Techniques de dissection et échantillonnage histologique du cœur dans des modèles de grands animaux pour les maladies cardiovasculaires
Summary
En raison de l’anatomie complexe, un protocole de dissection et de prélèvement reproductible de manière cohérente pour les échantillons cardiaques peut être difficile à mettre en œuvre. Ce manuscrit présente les éléments clés de certains protocoles standard de dissection cardiaque, en soulignant à la fois les approches d’examen global et les sites d’échantillonnage couramment utilisés pour l’examen histopathologique.
Abstract
L’examen et l’échantillonnage standard bruts sont des éléments clés de la reproductibilité et du succès des études expérimentales sur les maladies cardiovasculaires réalisées chez les grands animaux. Compte tenu de l’anatomie complexe du cœur, des différences inter-espèces et des types de réactions compensatoires et pathologiques, des protocoles cohérents sont difficiles à mettre en œuvre. L’utilisation de protocoles de dissection multiples est généralement adaptée à l’expérience du prosecteur, et les préférences personnelles continuent d’être une source de variabilité expérimentale et inter-observateurs. Ici, l’objectif est de présenter les principales caractéristiques anatomiques et les points de repère, les protocoles de dissection et les normes d’échantillonnage histologique du cœur chez certaines espèces couramment utilisées (y compris les chiens, les porcs, les ruminants et les chats) en tant que modèles de maladies cardiovasculaires.
Deux protocoles standard d’examen brut sont présentés ici. Premièrement, la méthode d’entrée-sortie, qui suit la direction physiologique du flux sanguin à travers le cœur et les gros vaisseaux (fréquemment utilisée chez les chiens, les ruminants et les porcs), et deuxièmement, la technique de dissection à quatre chambres (illustrée chez les chats). Les deux techniques peuvent être adaptées à n’importe quelle espèce dans certaines circonstances expérimentales. Les protocoles d’échantillonnage comprennent tous les domaines d’intérêt (ganglion sino-auriculaire, ventricules, septum interventriculaire, oreillettes, valves et aorte) et, s’ils sont correctement réalisés, améliorent à la fois la reproductibilité et la fiabilité des études expérimentales.
Introduction
En raison de l’anatomie complexe et de la rigueur précoce, qui peuvent interférer avec l’évaluation de l’épaisseur de la paroi cardiaque, l’examen grossier du cœur est difficile et sujet à plusieurs erreurs liées à la technique ou à l’interprétation. Ceci est amplifié par les variations morphologiques interspécifiques et par le fait que de nombreuses pathologies cardiaques cliniques majeures (y compris les cas précoces de maladies coronariennes, de fibrose, d’artérite et d’amylose) ne sont associées à aucun changement grossier, étant, par essence, des pathologies histologiques. Un protocole normalisé de dissection et de prélèvement d’échantillons histologiques peut assurer la cohérence entre les observateurs et, en même temps, la comparabilité et la reproductibilité des études expérimentales sur les maladies cardiovasculaires.
Les échantillons ont été prélevés sur deux chiens (Canis lupus familiaris) (un bouledogue mâle Français de 3 ans et une femelle mixte de 8 ans), un chat (Felis catus) (un mâle européen à poil court mâle de 6 ans), un porc domestique (Sus scrofa domesticus) (un mâle de 1 an, Grand Blanc) et une vache (Bos taurus) (une Holstein femelle de 2 mois). Chacune des espèces choisies a une utilisation particulière comme modèle cardiovasculaire pour une maladie différente; Par exemple, les chiens sont un modèle privilégié pour la modélisation de l’arythmie; les chats sont préférés pour la cardiomyopathie hypertrophique (CMH), car c’est l’espèce avec la prévalence la plus élevée de CMH; les porcs sont utilisés comme modèle pour l’infarctus aigu du myocarde; et les ruminants sont utilisés comme modèle d’intoxication en raison de leur exposition à des toxines que l’on peut facilement trouver dans les prairies11.
Dans ce manuscrit, un protocole de nécropsie et deux protocoles de dissection du cœur sont présentés, conçus pour améliorer l’examen macroscopique et histologique du cœur dans les maladies cardiovasculaires expérimentales. Les protocoles décrits ont été élaborés à partir de l’information tirée des manuels vétérinaires 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12, de la littérature des revues 3,13,14, des documents officiels 15 et des webinaires 16 ,17. Les échantillons utilisés dans cette étude ont été prélevés sur des cadavres soumis au département de pathologie de l’USAMV Cluj-Napoca pour le diagnostic autopsie de routine.
Protocol
Representative Results
Discussion
Lors de l’exécution du protocole actuel, plusieurs étapes critiques doivent être soigneusement prises en compte pour obtenir des résultats cohérents. Chez les jeunes animaux, les mesures cardiaques sont différentes de celles des adultes (y compris l’épaisseur de la paroi ventriculaire) et, en général, le cœur représente une plus grande proportion du poids corporel11,12. Le degré d’hypertrophie ventriculaire peut être quantifié en appliquant un…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Aucun.
Materials
| 0.9% saline solution | B. BRAUN MELSUNGEN AG | W04479004 | For washing all the blood, and blood clots from the heart. |
| 10% neutral buffered formalin (NBF) | Q Path | 11699404 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Bone cutting forceps | HELEN SRL | LS109HV | Sturdy instrument for cutting bone. |
| Cutting board | Ambition | 86304 | For an easier manipulation, and cutting the organs. |
| Decalcifying solution | Thermo Scientific TBD-2 | 6764004 | 1:1 mixture of 8% formic acid and hydrochloric acid. |
| Digital camera | Canon Inc. | PowerShot SX540 HS | For photographic, and videographic documentation. |
| Forceps | MKD-Medicale | 15-430 | Dissection instruments. |
| Histological cassettes | Q Path | 720-2215 | Materials for collecting histopathology samples. Dimensions: 3 × 2.5 × 0.4 cm |
| Knife | TEHNO FOOD COM SERV SRL | D2006/15 | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Latex gloves | MKD-Medicale | SANTEX-S | Protection equipment. |
| Mask | MKD-Medicale | 21221 | Protection equipment. |
| Petri dishes | MKD-Medicale | 0598-1V | Materials for collecting ancillary testing samples. |
| Plastic recipients | Corning Gosselin | TP200-02 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Scale | ESPERANZA | MEEKS008 | For weighing the organs. |
| Scale | White Deals | 72 | For weighing the subjects. |
| Scalpel | MKD-Medicale | 10322E | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Scissors | MKD-Medicale | 13-260 | Dissection instruments. |
| Scrub | MKD-Medicale | 410100-52 | Protection equipment. |
| Syringes | MKD-Medicale | 10573EU | Materials for collecting ancillary testing samples. |
References
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