्डम विश्वविद्यालय चिकित्सा केंद्र, स्थान एएमसी, शुक्रिया अदा करना चाहते हैं, एम्स्टर्डम, नीदरलैंड, इस तरीके कागज में प्रदान की प्रतिनिधि डेटा प्रकाशित करने के लिए अपनी सहमति देने के लिए, जो परियोजना BM4SIT के पाठ्यक्रम में उत्पन्न किए गए थे-एलर्जी के लिए नवाचार (www.BM4SIT.eu) । लेखकों के काम ऑस्ट्रिया के विज्ञान कोष (परियोजना P32189) द्वारा समर्थित किया गया है, साल्ज़बर्ग प्राथमिकता कार्यक्रम एलर्जी-कैंसर-BioNano अनुसंधान केंद्र के विश्वविद्यालय द्वारा, कैंसर और एलर्जी में डॉक्टरेट कार्यक्रम प्रतिरक्षा द्वारा-आईसीए ऑस्ट्रिया के विज्ञान कोष (FWF W01213) द्वारा वित्त पोषित है, और BM4SIT परियोजना (अनुदान संख्या 601763) द्वारा यूरोपीय संघ के सातवें फ्रेमवर्क कार्यक्रम 7 से ।
4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-glucosaminide | Sigma | M2133 | |
96-well plate for huRBL cells (Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Delta-treated, flat-bottom microplate) | ThermoFisher Scientific | 167008 | |
96-well plate for substrate solution and cell supernatant (Greiner Bio-One non-treated 96-well microplates) | Fisher Scientific | 655101 | |
Bovine serum albumin (BSA) | Sigma | 10735078001 | |
Citric acid | Applichem | 131018 | |
Dulbecco's phosphate-buffered saline (DPBS without calcium and magnesium) | Sigma | D8537 | |
G418 | Sigma | A1720 | |
Glycine | Applichem | A3707 | |
Heat-inactivated fetal calf/bovine serum (FCSi) | Sigma | F0804 | |
L-Glutamine (200 mM) | Sigma | G7513 | |
Minimum Essential Medium Eagle with Alpha Modification, with ribonucleosides, deoxyribonucleosides and sodium bicarbonate, without L-glutamine, liquid, sterile-filtered, suitable for cell culture | Sigma | M8042 | |
Opti-MEM reduced serum medium, GlutaMAX supplement | Gibco/ThermoFisher Scientific | 51985034 | |
Penicillin-Streptomycin (10K units Pen. 10 mg/mL Strep.) | Sigma | P4333 | |
Sodium chloride (NaCl) | Applichem | A2942 | |
Sodium hydrogen carbonate (NaHCO3) | Applichem | 131638 | |
Triton X-100 | Sigma | X100 | |
Trypsin-EDTA | Sigma | 59418C | |
Tyrode’s salt | Sigma | T2145 |