意識性ラットの鎖骨下静脈からの反復採血
Summary
本プロトコルは、ラットにおける鎖骨下静脈から血液を採取するための簡便かつ効率的な方法を記載する。麻酔なしで迅速、タイムリー、簡単に識別できるサンプリングを可能にし、繰り返しのサンプル収集を通じて高品質の血液を取得します。
Abstract
ラットは、薬物曝露を検出するために特定の時点で一定量の血液を採取する必要がある薬物動態(PK)およびトキシコキネティクス(TK)研究で広く使用されています。ラット採血法は血漿の質を決定し、さらに試験結果の精度に影響を与えます。このプロトコルに記載されている鎖骨下静脈採血方法は、PKおよびTKテストのニーズを満たすために、動物の意識状態で血液サンプルを繰り返し収集します。拘束操作のスキルと針切開の適切な手順により、採血の成功率が保証されます。プラズマの品質を確保しながら操作が簡単で、同時に動物福祉にも対応しています。ただし、この方法には熟練した操作が必要であり、不適切な方法は動物の脱力感、痛み、跛行、さらには死亡率を引き起こす可能性があります。現在の方法は、TKのSprague Dawley(SD)ラットを対象とした4週間の経口毒性試験の試験施設で使用されています。24時間以内に収集された血液の最大量は、動物の総血液の20%を超えませんでした。.動物の体重は雄と雌で200 g以上でした。データは、動物の体重が毎週着実に増加し、反復サンプル収集後の臨床観察は正常であることを示しました。
Introduction
ヒト用医薬品の登録に関する技術要件の調和に関する国際会議(ICH)ガイドライン1 および国家医療製品局(NMPA)ガイドライン2によると、トキシコキネティック(TK)研究におけるラットの採血時点の数は、動的薬物曝露評価の要件を満たす必要があります。ラットのおおよその総血液量は55-70 mL / kg体重です3。収集時間ポイントは通常、投与後30分以内に集中し、その後減少し、定期検査では48時間以内に10を超える血液サンプルを収集する必要があります4。例えば、血液サンプルは、経口投与薬物のTK研究において、12時点(0分、5分、10分、15分、30分、45分、1時間、2時間、3時間、4時間、8時間、および12時間)で収集される。研究者は、TKテスト5用の高品質の血漿を得るために、ラットで200〜250μLの血液を繰り返し採取する必要があります。
ラットの採血部位には、尾血管、眼窩後神経叢静脈、顎下静脈、心臓、腹部大動脈6などがあります。その中で、ラットの尾静脈からの採血は頻繁に使用される方法であり、これは経験豊富で熟練したオペレータを必要とする7,8。眼窩後神経叢静脈から血液を採取することはそれほど複雑ではありません。ただし、この方法はラットの視力を損なう可能性があり9、心臓と腹部大動脈からの血液は最終的な採血にのみ適しているため、推奨されません10。意識のあるラットの顎下静脈から血液を採取する別の方法は、より多くの合併症を引き起こすことが示されており、不十分な血液サンプルの質を明らかにしました11。したがって、研究者はサンプリングの難しさを減らすために動物に麻酔をかけるかもしれません。それでも、麻酔はまた、実験のコストを増加させ、より深刻なことに、それはラット12の代謝状態に影響を及ぼすであろう。本プロトコルは、麻酔なしでラットの鎖骨下静脈で採血する迅速かつ簡単な方法を使用しており、正確な位置決めと両側交互採血を可能にし、タイムリーかつ繰り返し高品質のサンプルを取得します。
Protocol
Representative Results
Discussion
鎖骨下静脈から血液を採取することには一定の利点があります。(1)採血部位は容易に解離し、ラットの姿勢が異なるために静脈叢が規則的ではないため、記載された方法は、ラットの安定した快適な姿勢を維持しながら静脈叢の位置を容易に局在化することができる。(2)操作が簡単で、技術者のスキルの急速な発達に有利であり、動物への苦痛が少ない。(3)動物を快適にするための動作モー?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、広東省医薬品非臨床評価研究重点研究所(No.2018B030323024)および広東省重点研究開発計画の主要プログラム「新薬創出」(No.2019B020202001)、広州基礎応用基盤研究プロジェクト(No.202002030249およびNo.202002030156)から資金提供を受けました。
Materials
| 1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm) | Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China) | 20210629 | |
| 75% alcohol | Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China) | 210717 | |
| Animal source | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. | grade: SPF | laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847 |
| Cotton swab | Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China) | 20210301 | Need to be sterilized. |
| Electric shaver | Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China) | CP-6800 | |
| EP tube, 1.5 mL | Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China) | ||
| Heparin sodium (2 mL:12500 IU) | Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China) | 51200702 | Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60°C for use. |
| Labtip (volume range 5-200 μL) | Thermo Fisher Scientific Oy | 94300120 | |
| Low speed refrigerated centrifuge | Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China) | L535R | |
| Pipette gun (20-200 μL) | BRAND | 12N92305 | |
| Rats (SD) | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China) | ||
| Sharp tool container | Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China) | ||
| Eye drop | This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided. |
References
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