Vi presenterar ett protokoll för att erhålla kemiska bilder med bredbandsstimulerad Ramanspridningsmikroskopi (SRS). Baserat på ett SRS-mikroskop som arbetar med differentiell flerkanalig inlåsningsdetektering beskriver protokollet provberedningen, justeringen av SRS-apparaten och kemometri för att skilja olika beståndsdelar i kemiskt heterogena prover.
Stimulerad Ramanspridning (SRS) mikroskopi är en olinjär optisk teknik för etikettfri kemisk avbildning. Detta analysverktyg levererar kemiska kartor med hög hastighet och hög rumslig upplösning av tunna prover genom att direkt förhöra deras molekylära vibrationer. I sin standardimplementering är SRS-mikroskopi smalband och bildar bilder med endast en enda vibrationsfrekvens åt gången. Detta tillvägagångssätt hindrar dock inte bara den kemiska specificiteten hos SRS utan försummar också den mängd information som kodas inom vibrationsspektra.
Dessa begränsningar kan övervinnas genom bredbands-SRS, en implementering som kan extrahera ett vibrationsspektrum per pixel i bilden parallellt. Detta levererar hyperspektrala data som, i kombination med kemometrisk analys, maximerar mängden information som hämtas från provet. Således förbättrar bredband SRS systemets kemiska specificitet, vilket möjliggör kvantitativ bestämning av koncentrationen av de olika beståndsdelarna i ett prov. Här rapporterar vi ett protokoll för kemisk avbildning med bredbands-SRS-mikroskopi, baserat på ett hembyggt SRS-mikroskop som arbetar med en anpassad differentiell flerkanalslåsningsförstärkare. Den diskuterar provberedning, inriktning av SRS-apparaten och kemometrisk analys. Genom att förvärva vibrationsspektra Raman-spektra illustrerar protokollet hur man identifierar olika kemiska arter i en blandning och bestämmer deras relativa koncentrationer.
Ramanmikroskopi är en kraftfull avbildningsteknik som levererar rika kemiska kartor genom att mäta Raman-spridning1, en oelastisk strålningsprocess som härstammar från molekyler som vibrerar som svar på infallande ljus 2,3. Varje pixel i en Raman-karta innehåller ett spektrum som bär direkt information om provets kemiska sammansättning och struktur, vilket resulterar i bilder med inneboende vibrationskontrast. Hittills är Raman-mikroskopi referenspunkten för mikrospektroskopistudier av molekylära vibrationer eftersom ingen annan bildteknik kan producera bilder med både hög kemisk specificitet och hög rumslig upplösning4. Trots sin enastående kemiska specificitet är genereringseffektiviteten för Raman-spridning låg, vilket kräver antingen förlängda pixelboendetider eller högeffekts excitation, vilket leder till låga förvärvshastigheter och inkompatibilitet med känsliga prover.
Denna enda brist på Raman-mikroskopi fick forskare att tillämpa koherent Raman-spridning 5,6,7,8,9 som en kontrastkälla för mikroskopi. Detta är en olinjär optisk process som förbättrar vibrationsresponsen med flera (upp till sju) storleksordningar, vilket möjliggör höghastighetskemisk avbildning 10,11,12,13. I synnerhet är de två mest använda koherenta Raman-spridningsteknikerna koherenta anti-Stokes Raman-spridning (CARS)14 och stimulerad Raman-spridning (SRS)15. Till skillnad från CARS visar SRS ett linjärt beroende av koncentrationen av resonansmolekyler. Det är immunt mot den icke-resonanta bakgrunden, en olinjär effekt som inte är relaterad till någon vibrationsövergång men förvrängande till de Lorentziska formerna som är karakteristiska för Raman-spektra för de molekylära vibrationerna16,17. Således ger SRS-mikroskopi autentisk Raman-information som möjliggör direkt kvantitativ bildanalys.
SRS är en tredje ordningens, olinjära, optiska process som ger direkt information om de kemiska bindningarna i ett prov. Det härstammar från den spatiotemporala superpositionen av två optiska fält i allmänhet i det nära infraröda spektralområdet, nämligen pumpen och Stokes vid frekvensen ωpu respektive ωS, 10,11,18. Denna superposition genererar ett slag vid pump-Stokes-frekvensen som avstämde Ω = ωpu-ω S. När Ω matchar en molekylär vibration ΩR, resonerar molekylen och orsakar en sammanhängande energiöverföring mellan ljusfälten och molekylen. Som ett resultat når molekylen ett vibrationsupphetsat tillstånd. Denna process kan övervakas genom att mäta antingen förintelsen av pumpfotoner (en signal som kallas stimulerad Raman-förlust [SRL]) eller den samtidiga förstärkningen av Stokes-fotoner (en process som kallas stimulerad Raman-förstärkning [SRG]). SRG och SRL är små signaler (ΔI) som sitter ovanpå en intensiv och fluktuerande bakgrund (I). Eftersom typiska värden för SRS-signalen (ΔI / I) ligger i intervallet 10-6-10-4 kan laserbruset lätt dölja det. För att mildra de skadliga effekterna av laserbruset på signal-brusförhållandet (SNR) och följaktligen på bildhastigheten förlitar sig SRS-detektering på moduleringsöverföringstekniker (t.ex. inlåsningsförstärkare, resonanskretsar eller lådbilsmedelvärden) vid höga moduleringsfrekvenser (>1 MHz), där laserbruset når sina minimivärden 15,19,20.
Konventionell SRS-mikroskopi använder smalbandspump (≈10 cm−1) och Stokes-pulser för att producera kemiska bilder med en enda vibrationsfrekvens, vilket möjliggör videohastighetsavbildning med pixelboendetider så låga som ≈100 ns21,22. Men eftersom smalbands-SRS-mikroskopi bildar kemiska kartor genom att sekventiellt skanna provet vid endast några vibrationsfrekvenser, är dess information begränsad23. SRS-bilder med en eller två vibrationskontraster kanske inte räcker för att skilja kemiska arter med överlappande Raman-band, särskilt inom heterogena system. Därför utnyttjar det paradigmatiska smalbands-SRS-mikroskopet inte SRS fulla potential, eftersom undersökning av en handfull vibrationsfrekvenser hindrar dess kemiska specificitet och försummar den mängd information som kodas inom vibrationsspektra. Dessutom resulterar sekventiell skanning av provet vid olika frekvenser i förlängda pixelboendetider som kan utlösa fotoskador och förhindra rigorös rumslig coregistration mellan på varandra följande bilder, vilket leder till rörliga artefakter.
I motsats till dess smalbandsmotsvarighet hämtar bredbands-SRS-mikroskopi ett vibrationsspektrum per pixel vid varje provskanning 10,12,24. Således tillhandahåller bredband SRS hyperspektral avbildning med strikt rumslig coregistration av olika vibrationskontraster, vilket möjliggör noggrann dataanalys. Detta avslöjar inte bara provets kemiska beståndsdelar genom Raman-spektra, utan hjälper också till att bestämma deras relativa koncentrationer. Beroende på hur spektra förvärvas klassificeras bredbands-SRS-mikroskopi antingen som hyperspektral SRS eller multiplex SRS. I hyperspektral SRS förvärvas SRS-spektrumet per skannad punkt i provet sekventiellt (dvs. det hämtas genom att svepa frekvensen som avkodar Ω), bygga ett SRS-spektrum genom att stapla ihop SRS-signalerna vid på varandra följande Raman-skift. Raman-spektrumet mäts samtidigt i flera vibrationslägen i multiplex SRS. Således kombinerar multiplex SRS-metoden en modulerad smalbandspuls med en bredbandspuls för att driva SRS-signalen vid olika frekvenser och använder en flerkanalsdetektor med en känslighet som är jämförbar med smalbands-SRS för att detektera SRS-spektra.
Detta dokument presenterar ett protokoll för att producera kemiska kartor över heterogena prover med hjälp av multiplex SRS-mikroskopi. Ett schema för SRS-mikroskopet som används i detta protokoll visas i figur 1 och beskrivs i detalj någon annanstans 25,26,27. Kortfattat driver en kommersiell lägeslåst Yb-fiberlaser, som producerar 140 fs pulser centrerade vid 1040 nm, med 10 W genomsnittlig effekt och en repetitionshastighet på 80 MHz, bredbands-SRS-mikroskopet. En polariserande stråldelare (PBS) separerar grundstrålen i två grenar. För att producera smalbands Stokes-pulser skickas en gren med 4 W av grundstrålen till en etalon som genererar en smalbandsstråle (≈15 cm-1), som sedan moduleras vid 1,6 MHz med en akustisk optisk modulator (AOM). Den återstående fraktionen med 6 W av grundstrålen frekvensdubblas med en 2,8 mm tjock litiumtriboratkristall (LBO), skuren för typ I-fasmatchning (θ = 90 °, φ = 13,8 °). Den resulterande andra harmoniska generationen vid 520 nm färdas till ett X-vikt hålrum för att pumpa en optisk parametrisk oscillator (OPO), en anordning som använder en 3,0 mm tjock LBO-kristall (typ I-fasmatchning, θ = 90 °, φ = 9,8 °) som aktivt medium för att leverera en bredbandsoptisk strålning som kan avstämbars inom spektralområdet 680-910 nm (figur 2). Dessa bredbandspulser fungerar som pumpen i SRS-experimenten och sprider sig till en prismakompressor för att förkompensera dispersionseffekterna som induceras av mikroskopmålet.
Efter kompressionssteget producerar en λ/2-vågplatta, i kombination med en YVO 4-birefringentplatta, två ortogonalt polariserade repliker vars elektroniska subtraktion vid detekteringsplanet avbryter bruset från bredbandspumpen. En dikroisk spegel kombinerar pumpen och Stokes strålar och skickar dem till ett upprätt mikroskop. Ett vattendjupningsmål med en numerisk bländare (NA) på 1,27 fokuserar ljuset på provet, medan ett oljedykningsmål med ett NA på 1,4 samlar upp det. Före detekteringssteget tar ett kortpassfilter (SPF) bort de modulerade Stokes, medan ett diffraktionsgitter som arbetar i Littrow-konfiguration sprider den överförda bredbandspumpen. En andra PBS2 separerar pumpreplikerna, och en lins fokuserar dem på två fotodiodmatriser. Signalerna från dessa fotodiodmatriser subtraheras elektroniskt och skickas till en hembyggd flerkanalig inlåsningsförstärkare (M-LIA). Den demodulerade signalen normaliseras sedan av likströmsavläsningarna (DC) för en av fotodiodmatriserna, vilket ger SRL-spektrumet.
Som ett föredömligt experiment avbildar vi blandningar av flera välkända Raman-spridare, var och en med ett unikt Raman-spektrum. Således börjar protokollet med att beskriva hur man förbereder referensproverna. När vi upptäcker SRL fortsätter vi att förklara hur man får smalband Stokes-pulser och ställer in den optiska källan som levererar bredbandspumpen (≈250 cm-1), nämligen den hembyggda OPO. Protokollet visar inriktningen och optimeringen av de optiska strålarna och beskriver kritiska parametrar som effekten och spektra för smalbands-Stokes och bredbandspumpen. Protokollet beskriver i detalj bredbandspumpens optiska väg eftersom den kräver speciella optiska element. Den förklarar också hur man hittar den spatiotemporala överlappningen mellan pump-Stokes-pulser och visar ett praktiskt sätt att bestämma det relativa intensitetsbruset (RIN), vilket i sin tur hjälper till att definiera den bästa moduleringsfrekvensen för SRS-experiment. Sedan förklarar vi arbetsprincipen och kalibreringen av detekteringskedjan. Slutligen visar protokollet datainsamlingsprocessen, kemometri och bildbehandlingspipeline.
Bredbands-SRS-mikroskopi är en kraftfull bildteknik som erbjuder autentisk kemisk kontrast för att identifiera och avlägsna de kemiska beståndsdelarna i ett heterogent prov. Potentialen i detta analytiska verktyg kan vara till nytta för flera forskningsområden, allt från materialvetenskap till histopatologi. Nackdelen med bredbands-SRS-mikroskopi är det faktum att det är tekniskt krävande; experimentalisten kräver inte bara kunskap om bredbandslaserkällor utan behöver också manipulera laserpulserna för att effektivt generera SRS, en signal som i sin tur måste mätas med sofistikerade detektionsscheman. Detta dokument presenterar ett protokoll som beskriver ett arbetsflöde för att producera kemiska kartor över blandade kemiska föreningar med hjälp av ett multiplex bredbands-SRS-mikroskop. Även om det beskrivna arbetet kan vara trivialt för vissa laserfysiker och olinjära mikroskopister, kanske det inte är fallet för läsare som är intresserade av fördelarna med bredbands-SRS-mikroskopi vars vetenskapliga kunskaper ligger utanför dessa domäner. Därför syftade vi till att detaljera varje steg för att vägleda den breda publiken som är intresserad av bredbands-SRS-mikroskopi.
Det aktuella protokollet började med att visa hur man förbereder ett enkelt men spektroskopiskt rikt prov bestående av flera starka och välkända Raman-spridare. Vi diskuterade hur man får tag på de bredbandspumps- och smalbandsbalkar som krävs för att sätta upp ett SRS-mikroskop. Figur 5C visar ett schema över SHG- och OPO-inställningarna. Observera att lins f1 fokuserar den grundläggande strålen på LBO1 för att generera SHG, medan en dikroisk spegel reflekterar SHG-strålningen och överför den återstående grundläggande strålen. En andra lins f2 kolliderar SHG-strålen. Som f2 > f1 expanderas SHG-strålen med en faktor lika med f2/f1. En tredje lins f3 fokuserar den expanderade SHG-strålen på en andra typ I LBO-kristall (LBO2) skuren vid θ = 90 ° och φ = 29,0 °. Genom att pumpa LBO2 med ovannämnda SGH (520 nm) kommer strålning inom intervallet 680-910 nm att dyka upp från LBO2 genom skillnadsfrekvensgenerering (DFG), vilket ger två strålar: signalen och tomgång27 (figur 5D, E). Den senare kasseras medan den förra förstärks i OPO-hålrummet för att leverera pumppulserna som används i SRS-experimenten. Pumpen av OPO vid 520 nm, nämligen SHG-strålen, bör inte förväxlas med pumpen i SRS-experimenten (dvs. OPO: s signalstråle).
Kontrasten i SRS-mikroskopi härstammar från en olinjär signal som genereras vid mikroskopets brännpunkt, en signal som kräver att ett stort antal fotoner begränsas i provplanet vid en given tidpunkt. Denna fotonbegränsning uppnås med ett mikroskopmål med hög numerisk bländare (NA), en rad linser som också ställer in systemets rumsliga upplösning: ju högre NA, desto högre rumslig upplösning. Höga NA-mål är dock tätt packade med glas, vilket introducerar positiv GDD till pulserad strålning, ett frekvenskvitter som i slutändan breddar pulsernas tidsprofil39. Således kan GDD som införs av mikroskopmålet öka varaktigheten för bredbandspumppulserna, vilket gör den ännu längre än Stokes temporala kuvert och minskar den effektiva, tillgängliga bandbredden för Raman-signalen. Dessutom kan denna breddning också medföra en snedvridning av spektralprofilen för det uppmätta SRS-spektrumet.
I CARS framträder den spektroskopiskt relevanta signalen vid våglängder som skiljer sig från excitationsfältens. En enkel fotomultiplikatorrör eller CCD-kamera (charge-coupled device) kan användas för att integrera CARS-signalen i tid och summera tusentals pulser för att beräkna laserbruset i genomsnitt. Istället visas SRS-signalen som en svag moduleringsöverföring inbäddad i en stark och fluktuerande laserbakgrund. Eftersom denna modulering är svag kan laserbruset lätt överväldiga det, vilket minskar både bildhastigheten och känsligheten hos SRS-mikroskopet. Därför är det före avbildning absolut nödvändigt att mäta det relativa intensitetsbruset (RIN) för att avgöra om lasern är lämplig för höghastighets SRS-avbildning och för att välja moduleringsfrekvensen med det lägsta bruset. Referensnumret definieras som bruseffektspektraldensiteten [δP(f), med W2/Hz-enheter] för lasern normaliserad med den genomsnittliga optiska effekten ()40,41. Med andra ord beskriver RIN de normaliserade laserfluktuationerna vid olika frekvenser (Eq [4]).
(4)
Således är RIN en parameter för SRS-systemet som bestämmer det ideala moduleringsfrekvensområdet för experimenten. Till exempel visar olivfältet i figur 8 det ideala moduleringsfrekvensområdet för SRS-avbildning. När det gäller smalbands-SRS bör användaren mäta RIN för både pump och Stokes för att välja vilken stråle som behöver moduleras för att uppnå optimal prestanda. Observera till exempel från figur 8 att Stokes-strålen har ett något högre RIN än pumpen, vilket innebär att SRG-mätningarna skulle bli bullrigare än deras SRL-motsvarigheter. När det gäller bredbands-SRS är den stråle som ska moduleras smalbandsstrålen.
Gitterets vinkeldispersion D uttrycker diffraktionsvinkeln som en funktion av våglängden och definieras som derivatan av gitterekvationen. För Littrow-konfigurationen ges vinkeldispersionen av Eq (5).
(5)
För att få Eq (5) antog vi α = β, löste Eq (2) för m/d och satte in resultatet i dβ/ dλ. Observera att i Littrow-konfigurationen β = sin-1(mλ/2d). Inom approximationen med liten vinkel är förändringen i position längs spektrumet fdβ ≈ dl (figur 10). Genom att infoga dβ i Eq (5) kan vi alltså beräkna den linjära dispersionen, en kvantitet med enheter av nm mm-1 med användning av Eq (6):
(6)
För ett diffraktionsgitter som arbetar i Littrow-konfigurationen med 1 851,85 spår/mm, d = 540 nm. Om vi använder första ordningens diffraktion av ljus vid ~ 789 nm, D = 0,0027 rad nm-1. Med en f = 750 mm lins får vi en linjär dispersion av ≈ 0,5 nm mm-1, vilket översätts till ≈ 7,8 cm-1 mm-1. Således bestämmer linsens brännvidd “densiteten” för nm per mm vid detektorplanet: Ju längre brännvidd, desto färre nm per mm erhålls, vilket ökar utrymmet mellan bredbandspumpens spektrallinjer. Omvänt, med kortare brännvidd, kommer det att finnas mer nm per mm vid detektorplanet, vilket minskar utrymmet som upptas av den dispergerade pumpen.
Balanserad detektering förbättrar bildkvaliteten och känsligheten hos bullriga inställningar. Till exempel, enligt RIN-spektra som visas i figur 8 och med tanke på typisk SRS med en amplitud på 1 x 10-5, är det obalanserade signal-brusförhållandet (SNR) ≈60. Med hjälp av balanserad detektering (dvs. nära skottbruset) är det möjligt att uppnå en SNR på ≈145. Figur 11 visar spektra och sammansatta bilder under balanserade och obalanserade förhållanden. Naturligtvis påverkar effekterna av balanserad detektion de slutliga resultaten av experimenten, nämligen de kemiska kartorna. Med stöd av dessa resultat betonar vi att balanserad detektering är en kraftfull teknik för att motverka de skadliga effekterna av laserfluktuationer på bildkvaliteten. Det är värt att nämna att balanserad detektering passar bäst för bullriga lasrar, såsom fiberoscillatorer. SRS-mikroskop som arbetar med tysta optiska ljuskällor (t.ex. solid state-lasrar) kanske inte kräver balanserad detektering.
Protokollet förklarar också ett tillvägagångssätt baserat på olinjär optik för att hitta den spatiotemporala överlappningen mellan pulserna hos dessa strålar. Vi beskrev fördelarna med att använda 1st istället för 0: e diffraktionsordningen för en AOM som den modulerade Stokes-strålen. Vidare beskrevs de skadliga effekterna av dispersion på SRS-generationens effektivitet med förslag på sätt att mildra dem via en prismakompressor. Dessutom förklarar protokollet hur man justerar prismorna och belyser tre kritiska aspekter att tänka på för optimal prestanda. Vi diskuterar inte bara relevansen av RIN för SRS-mikroskopi utan visar också hur man mäter det med en inlåsningsförstärkare och med RIN-spektrumet definierar den bästa moduleringsfrekvensen. Med ett konkret exempel förklarar detta dokument hur gitterekvationen hjälper till att utforma detekteringskedjan. Slutligen illustrerar protokollet, med verkliga SRS-data, strukturen hos SRS-hyperkuben och hur man analyserar den med ett konventionellt använt vetenskapligt programmeringsspråk.
Detta protokoll har tre mindre begränsningar. För det första består det detektionsschema som används i detta bidrag av en icke-konventionell, flerkanalig inlåsningsdetektor designad och byggd internt av Sciortino et al.26 Som visats tidigare25 kan denna detektor ersättas med en balanserad fotodiod från hyllan. Även om denna modifiering endast gäller detektorn och lämnar protokollet praktiskt taget oförändrat, med en enda fotodiod, måste man skanna varje spektralkomponent på detektorn istället för att mäta dem alla på en gång. För det andra använder detta protokoll inline balanserad detektering, vilket kräver att flera optiska element sätts in i strålbanan. Dessa optiska element ökar systemets komplexitet och leder till förluster av optisk kraft och pulsbreddning.
Inline balanserad detektering kräver också att de två pumpreplikerna passerar genom provet, en situation som kanske inte är idealisk för ljuskänsliga prover, såsom levande celler, eller för starkt birefringenta där de två pumpreplikerna kan uppleva olika optiska egenskaper, vilket avbryter den balanserade detekteringen. För det tredje förlitar sig protokollet på en hembyggd OPO, en enhet som kanske inte är lätt tillgänglig. Alternativ till bredbandsspektra som levereras av OPO är dock superkontinua från olinjära optiska fibrer eller bulkkristaller. Den senare kunde endast användas med laser med låg repetitionshastighet (upp till 5 MHz). Således, som med alla experimentella mönster, har det aktuella protokollet vissa begränsningar. De är dock minimala och äventyrar inte framgången med detta tillvägagångssätt.
Även om ett referensprov beskrivs här, kan detta protokoll framgångsrikt skilja kemiska arter i celler och djur- och växtvävnader, såsom cellulosa, lipidarter eller proteiner, hitta praktiska tillämpningar i olika biokemiska uppdrag eller som ett diagnostiskt verktyg i histopatologi. På samma sätt kan detta protokoll vara ett värdefullt verktyg inom materialvetenskap. Till exempel, efter detta protokoll, kan man förhöra den molekylära sammansättningen och koncentrationen av polymera arter42. Dessutom är denna metod kompatibel med andra olinjära mikroskopitekniker, såsom bredbandsmikroskopi baserad på pump-sond43 och heterodyn CARS44, fyrvågsblandningsprocesser som, liksom med SRS, också kräver två excitationsljusstrålar och moduleringsöverföringsmätningar. Slutligen kan en del av informationen i detta dokument tillämpas på icke-linjära avbildningstekniker som inte förlitar sig på moduleringsöverföringstekniker, men kräver justering av två eller flera pulserade laserstrålar, såsom konventionella CARS45– och SFG-mikroskop46.
Sammanfattningsvis beskriver detta protokoll en kraftfull metod baserad på bredbands-SRS-mikroskopi för att extrahera kemiska kartor och deras karakteristiska SRS-spektra från kemiskt heterogena blandningar, vilket ger dataset som möjliggör enkel kvantitativ dataanalys. Metodens mångsidighet och enkelhet ger också den intresserade läsaren möjlighet att anpassa den till olika olinjära tekniker.
The authors have nothing to disclose.
D. P. erkänner finansiering från Europeiska unionens projekt CRIMSON enligt bidragsavtal nr 101016923 och Regione Lombardia-projektet NEWMED enligt bidragsavtal nr. POR FESR 2014-2020. G. C. erkänner finansiering från Europeiska unionens projekt Graphene Core3 enligt bidragsavtal nummer 881603. G. C. erkänner också finansiering från King Abdullah University of Science and Technology, Grant Award Number: OSR-2016-CRG5-3017-01.
Collection objective | Nikon | CFI Apo Lambda S 60x Oil, NA=1.4, Nikon | Oil immersion objective |
Coverslips | Thermo Fisher | 043211-KJ | Quartz, cover slip for microscope slide, 25.4 x 25.4 x 0.15 mm |
Delay line | Physik Instrumente (PI) | M-406.6PD | Precision microtranslation stage, 150 mm travel range |
DMSO | Merck | D8418-500ML | Methylsulfinylmethane, Molecular Biology Grade DMSO, DMSO, Methyl Sulfoxide |
Etalon | SLS Optics Ltd | Custom made | Anti reflective coating at 1,040 nm, Mounted in a 38 mm diameter x 35.5 mm long stainless steel cell with protective dust caps, and a 50 mm diameter ‘pinch-clamp’ mounting ring |
Excitation objective | Nikon | CFI Plan Apo IR 60XC WI, NA=1.27, Nikon | Water immersion objective |
Grating | LightSmyth | T-1850-800s Series | High Efficiency Transmission Grating T-1850-800s Series |
Laser | Coherent | Custom made | Fidelity, HP |
λ/2 | Thorlabs | SAHWP05M-1700 | Mounted superachromatic half-wave plate |
PBS | Thorlabs | CM5-PBS203/M | 16 mm Cage-Cube-Mounted Polarizing Beamsplitter Cube, |
PMMA beads | Merck | MFCD00198073 | Micro particles based on polymethacrylate |
Prisms | Crisel | 320-8218 | LASER DISPERSING PRISMS in SF11 |
PS beads | Merck | 72986-10ML-F | Micro particles based on polystyrene |
YVO4 crystal | Dr. Sztatecsny GmbH | Custom made | thickness 8 mm, dia 1.00 cm, 1 689,00 689,00 suitable for 1" mount, coated for 850 – 1,100 nm |