आंतों के रोगाणुओं, जिसमें बाह्य बैक्टीरिया और इंट्रासेल्युलर रोगजनकों जैसे ओरसे वायरस और माइक्रोस्पोरिडिया (कवक) शामिल हैं, अक्सर जंगली केनोरहाब्डिस नेमाटोड से जुड़े होते हैं। यह लेख उन रोगाणुओं का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है जो सी एलिगेंस नेमाटोड को उपनिवेशित और / या संक्रमित करते हैं, और प्रयोगशाला में नियंत्रित संक्रमण के बाद रोगज़नक़ भार को मापने के लिए।
जंगली केनोरहाब्डिस नेमाटोड की आंतों में विभिन्न प्रकार के सूक्ष्मजीवों का निवास होता है, जिसमें आंत माइक्रोबायोम बैक्टीरिया और रोगजनकों, जैसे माइक्रोस्पोरिडिया और वायरस शामिल हैं। केनोरहाब्डिस एलिगेंस और स्तनधारी आंतों की कोशिकाओं के बीच समानता के साथ-साथ सी एलिगेंस प्रणाली की शक्ति के कारण, यह मेजबान विवो में मेजबान आंत-माइक्रोब इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में उभरा है। हालांकि उज्ज्वल-क्षेत्र माइक्रोस्कोपी के साथ इन इंटरैक्शन के कुछ पहलुओं का निरीक्षण करना संभव है, रोगाणुओं को सटीक रूप से वर्गीकृत करना और अधिक सटीक उपकरणों के बिना उपनिवेश या संक्रमण की सीमा को चिह्नित करना मुश्किल है। आरएनए फ्लोरेसेंस इन सीटू संकरण (फिश) का उपयोग जंगली से नेमाटोड में रोगाणुओं की पहचान और कल्पना करने या प्रयोगशाला में रोगाणुओं से संक्रमित नेमाटोड में संक्रमण को प्रयोगात्मक रूप से चिह्नित करने और मात्रा निर्धारित करने के लिए एक उपकरण के रूप में किया जा सकता है। मछली जांच, अत्यधिक प्रचुर मात्रा में छोटे सबयूनिट राइबोसोमल आरएनए को लेबल करते हुए, बैक्टीरिया और माइक्रोस्पोरिडियन कोशिकाओं के लिए एक उज्ज्वल संकेत उत्पन्न करते हैं। कई प्रजातियों के लिए आम राइबोसोमल आरएनए के संरक्षित क्षेत्रों को लक्षित करने के लिए डिज़ाइन की गई जांच रोगाणुओं की एक विस्तृत श्रृंखला का पता लगा सकती है, जबकि राइबोसोमल आरएनए के अलग-अलग क्षेत्रों को लक्षित करना संकरा पता लगाने के लिए उपयोगी है। इसी तरह, वायरल आरएनए को लेबल करने के लिए जांच को डिज़ाइन किया जा सकता है। पैराफॉर्मलडिहाइड (पीएफए) या एसीटोन निर्धारण के साथ आरएनए फिश धुंधला करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है। पीएफए निर्धारण बैक्टीरिया, माइक्रोस्पोरिडिया और वायरस से जुड़े नेमाटोड के लिए आदर्श है, जबकि एसीटोन निर्धारण माइक्रोस्पोरिडा बीजाणुओं के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए आवश्यक है। जानवरों को पहले धोया गया और पैराफॉर्मलडिहाइड या एसीटोन में तय किया गया। निर्धारण के बाद, वांछित लक्ष्य तक जांच के संकरण की अनुमति देने के लिए फिश जांच को नमूनों के साथ इनक्यूबेट किया गया था। जानवरों को फिर से धोया गया और फिर माइक्रोस्कोप स्लाइड पर या स्वचालित दृष्टिकोण का उपयोग करके जांच की गई। कुल मिलाकर, यह फिश प्रोटोकॉल सी एलिगेंस आंत में रहने वाले रोगाणुओं का पता लगाने, पहचान करने और परिमाणीकरण करने में सक्षम बनाता है, जिसमें रोगाणु भी शामिल हैं जिनके लिए कोई आनुवंशिक उपकरण उपलब्ध नहीं हैं।
केनोरहाब्डिस एलिगेंस आंतों केउपकला कोशिकाओं में जन्मजात प्रतिरक्षा और मेजबान-माइक्रोब इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली मॉडल प्रणाली के रूप में उभरा है। एक पारदर्शी शरीर और केवल 20 आंतों की कोशिकाओं के कारण, सी एलिगेंस एक बरकरार जीव के संदर्भ में माइक्रोबियल आंतों के उपनिवेशीकरण और संक्रमण की प्रक्रियाओं की निगरानी के लिए एक सुविधाजनक प्रणाली का प्रतिनिधित्व करता है। नेमाटोड आंतों की कोशिकाएं स्तनधारी आंतों के उपकला कोशिकाओं के साथ कई रूपात्मक और कार्यात्मक समानताएं साझा करती हैं, जिससे उन्हें माइक्रोबायोम उपनिवेशऔर रोगज़नक़ संक्रमण 3,4,5,6 को नियंत्रित करने वाली प्रक्रियाओं के विच्छेदन के लिए विवो मॉडल में एक वापस लेने योग्य बना दिया जाता है।
एलिगेंस विभिन्न प्रकार के रोगाणुओं पर फ़ीड करते हैं जो आंत को उपनिवेशित और संक्रमित करते हैं, और इन नेमाटोड के नमूने के परिणामस्वरूप वायरस, यूकेरियोट्स (कवक, ओमाइसेट्स), और बैक्टीरिया की खोज हुई है जो स्वाभाविक रूप से इस मेजबान 7,8,9,10 के साथ जुड़ते हैं। ओरसे वायरस आंत को संक्रमित करता हुआ पाया गया था और वर्तमान में सी एलिगेंस9 का एकमात्र ज्ञात प्राकृतिक वायरस है। माइक्रोस्पोरिडिया फंगल से संबंधित इंट्रासेल्युलर रोगजनकों को बाध्य करते हैं जो जंगली-पकड़े गए केनोरहाब्डिटिस में सबसे अधिक पाए जाने वाले संक्रमण हैं, जिसमें कई प्रजातियों को सी एलिगेंस और संबंधित नेमाटोड 8,11 को संक्रमित करने की खोज की गई है। कई बैक्टीरिया आमतौर पर जंगली पकड़े गए सी एलिगेंस के आंतों के लुमेन में निवास करते हुए पाए जाते हैं और कई प्रजातियों को सी एलिगेंस माइक्रोबायोम (सीईएमबियो) 6,12,13,14 के लिए एक प्राकृतिक मॉडल के रूप में स्थापित किया गया है। एलिगेंस को स्वाभाविक रूप से उपनिवेशित और / या संक्रमित करने वाले रोगाणुओं की खोज और विशेषता इन मेजबान-माइक्रोब इंटरैक्शन को नियंत्रित करने वाले आनुवंशिक तंत्र को समझने के लिए आवश्यक है, साथ ही साथ नई माइक्रोबियल प्रक्रियाओं की कल्पना करना जो केवल एक बरकरार मेजबान जानवर के संदर्भ में होते हैं।
नमूना लेने के बाद, जंगली नेमाटोड को विभेदक हस्तक्षेप कंट्रास्ट (डीआईसी) माइक्रोस्कोपी के माध्यम से जांच की जाती है ताकि फेनोटाइप ्स की तलाश की जा सके जो संक्रमण या उपनिवेशीकरण का संकेत देते हैं। उदाहरण के लिए, आंतों की कोशिकाओं की रूढ़िवादी दानेदार उपस्थिति में परिवर्तन एक इंट्रासेल्युलर परजीवी संक्रमण 8 की उपस्थिति से जुड़ा हो सकताहै। विशेष रूप से, आंत के कणिकाओं का नुकसान और साइटोसोलिक चिपचिपाहट में कमी वायरल संक्रमण के संकेत हैं, जबकि आंत के कणिकाओं का ‘खांचे’ में पुनर्गठन जीनस नेमाटोसिडा 8,9 में माइक्रोस्पोरिडिया के साथ संक्रमण का संकेत दे सकता है। चूंकि जंगली सी एलिगेंस नमूनों में रोगाणुओं की एक विस्तृत विविधता मौजूद है, इसलिए डीआईसी माइक्रोस्कोपी के माध्यम से रोगाणुओं के बीच अंतर करना मुश्किल हो सकता है। मेजबान के भीतर रोगाणुओं के स्थानिक वितरण के बारे में जानकारी भी कई रोगाणुओं के छोटे आकार के कारण पता लगाना मुश्किल होसकता है। इसके अतिरिक्त, विट्रो में रुचि के किसी भी विशेष रोगाणुओं की खेती हमेशा संभव नहीं होती है, जिससे पता लगाने और / या परिमाणीकरण में कठिनाइयों का सामना करना पड़ता है।
आरएनए फ्लोरेसेंस इन सीटू संकरण (फिश) फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग करके रोगाणुओं को फ्लोरोसेंटली लेबल करने की एक विधि प्रदान करता है जो निश्चित कोशिकाओं में छोटे राइबोसोमल सबयूनिट (एसएसयू) के आरएनए से जुड़ता है। यदि रूपात्मक विशेषताओं का विश्लेषण माइक्रोब के एक विशेष वर्ग का सुझाव देता है, तो फिश जांच जो ऐसे रोगाणुओं के विशिष्ट या व्यापक वर्गों को लक्षित करती है, का उपयोग किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, EUB338 को बैक्टीरियल एसएसयू के लिए एक सार्वभौमिक जांच माना जाता है और आमतौर पर बैक्टीरिया16 की एक विस्तृत श्रृंखला का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। यहां वर्णित प्रोटोकॉल एकल-फंसे हुए डीएनए जांच का उपयोग करता है जो फ्लोरोफोरे के साथ अंत-लेबल होते हैं और विशेष रूप से रुचि के माइक्रोब के लक्ष्य एसएसयू के पूरक होने के लिए डिज़ाइन किए गए हैं, हालांकि पहले से डिज़ाइन की गईजांच उपलब्ध हैं। रोगाणुओं के एसएसयू को लक्षित करने का मुख्य लाभ इस आरएनए की अपेक्षाकृत बड़ी बहुतायत है, जिसमें आमतौर पर सेल में सभी आरएनए का 80% -90% शामिल होता है, जिससे बहुत अधिक सिग्नल-टू-शोर अनुपात17 के साथ धुंधला हो जाता है। प्रोब्स को ऑरसे वायरस 9,18 की तरह वायरस का पता लगाने के लिए आरएनए को लक्षित करने के लिए भी डिज़ाइन किया जा सकता है, जो अक्सर संक्रमित कोशिकाओं में बहुत अधिक प्रतियों में मौजूद होते हैं यदि वायरस सक्रिय रूप से प्रतिकृति बना रहा है।
ज्ञात जांच के साथ परिणामों के आधार पर, सीटू में प्रजातियों की पुष्टि के लिए अधिक विशिष्ट जांच डिजाइन करने के लिए आगे अनुक्रम जानकारी प्राप्त करना आवश्यक हो सकता है। एक सामान्य दृष्टिकोण एसएसयू के संरक्षित क्षेत्रों (बैक्टीरिया के लिए 16 एस और यूकेरियोट्स के लिए 18 एस) के खिलाफ सार्वभौमिक प्राइमरों का उपयोग करना है ताकि (पीसीआर के माध्यम से) क्षेत्रों को बढ़ायाजा सके जो अधिक भिन्न हैं। इस अनुक्रम जानकारी का उपयोग करके, अधिक प्रजाति-विशिष्टता के साथ जांच तैयार की जा सकती है। ये मछली जांच तब संस्कृति-स्वतंत्र तरीके से रोगाणुओं की पहचान को सक्षम कर सकतीहै। इसके अतिरिक्त, आरएनए फिश अद्वितीय रूपात्मक उपनिवेशऔर संक्रमण विशेषताओं में अंतर्दृष्टि दे सकता है, जिसमें फिलामेंटेशन या ऊतक स्थानीयकरण पैटर्न19,20 शामिल हैं। विभिन्न रंगीन मछली जांच का उपयोग एक साथ किया जा सकता है, जो जंगली नेमाटोड नमूनों में रोगाणुओं के बीच दृश्य भेद के साथ-साथ मेजबान15,20 के अंदर माइक्रोब-माइक्रोब गतिशीलता के अवलोकन की अनुमति देता है। इसके अलावा, आरएनए फिश स्टेनिंग को मेजबान-रोगज़नक़ इंटरैक्शन अध्ययनों पर लागू किया जा सकता है जहां एक ज्ञात प्रजाति के संक्रमण और उपनिवेशीकरण को आसानी से मैन्युअल रूप से या रोगज़नक़ लोड पर अंतर्दृष्टि प्रदान करने के लिए स्वचालित दृष्टिकोण के माध्यम से निर्धारित किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, सी एलिगेंस उत्परिवर्ती की तुलना में, जिन्होंने संक्रमणके प्रतिरोध में वृद्धि या कमी की है।
एलिगेंस स्वाभाविक रूप से विभिन्न प्रकार के रोगाणुओं से जुड़े होते हैं। शोधकर्ता इन रोगाणुओं का पता लगाने और पहचान करने के साथ-साथ एक पूरे जानवर के संदर्भ में उनके स्थानीयकरण में अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए आरएनए फिश का उपयोग कर सकते हैं। वांछनीय या दिलचस्प फेनोटाइप वाले रोगाणुओं को इस विधि के माध्यम से पहचाना जा सकता है और फिर आगे के लक्षण वर्णन और अनुक्रमण के लिए अलग किया जा सकता है। जंगली सी एलिगेंस से कई जीवाणु आइसोलेट्स की बहुतायत को आरएनए फिश29 के माध्यम से भी निर्धारित किया जा सकता है। यहां वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करके, उनके मेजबानों के अंदर ज्ञात सूक्ष्मजीवों का निरीक्षण करना और उनकी बातचीत के बारे में अधिक जानना भी संभव है। महत्वपूर्ण रूप से, ऑर्से वायरस और माइक्रोस्पोरिडिया परजीवी हैं और मेजबान से स्वतंत्र रूप से सुसंस्कृत नहीं किए जा सकते हैं, इसलिए फिश मानक विज़ुअलाइज़ेशन टूल है। कॉलोनाइजेशन या संक्रमण को आरएनए फिश के माध्यम से वांछित संवर्धन योग्य बैक्टीरिया के साथ बीजित प्लेटों पर उगाए गए नेमाटोड का उपयोग करके भी निर्धारित किया जा सकता है। एलिगेंस आंत में सूक्ष्मजीवों को धुंधला करने के अलावा, इस प्रोटोकॉल का उपयोग सी ट्रॉपिकलिस या ओशियस टिपुला19,23 जैसे अन्य नेमाटोड उपभेदों के लिए किया जा सकता है।
फिश प्रोटोकॉल का मुख्य लाभ यह है कि यह सी एलिगेंस से जुड़े रोगाणुओं को दागने के लिए एक सरल, त्वरित और मजबूत विधि प्रदान करता है। फिश स्टेनिंग से उत्पादित छवियों में एक उच्च सिग्नल-टू-शोर अनुपात होता है, जो फिश जांच का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है जो नमूने के भीतर एसएसयू के प्रचुर मात्रा में आरएनए को लक्षित करता है। चूंकि आरडीएनए की तुलना में आम तौर पर आरआरएनए के 30 x या उच्च स्तर होते हैं, इसलिए आरआरएनए को लक्षित करने वाली जांच के साथ फिश स्टेनिंग से अधिकांश सिग्नल आरडीएनए30 के बजाय आरआरएनए के कारण होते हैं। इसके अलावा, आरएनए मछली पूरे जानवर के संदर्भ में संक्रमण या उपनिवेश को देखना संभव बनाती है। इस विज़ुअलाइज़ेशन को डीएपीआई के साथ सह-धुंधला मेजबान नाभिक के माध्यम से और / या नमूने के भीतर संक्रमण या उपनिवेशीकरण के स्थानीयकरण को बेहतर ढंग से उजागर करने के लिए सी एलिगेंस के फ्लोरोसेंट-चिह्नित उपभेदों का उपयोग करके सुविधाजनक बनाया गया है। उदाहरण के लिए, माइक्रोस्पोरिडियन-विशिष्ट मछली का उपयोग विभिन्न ऊतकों में जीएफपी अभिव्यक्ति के साथ सी एलिगेंस उपभेदों के एक पैनल का उपयोग करके नेमाटोसिडा डिस्प्लोडेर के ऊतक ट्रोपिज्म को निर्धारित करने के लिएकिया गया था। इसके अतिरिक्त, यह प्रोटोकॉल उन परिवर्तनों के लिए उत्तरदायी है जो शोधकर्ताओं को उनकी विशिष्ट आवश्यकताओं के लिए उपयुक्त आदर्श स्थितियों को निर्धारित करने की अनुमति देते हैं (उदाहरण के लिए, निर्धारण अवधि को समायोजित करना, संकरण तापमान में वृद्धि करना)।
फिश प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण कदम नमूने को ठीक करना है। फिक्सेटिव को जोड़ने के बाद इनक्यूबेशन अवधि एजेंट को नमूने को स्थिर करने के लिए समय की अनुमति देने के लिए आवश्यक है। समय के साथ पीएफए द्वारा प्रोटीन क्षरण के कारण ट्रांसजेनिक फ्लोरोसेंट प्रोटीन युक्त नमूनों के लिए लंबे समय तक इनक्यूबेशन समय आदर्श नहीं हैं। जीएफपी युक्त नमूनों के लिए, जीएफपी सिग्नल को बनाए रखते हुए, परमेबिलाइजेशन की अनुमति देने के लिए इष्टतम निर्धारण समय निर्धारित करना अनिवार्य है।
मछली का उपयोग सी एलिगेंस में बैक्टीरिया, वायरस या माइक्रोस्पोरिडिया के लिए दाग लगाने के लिए किया जा सकता है। हालांकि, मछली के लिए उपयोग किया जाने वाला सबसे अच्छा प्रकार का फिक्सेटिव एजेंट नमूना और डाउनस्ट्रीम आवश्यकताओं पर निर्भर करता है। यह प्रोटोकॉल बैक्टीरिया और वायरस को दागने के लिए प्राथमिक फिक्सेटिव एजेंट के रूप में एक पीएफए समाधान प्रस्तुत करता है। हालांकि, पीएफए माइक्रोस्पोरिडियन बीजाणुओं के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए पर्याप्त नहीं है क्योंकि यह बीजाणु की दीवार में प्रवेश नहीं कर सकता है। बीजाणुओं के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए, एसीटोन का उपयोग इसके बजाय किया जाना चाहिए। हालांकि, पीएफए निर्धारण माइक्रोस्पोरिडिया के अन्य जीवन चरणों के फिश लेबलिंग के लिए कुशल है, जिसमें स्पोरोप्लाज्म, मेरोन्ट और स्पोरोन्ट शामिल हैं। एसीटोन निर्धारण और पीएफए निर्धारण के बीच अन्य प्रमुख अंतर देखे जाते हैं; एसीटोन अधिक सुविधाजनक है क्योंकि नमूने धोने की आवश्यकता के बिना, जोड़ने के बाद फ्रीजर में जल्दी से संग्रहीत किए जा सकते हैं। हालांकि, एसीटोन ट्रांसजेनिक मेजबान में किसी भी मौजूदा जीएफपी को जल्दी से मार देता है। पीएफए पसंदीदा फिक्सेटिव है यदि मेजबान में कुछ शारीरिक संरचनाओं को संरक्षित करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि एसीटोन-फिक्स्ड जानवर अधिक अवक्रमित होते हैं, जिससे कुछ ऊतकों की पहचान अधिक कठिन हो जाती है। क्योंकि नमूने तय किए गए हैं, यह फिश प्रोटोकॉल विवो में मेजबान-माइक्रोब इंटरैक्शन की लाइव इमेजिंग की अनुमति नहीं देता है। हालांकि, पल्स-चेज़ संक्रमण समय पाठ्यक्रम के बाद विभिन्न समय बिंदुओं पर नमूनों के फिश स्टेनिंग से माइक्रोबियल संक्रमण 19,20,31 की कुछ गतिशीलता देखने की अनुमति मिल सकती है।
प्रोटोकॉल में एक और महत्वपूर्ण कदम संकरण से पहले और बाद में नमूनों की पूरी तरह से धुलाई है। संकरण से पहले, माइक्रोफ्यूज ट्यूबों में कीड़े एकत्र करते समय, एनजीएम प्लेटों से अतिरिक्त बैक्टीरिया, या अन्य रोगाणुओं को कृमि के नमूने के साथ ले जाया जा सकता है। पीबीएस-टी के साथ तीन धोने मानक हैं; हालांकि, बाहरी सूक्ष्मजीवों को पर्याप्त रूप से खत्म करने के लिए अधिक धोने की आवश्यकता हो सकती है, खासकर जब भारी दूषित, जंगली-पृथक सी एलिगेंस का उपयोग किया जाता है। मछली के बाद माउंटेड नमूने देखते समय, कुछ अवशिष्ट मछली जांच हो सकती है जो नमूने की पृष्ठभूमि में बड़ी मात्रा में संकेत पैदा करती है। अतिरिक्त और गैर-विशेष रूप से बाध्य जांच को हटाने के लिए धोने का तापमान और वॉश की संख्या महत्वपूर्ण है। पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति को कम करने के लिए, एक घंटे के लिए 1 एमएल डब्ल्यूबी के साथ एक धोने के बजाय, हर 30 मिनट में 1 एमएल डब्ल्यूबी के साथ दो या तीन वॉश करना संभव है। विभिन्न मछली जांच को अलग-अलग धोने के तापमान की आवश्यकता हो सकती है। आमतौर पर, धोने का तापमान संकरण तापमान से 2 डिग्री सेल्सियस ऊपर होता है, लेकिन बहुत अधिक पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति (उच्च शोर) होने पर इसे बढ़ाया जा सकता है।
फिश प्रोटोकॉल प्रजातियों-विशिष्ट माइक्रोबियल आरएनए को लक्षित करने के लिए डिज़ाइन किए गए फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग करता है, लेकिन फिश जांच को अन्य उच्च-प्रतिलिपि प्रतिलेख के लिए डिज़ाइन किया जा सकता है। अन्य मछली जांच में अलग-अलग पिघलने का तापमान हो सकता है, इसलिए इनक्यूबेशन चरणों को वर्णित की तुलना में उच्च या निम्न तापमान पर करने की आवश्यकता हो सकती है। मछली धुंधला मेजबान के भीतर माइक्रोबियल उपनिवेश या संक्रमण के स्थानिक वितरण की पहचान कर सकता है, जिससे मेजबान-माइक्रोब और माइक्रोब-माइक्रोब इंटरैक्शन के लक्षण वर्णन की अनुमति मिलती है। एक सीमा यह है कि केवल कुछ पारंपरिक फ्लोरोफोरे का उपयोग एक साथ किया जा सकता है, जो विभिन्न सूक्ष्मजीवों की संख्या को कम करता है जिन्हें एक ही समय में मछली के माध्यम से पता लगाया जा सकता है। यह सी एलिगेंस में जटिल माइक्रोबायोम अध्ययन के लिए इसके उपयोग को सीमित करता है। हालांकि, मल्टीकलर आरआरएनए-लक्षित मछली गैर-कैननिकल फ्लोरोफोरे के साथ लेबल की गई जांच का उपयोग करती है जो अलग-अलग माइक्रोबियल समूह लेबल15 की संख्या बढ़ा सकती है। एक और सीमा यह है कि निकटता से संबंधित प्रजातियों, विशेष रूप से बैक्टीरिया के बीच अंतर करना मुश्किल है, जिनमें एसएसयू अनुक्रम हैं जो अत्यधिक समान हैं। हालांकि, माइक्रोस्पोरिडिया प्रजातियों के बीच चरम अनुक्रम विचलन इस प्रोटोकॉल (चित्रा 3) 32,33 के साथ उनके भेदभाव को सुविधाजनक बनाने में मदद करता है।
कुल मिलाकर, यह फिश प्रोटोकॉल सी एलिगेंस के भीतर सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए एक तकनीक का वर्णन करता है। यह शोधकर्ताओं को एक बरकरार जानवर के संदर्भ में उपनिवेशऔर संक्रमण का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए एक पारदर्शी और आनुवंशिक रूप से वापस लेने योग्य मॉडल प्रणाली का उपयोग करने की अनुमति देता है, साथ ही मेजबान के भीतर अद्वितीय माइक्रोबियल व्यवहार या आकृति विज्ञान की पहचान करता है। समीक्षा34 के दौरान इस पांडुलिपि का एक प्रीप्रिंट संस्करण पोस्ट किया गया था।
The authors have nothing to disclose.
मैरी-ऐनी फेलिक्स को हमें जंगली नेमाटोड उपभेदों के साथ प्रदान करने के लिए धन्यवाद। इस काम को कैरियर ग्रांट 2143718 के तहत एनएसएफ और कैलिफोर्निया स्टेट यूनिवर्सिटी द्वारा आरजेएल, एनआईएच को आर01 एजी052622 और आर01 जीएम 114139 के तहत ईआरटी को सीएसयूपर्ब न्यू इन्वेस्टिगेटर अवार्ड के तहत और वीएल के लिए अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था।
10% SDS | Invitrogen | AM9822 | |
Acetone | Fisher Scientific | A-11-1 | |
Antifade mounting serum with DAPI (Vectashield) | Vectalab | NC9524612 | |
EDTA | Fisher Scientific | S311-500 | |
FISH probes (see Table 1) | LGC Biosearch Technologies | FISH probes were commercially purchased via custom oligonucleotide synthesis | |
KCl | Fisher Scientific | P217 | |
KH2PO4 | Fisher Scientific | P-286 | |
Na2HPO4 | Fisher Scientific | S375-500 | |
NaCl | Fisher Scientific | S-671 | |
NH4Cl | Fisher Scientific | A-661 | |
Paraformaldehyde | Electron Microscopy Science | 50-980-487 | CAUTION: PFA is a carcinogen. Handle appropriately |
Thermal mixer | Eppendorf | 5384000020 | |
Tris base | Fisher Scientific | BP152 | |
Triton X-100 | Fisher Scientific | BP-151 | |
Tween-20 | Fisher Scientific | BP337-500 |