このプロトコルは、修正された動脈吻合戦略に焦点を当てたマウス腎臓移植の新しい外科的技術を提示する。簡便で安全な尿管・膀胱吻合法を含む血管縫合技術も提示される。これらの改変は、手術時間を短縮し、マウス腎臓移植手順の成功率を向上させる。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
この記事について
サマリー
要約
マウスの腎臓移植は、複雑で困難な手術手順です。この操作の主要な手順を示す出版物はほとんどありません。したがって、この記事では、この技術を紹介し、この操作に関連する外科的警告を指摘します。加えて、従来の手順と比較して重要な修正が実証される。まず、腹部大動脈のパッチを切断し、尿管動脈を含む腎動脈の近位分岐部がドナー腎臓 エンブロック と共にトランステクトされるように調製する。これは、尿管壊死のリスクを軽減し、尿路閉塞の発症を回避します。第二に、血管吻合の新しい方法は、腎移植再灌流が既に開始された後にオペレータが吻合のサイズを柔軟に増減することを可能にすることが実証される。これにより、血管狭窄および腹腔内出血の発症が回避される。第三に、外傷を引き起こさない繊細なドナー尿管およびレシピエント膀胱の吻合を可能にする技術が示されている。このプロトコルを採用することで、手術時間を短縮し、レシピエントの膀胱への損傷を軽減し、レシピエントマウスの手術成功率を大幅に高めることができる。
概要
Sakowitzらが1973年に腎臓移植のマウスモデルを初めて開発して以来1、移植虚血傷害および同種免疫拒絶反応のメカニズムを研究し、同種移植生存を延長し、おそらく免疫学的耐性を達成することを目的とした新しい治療法を開発するための重要な実験ツールであることが証明されている。しかし、外科的技術は複雑で非常に要求が厳しく、時には腎前非免疫学的腎臓移植不全2につながる血管吻合狭窄、虚血およびその後の移植尿管の壊死によって引き起こされる腎後不全、移植尿管の吻合の狭窄および/または尿流出の破壊につながるレシピエントの尿膀胱などの合併症を有することが証明されている。これらはすべて、マウスにおける腎移植がさらに開発されておらず、したがって広く使用されていない理由である。血管および尿路合併症のない効果的かつ長期的に安定したマウス腎臓移植モデルを確立することは、腎免疫媒介性だけでなく感染症にも焦点を当てた移植分野の多くの研究にとって、依然としてかけがえのない意義を有する3。さらに、肺、心臓、腸移植などのマウスモデルにおける他の臓器移植と比較して4,5、マウス腎臓移植モデルは、主要な組織適合性抗原格差3,6
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
プロトコル
すべての動物実験は、科学的目的で使用される動物の保護に関する欧州議会の指令2010/63/EUのガイドラインに従って実施されました(動物倫理カード:ニーダーザクセン州食品医薬品安全省、#33.9-42502-04-11/0492)。滅菌手術器具および消耗品(オートクレーブ処理)を使用して処置を行い、手術領域をできるだけ無菌に保つようにしてください。
注:C57BL/6J雄マウスはドナーおよびレシピエント(同系移植モデル)として、Balb/cマウスは腎臓同種移植片レシピエント(急性同種移植片拒絶モデル9)として役立った。マウスを8〜12週間齢にし、移植時に〜25〜30gの体重を量り、標準的な条件下で飼育した。この原稿で報告されたデータは、マウス手術で経験した4人の外科医によって生成された。
1. 準備手順
- 手術には、マイクロはさみ、マイクロ鉗子、針ホルダー、マイクロ止血クランプ、電気外科ペンなどの顕微鏡機器のセットを使用してください。7/0er、10/0er、または4/0erナイロンモノフィラメントを使用して縫合を行います。
- 麻酔のために、無意識を誘発するために約40〜60秒間イソフルラン(2%)を吸入するためにマウスを箱に入れます。
- マウスを麻酔したら、マウスの重量を量ります。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
結果
移植後4週間後、改変された技術および従来の技術の両方が、天然のレシピエント対側腎臓と比較した場合、腎尿細管萎縮14,15の中等度の徴候を示した(図1)。腎尿細管萎縮の程度は、2つの異なる技術の間に有意差を示さなかった。移植後12週間の腎臓のマッソン・ゴールドナーのトリクローム染色14,15は、正常な非移植腎臓と比較して、均一に間質組織線維症の明らかな徴候を示した(図2)。
我々は以前、この新しい結び目のない技術(n = 175)の結果を調査し、手順の技術的側面および術中および術後の合併症( 表1も参照)の点で古典的なアプローチ(n = 122)と比較した<.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
マウスにおける皮膚移植モデルは、同種免疫拒絶反応事象を研究するために単純かつ容易に実施できるが、心臓16 および腎臓移植10 後の同種免疫関連炎症性変化をより具体的に調査するための外科的技術は、複雑かつ非常に要求が厳しいことが証明されている。移植腎臓内科医の視点から見ると、効果的で長期的に安定したマウス腎移植モデルの確立は、多くの機能的および免疫学的研究にとって依然としてかけがえのない意義を有する。さらに、他の臓器移植と比較して、マウス腎臓移植モデルは、主要な組織適合性抗原に一定の違いがあっても、長期間の生存を達成することができ、拒絶反応の長期的発達または同種免疫寛容を確立するための前提条件因子の同定における免疫調節機構を研究する機会を意味する3。
前述のように、マウスにおける腎臓移植は困難な手順であり、経験豊富な外科医でさえも成功率は40〜95%の間で大きく異なる10、17、
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
謝辞
私たちは、ナレーションの助けをくれたTiantian Bai博士チーム、医療イラストレーションの彼女の助けのためにミスMian Paoに感謝します。この研究は、国際協力を促進するためのドイツ研究財団(DFG)(HO2581/4-1からAH)と中国国家科学財団(NSFC; #81760291 to FJ)によって部分的に支援されました。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 30G針 | ブラウン | 456300 | - |
| アセプロマジン | CPファーマ | トランキゾル | |
| P-Bepanthen眼軟膏 | ハウス-アポテーケ | PZN | 01578675- |
| ボンマイクロ鉗子 | FST | 11083-07 | - |
| 断熱材および酸素供給装置用ボックス | RUSKINN | INVIV-C57BL | |
| / 6J マウス | チャールズ川。ドイツ | カタログ番号なし | - |
| カルプロフェン | ゾエティス | リマジル50mg / ml | - |
| カテーテル-FEP 26G | テルモ | サーフロ-W | - |
| クリップアプリケーター鉗子スタイル | - | ||
| 湾曲した鉗子 | WPI14114-G-Cutasept | ||
| 皮膚消毒 | VWR | BODL980365 | - |
| 脱水機 | DIAPATH | ドナテロ | - |
| 電気メスペン | Bovie | CHANGE-A-TIP | - |
| 埋め込み機 | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5-Ethanol | |
| Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD | 100092683-Frozen | ||
| platform | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | - |
| ガーゼパッド,綿棒 | Lohmann-Rauscher | 13353 | - |
| ガラススライド | Servicebio | G6004-HE | |
| 染料溶液セット | Servicebio | G1003 | - |
| 加熱マット | THERMO MAT PRO 30W | HTP-30 | - |
| 止血スポンジ | CuraSpon | J1276A | - |
| ヘパリン-溶液 | ハウス-アポテーケ | PZN 03029820 | - |
| アイスボックス | PETZ | カタログ番号なし | - |
| イメージングシステム | ニコン | DS-U3 | - |
| 吸入麻酔器 | GROPPLER | BKGM 0616 | - |
| イソフルラン | CP ファーマ | イソフルラン CP 1 ml/ml | - |
| ケタミン | ゾエティス | カタログ番号なし | - |
| マッソン染料溶液セット | Servicebio | G1006 | - |
| メタミゾール | WDT | カタログ番号なし | - |
| マイクロはさみ | FST | 15000-00,15000-10 | - |
| マイクロSerrefine(クランプ)角度付き/ 16 mm | FST | 18055-06 | - |
| 顕微鏡 | ライカ | LEICAMZ6- | |
| 顕微鏡ライト | SCHOTT | KL2500LED | - |
| 中性ガム | SCRC | 10004160 | - |
| オーブン | 天津ライボ瑞計器械設備有限公司 | GFL-230 | - |
| 病理学スライサー | 上海ライカ器械有限公司 | RM2016 | - |
| 生理食塩水 (NaCl 0.9%) | ハウス-アポテーケ | PZN 06178437 | |
| はさみ | ペハインスツルメンツ | 991083/4 | |
| スライド | Servicebio | - | |
| 小型シャーレ | Sarstedt | 8,33,900 | - |
| ストレート鉗子 | WPI | 14113-G | - |
| サージカルテープ | BSN | 4120 | - |
| 縫合糸結束鉗子 - 10 cm | FST | 18025-10 | - |
| 縫合糸(10-0) | Medtronic | N2540 | - |
| 縫合糸(4-0) | ETHILON | V4940H | - |
| 縫合糸(7-0) | ETHILON | 1647H | - |
| シリンジ (0.3 mL) | BD | 324826 | - |
| シリンジ (1 mL) | BD | 320801 | |
| -組織スプレッダー | 浙江省Kehua Instrument Co., Ltd | KD-P | - |
| 直立光学顕微鏡 | Nikon | Nikon Eclipse E100 | - |
| キシラジン | バイエル | ロンプン | - |
| キシレン | シノファームグループ化学試薬株式会社LtD | 10023418 |
参考文献
- Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).
- Jiang, K., et al.
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
