Vi har utvecklat en enda plattform för att spåra djurs beteende under två klättringsfiberberoende associativa inlärningsuppgifter. Den billiga designen möjliggör integration med optogenetiska eller bildbehandlingsexperiment riktade mot klättring av fiberassocierad cerebellär aktivitet.
Klättringsfiberingångar till Purkinje-celler ger lärorika signaler som är kritiska för cerebellumberoende associativt lärande. Att studera dessa signaler hos huvudfasta möss underlättar användningen av bildbehandling, elektrofysiologiska och optogenetiska metoder. Här utvecklades en billig beteendeplattform (~ $ 1000) som möjliggör spårning av associativt lärande hos huvudfästa möss som lokomote fritt på ett löphjul. Plattformen innehåller två vanliga associativa inlärningsparadigmer: eyeblink-konditionering och fördröjd taktil skrämseln konditionering. Beteendet spåras med hjälp av en kamera och hjulrörelsen av en detektor. Vi beskriver komponenterna och installationen och tillhandahåller ett detaljerat protokoll för träning och dataanalys. Denna plattform möjliggör införlivande av optogenetisk stimulering och fluorescensavbildning. Designen gör det möjligt för en enda värddator att styra flera plattformar för träning av flera djur samtidigt.
Pavlovian konditionering av sub-sekunds association mellan stimuli för att framkalla ett konditionerat svar har länge använts för att undersöka cerebellärberoende lärande. Till exempel, i klassisk fördröjning eyeblink konditionering (DEC), lär sig djur att göra en vältad skyddande blinkning som svar på en neutral villkorlig stimulans (CS; t.ex. en blixt av ljus eller hörselton) när den paras upprepade gånger med en ovillkorlig stimulans (US; t.ex. en luftpuff applicerad på hornhinnan) som alltid framkallar en reflexblinkning, och som kommer vid eller nära slutet av CS. Det inlärda svaret kallas ett konditionerat svar (CR), medan reflexsvaret kallas det okonditionerade svaret (UR). Hos kaniner stör cerebellumspecifika lesioner denna form avlärande 1,2,3,4. Vidare ger Purkinje-cellkomplexspikar, drivna av deras klättringsfiberingångar5, en nödvändig 6,7 och tillräcklig 8,9-signal för förvärv av korrekt tidsinsatta CR.
På senare tid har klättrande fiberberoende associativa inlärningsparadigmer utvecklats för huvud fixerade möss. DEC var det första associativa inlärningsparadigmet som anpassades till denna konfiguration10,11. DEC hos huvudbestämda möss har använts för att identifiera cerebellära regioner 11,12,13,14,15,16,17 och kretselement 11,1 2,13,14,15,18,19 som krävs för förvärv och utrotning av uppgifter. Detta tillvägagångssätt har också använts för att visa hur den fysiologiska representationen av uppgiftsparametrar på cellulär nivå utvecklas med inlärning 13,15,16.
Förutom eyeblink utvecklades det fördröjda DTSC-paradigmet (delayle tactile conditioning) nyligen som en ny associativ inlärningsuppgift för huvudbundna möss20. Konceptuellt liknar DEC, DTSC innebär presentationen av en neutral CS med en US, en kran mot ansiktet som är tillräcklig i intensitet för att engagera en skrämsloreflex21,22 som UR. I DTSC-paradigmet läses både UR och CR ut som bakåtrörelse på ett hjul. DTSC har nu använts för att avslöja hur associativt lärande förändrar cerebellär aktivitet och mönster för genuttryck20.
I detta arbete utvecklades en metod för flexibel tillämpning av DEC eller DTSC i en enda plattform. Stimulus- och plattformsattributen schematiseras i figur 1. Designen innehåller förmågan att spåra djurbeteende med en kamera samt en roterande kodare för att spåra musrörelse på ett hjul. Alla aspekter av dataloggning och försöksstruktur styrs av parade mikrokontroller (Arduino) och en enkortsdator (SBC; Hallon Pi). Dessa enheter kan nås via ett medföljande grafiskt användargränssnitt. Här presenterar vi ett arbetsflöde för installation, förberedelse och körning av experiment samt en anpassad analyspipeline för datavisualisering.
Plattformen med tillhörande protokoll som beskrivs här kan användas för att på ett tillförlitligt sätt spåra djurbeteende i två sensoriska associativa inlärningsuppgifter. Varje uppgift beror på intakt kommunikation genom klättringsfibervägen. I designen som beskrivs här införlivar vi element för att underlätta inlärning och inspelning / störning av cerebellär respons. Dessa inkluderar ett hjul för att möjliggöra fri rörelse11,18 samt huvu…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöds av bidrag från National Institutes of Mental Health NRSA F32 MH120887-03 (till G.J.B.) och R01 NS045193 och R01 MH115750 (till S.S-H.W.). Vi tackar Drs. Bas Koekkoek och Henk-Jan Boele för hjälpsamma diskussioner för att optimera DEC-installationen och Drs. Yue Wang och Xiaoying Chen för hjälpsamma diskussioner för att optimera DTSC-installationen.
"B" Quick Base For C&B METABOND – 10 mL bottle | Parkell | S398 | Dental cement solvent |
"C" Universal TBB Catalyst – 0.7 mL | Parkell | S371 | Catalyst |
#8 Washers | Thorlabs | W8S038 | Washers |
0.250" (1/4") x 8.00" Stainless Steel Precision Shafting | Servocity | 634172 | 1/4" shaft |
0.250” (0.770") Clamping Hub | Servocity | 545588 | Clamping hub |
1/4" to 6 mm Set Screw Shaft Coupler- 5 pack | Actobotics | 625106 | Shaft-coupling sleeve |
1/4"-20 Cap Screws, 3/4" Long | Thorlabs | SH25S075 | 1/4" bolt |
100 pcs 5 mm 395–400 nm UV Ultraviolet LED Light Emitting Diode Clear Round Lens 29 mm Long Lead (DC 3V) LEDs Lights +100 pcs Resistors | EDGELEC | ED_YT05_U_100Pcs | CS LEDs |
2 m Micro HDMI to DVI-D Cable – M/M – 2 m Micro HDMI to DVI Cable – 19 pin HDMI (D) Male to DVI-D Male – 1920 x 1200 Video | Star-tech | HDDDVIMM2M | Raspberry Pi4B to monitor cable |
256 GB Ultra Fit USB 3.1 Flash Drive | SanDisk | SDCZ430-256G-G46 | USB thumb drive |
3.3 V–5 V 4 Channels Logic Level Converter Bi-Directional Shifter Module | Amazon | B00ZC6B8VM | Logic level shifter |
32 GB 95 MB/s (U1) microSDHC EVO Select Memory Card | Samsung | MB-ME32GA/AM | microSD card |
4.50" Aluminum Channel | Servocity | 585444 | 4.5" aluminum channel |
48-LED CCTV Ir Infrared Night Vision Illuminator | Towallmark | SODIAL | Infrared light array |
4PCS Breadboards Kit Include 2PCS 830 Point 2PCS 400 Point Solderless Breadboards for Proto Shield Distribution Connecting Blocks | REXQualis | B07DL13RZH | Breadboard |
5 Port Gigabit Unmanaged Ethernet Network Switch | TP-Link | TL-SG105 | Ethernet switch |
5 V 2.5 A Raspberry Pi 3 B+ Power Supply/Adapter | Canakit | DCAR-RSP-2A5 | Power supply for Raspberry Pi 3B+ |
5-0 ETHILON BLACK 1 x 18" C-3 | Ethicon | 668G | Sutures |
6 mm Shaft Encoder 2000 PPR Pushpull Line Driver Universal Output Line Driver Output 5-26 V dc Supply | Calt | B01EWER68I | Rotary encoder |
Ø1/2" Optical Post, SS, 8-32 Setscrew, 1/4"-20 Tap, L = 1", 5 Pack | Thorlabs | TR1-P5 | Optical posts |
Ø1/2" Optical Post, SS, 8-32 Setscrew, 1/4"-20 Tap, L = 2", 5 Pack | Thorlabs | TR2-P5 | Optical posts |
Ø1/2" Optical Post, SS, 8-32 Setscrew, 1/4"-20 Tap, L = 4", 5 Pack | Thorlabs | TR4-P5 | Optical posts |
Ø1/2" Optical Post, SS, 8-32 Setscrew, 1/4"-20 Tap, L = 6", 5 Pack | Thorlabs | TR6-P5 | Optical posts |
Ø1/2" Post Holder, Spring-Loaded Hex-Locking Thumbscrew, L = 2" | Thorlabs | PH2 | Optical post holder |
Adapter-062-M X LUER LOCK-F | The Lee Co. | TMRA3201950Z | Solenoid valve luer adapter |
Aeromat Foam Roller Size: 36" Length | Aeromat | B002H3CMUE | Foam roller |
Aluminum Breadboard 10" x 12" x 1/2", 1/4"-20 Taps | Thorlabs | MB1012 | Aluminum breadboard |
Amazon Basics HDMI to DVI Adapter Cable, Black, 6 Feet, 1-Pack | Amazon | HL-007347 | Raspberry Pi3B+ to monitor cable |
Arduino Uno R3 | Arduino | A000066 | Arduino Uno (microcontroller board) |
Arduino Due | Arduino | A000062 | Arduino Due (microcontroller board) |
Bench Power Supply, Single, Adjustable, 3 Output, 0 V, 24 V, 0 A, 2 A | Tenma | 72-8335A | Power supply |
Clear Scratch- and UV-Resistant Cast Acrylic Sheet, 12" x 24" x 1/8" | McMaster Carr | 8560K257 | Acrylic sheet |
CNC Stepper Motor Driver 1.0–4.2 A 20–50 V DC 1/128 Micro-Step Resolutions for Nema 17 and 23 Stepper Motor | Stepper Online | B06Y5VPSFN | Stepper motor driver |
Compact Compressed Air Regulator, Inline Relieving, Brass Housing, 1/4 NPT | McMaster Carr | 6763K13 | Air source regulator |
Cotton Swab | Puritan | 806-WC | Cotton swab |
Dell 1908FP 19" Flat Panel Monitor – 1908FPC | Dell | 1908FPC | Computer monitor |
Flex Cable for Raspberry Pi Camera | Adafruit | 2144 | camera serial interface cable |
High Torque Nema 17 Bipolar Stepper Motor 92 oz·in/65 N·cm 2.1 A Extruder Motor | Stepper Online | 17HS24-2104S | Stepper motor |
Isoflurane | Henry Schein | 66794001725 | Isoflurane |
Krazy Maximum Bond Permanent Glue, 0.18 oz. | Krazy Glue | KG483 | Cyanoacrylate glue |
Lidocaine HCl | VetOne | 510212 | Lidocaine |
Low-Strength Steel Hex Nut, Grade 2, Zinc-Plated, 1/4"-20 Thread Size | McMaster Carr | 90473A029 | Nuts |
M3 x 50 mm Partially Threaded Hex Key Socket Cap Head Screws 10 pcs | Uxcell | A16040100ux1380 | M3 bolt |
NEMA 17 Stepper Motor Mount | ACTOBOTICS | 555152 | Stepper motor mount |
Official Raspberry Pi Power Supply 5.1 V 3 A with USB C – 1.5 m long | Adafruit | 4298 | Power supply for Raspberry Pi 4B |
Optixcare Dog & Cat Eye Lube Lubricating Gel, 0.70-oz tube | Optixcare | 142422 | Opthalimic ointment |
Precision Stainless Steel Ball Bearing, Shielded, Trade No. R188-2Z, 13000 rpm Maximum Speed | McMaster-Carr | 3759T57 | Bearing |
Premium Female/Female Jumper Wires – 40 x 6" | Adafruit | 266 | Wires |
Premium Female/Male 'Extension' Jumper Wires – 40 x 6" (150 mm) | Adafruit | 826 | Wires |
Premium Male/Male Jumper Wires – 40 x 6" | Adafruit | 758 | Wires |
Radiopaque L-Powder for C&B METABOND – 5 g | Parkell | S396 | Dental cement powder |
Raspberry Pi (3B+ or 4B) | Adafruit | 3775 or 4295 | Raspberry Pi |
Raspberry Pi NoIR Camera Module V2 – 8MP 1080P30 | Raspberry Pi Foundation | RPI3-NOIR-V2 | Raspberry NoIR V2 camera |
Right-Angle Bracket, 1/4" (M6) Counterbored Slot, 8-32 Taps | Thorlabs | AB90E | Right-angle bracket |
Right-Angle Clamp for Ø1/2" Posts, 3/16" Hex | Thorlabs | RA90 | Right-angle optical post clamp |
Right-Angle End Clamp for Ø1/2" Posts, 1/4"-20 Stud and 3/16" Hex | Thorlabs | RA180 | Right-angle end clamp |
RJ45 Cat-6 Ethernet Patch Internet Cable | Amazon | CAT6-7FT-5P-BLUE | Ethernet cable |
Rotating Clamp for Ø1/2" Posts, 360° Continuously Adjustable, 3/16" Hex | Thorlabs | SWC | Rotating optical post clamps |
Spike & Hold Driver-0.1 TO 5 MS | The Lee Co. | IECX0501350A | Solenoid valve driver |
Swivel Base Adapter | Thorlabs | UPHA | Post holder adapter |
USB 2.0 A-Male to Micro B Cable, 6 feet | Amazon | 7T9MV4 | USB2 type A to USB2 micro cable |
USB 2.0 Printer Cable – A-Male to B-Male, 6 Feet (1.8 m) | Amazon | B072L34SZS | USB2 type B to USB2 type A cable |
VHS-M/SP-12 V | The Lee Co. | INKX0514900A | Solenoid valve |
Zinc-Plated Steel 1/4" washer, OD 1.000" | McMaster Carr | 91090A108 | Washers |