Denne protokollen beskriver en unik teknikk som kalles doseringsjustert motstandstrening (DART), som kan inkorporeres i presisjonsrehabiliteringsstudier utført på små dyr, for eksempel mus.
Progressiv motstandstrening (PRT), som innebærer å utføre muskelkontraksjoner mot gradvis større ytre belastninger, kan øke muskelmassen og styrken hos friske individer og i pasientpopulasjoner. Det er behov for presisjonsrehabiliteringsverktøy for å teste sikkerheten og effektiviteten av PRT for å opprettholde og/eller gjenopprette muskelmasse og styrke i prekliniske studier på små og store dyremodeller. PRT-metoden og enheten beskrevet i denne artikkelen kan brukes til å utføre dosejustert motstandstrening (DART). DART-enheten kan brukes som et frittstående dynamometer for objektivt å vurdere det konsentriske kontraktile dreiemomentet som genereres av ankeldorsiflexorene hos mus, eller kan legges til et eksisterende isokinetisk dynamometrisystem. DART-enheten kan fremstilles med en standard 3D-skriver basert på instruksjonene og open source 3D-utskriftsfiler som er gitt i dette arbeidet. Artikkelen beskriver også arbeidsflyten for en studie for å sammenligne sammentrekningsindusert muskelskade forårsaket av et enkelt anfall av DART med muskelskade forårsaket av et sammenlignbart anfall av isometriske sammentrekninger (ISOM) i en musemodell av limb-girdle muskeldystrofi type 2B / R2 (BLAJ mus). Dataene fra åtte BLAJ-mus (fire dyr for hver tilstand) antyder at mindre enn 10% av tibialis anterior (TA) muskelen ble skadet fra et enkelt utbrudd av DART eller ISOM, med DART som mindre skadelig enn ISOM.
Trening gir mange helsemessige fordeler på skjelettmuskulatur (omtalt i Vina et al.1). Spesielt er progressiv motstandstrening (PRT), som innebærer å utføre muskelkontraksjoner mot gradvis større eksterne belastninger (f.eks. Vektstenger, manualer, kabel-trinsevektkretser), kjent for å bidra til å øke muskelmasse og styrke hos både friske individer og pasientpopulasjoner (gjennomgått i tidligere publikasjoner 2,3 ). PRT er basert på overbelastningsprinsippet, som sier at når muskelen trekker seg sammen mot gradvis større ytre belastninger, tilpasser den seg ved å øke sitt fysiologiske tverrsnittsareal samt kraftproduserende kapasitet4. Eksisterende modeller av PRT hos gnagere inkluderer stigeklatring med motstand påført halen, sammentrekning av agonistmuskler mot motstand fra antagonister, løping med vektet sele, en hukøvelse fremkalt av et elektrisk støt og motståtthjulkjøring 5,6,7,8,9,10 (gjennomgått i tidligere publikasjoner 11,12 ). Imidlertid er det for tiden ingen forskningsverktøy for å utføre nøyaktig muskelmålrettet, doseringsjustert PRT hos mus som ligner PRT-metodene og enhetene som brukes i menneskelig klinisk forskning og praksis12,13. Dette begrenser utprøvernes evne til å studere sikkerheten og effektiviteten av nøyaktig dosert PRT i grunnleggende og prekliniske studier på mus.
For å overvinne denne barrieren utvikles en PRT-metodikk og enhet i denne studien basert på kabel-trinse-vektkretsdesignene som brukes i motstandstreningsutstyr i moderne gymsaler14,15,16. Denne metoden for PRT kalles doseringsjustert motstandstrening (DART), og enheten kalles DART-enheten. I tillegg til funksjonaliteten som et presisjonsrehabiliteringstreningsverktøy, kan DART-enheten også brukes som et frittstående instrument for objektivt å vurdere det maksimale konsentriske kontraktile dreiemomentet som kan genereres av tibialis anterior (TA) muskelen i en mus, på samme måte som maksimumet for en repetisjon (1RM, den maksimale belastningen som kan løftes / flyttes / presses / knebøyes bare en gang mens du opprettholder god form) vurderes hos mennesker17, 18. DART-enheten kan også kobles til et spesialbygd eller kommersielt isokinetisk dynamometer for å måle den høyeste isometriske tetaniske kraften produsert av TA-muskelen i en mus (sammenlignbar med maksimal frivillig sammentrekning [MVC] hos mennesker) og deretter utføre doseringsjustert PRT med en motstand som er basert på topp tetanisk kraft (f.eks. 50% av toppkraften).
Denne artikkelen beskriver konstruksjonen av DART-enheten og forklarer hvordan den kan kobles til et spesialbygd dynamometer, som er beskrevet i tidligere publikasjoner 19,20,21,22, for å vurdere kontraktilt dreiemoment og utføre DART. Studien beskriver også hvordan DART-enheten ble brukt til å sammenligne treningsindusert muskelskade forårsaket av en enkelt DART (4 sett med 10 konsentrisk forspent sammentrekninger med 50% 1RM) til skade forårsaket av en sammenlignbar kamp av isometriske sammentrekninger (4 sett med 10 isometriske sammentrekninger) i en musemodell av limb-girdle muskeldystrofi type 2B (LGMD2B, eller LGMDR2)23,24. Musemodellen som ble studert mangler et protein kalt dysferlin, som spiller en viktig rolle i å beskytte skjelettmuskulaturen mot forsinket muskelskade etter skadelige eksentriske sammentrekninger 22,25,26,27,28,29,30 . Det har også blitt demonstrert hos dysferlin-mangelfulle hannmus at konsentrisk partisk tvungen trening ikke er like skadelig som eksentrisk partisk tvungen trening, og at tidligere eksponering for konsentrisk partisk trening gir beskyttelse mot skade fra et påfølgende anfall av eksentrisk partiske sammentrekninger22. Siden den nåværende studien ble utført for å teste muligheten for den nåværende DART-metoden og enheten ved å utføre dosejustert, konsentrisk partisk motstandstrening, ble mannlige dysferlinfattige mus valgt for undersøkelsen for å sammenligne nye data fra DART-enheten med tidligere data. I fremtidige studier vil kvinnelige BLAJ-mus bli inkludert for å studere effekten av kjønn som en biologisk variabel i forhold til responsen på DART. Mus som var ~ 1,5 år gamle ble studert siden de allerede har dystrofiske forandringer i mange muskelgrupper og derfor modellerer den patofysiologiske tilstanden der muskler kan være hos pasienter som allerede har muskelsvakhet og sløsing og søker rehabiliterende behandling for å opprettholde muskelmasse og styrke26.
Denne artikkelen presenterer trinnvise instruksjoner om hvordan du konstruerer en enhet for å utføre en type presisjonsrehabiliteringstrening kalt doseringsjustert motstandstrening (DART). Arbeidet beskriver også anvendelsen av DART-enheten og metodikken i en treningsstudie for å sammenligne muskelskade 3 dager etter et enkelt anfall av DART (DART-gruppe) med skade 3 dager etter en sammenlignbar kamp med isometrisk trening (ISOM-gruppen).
De kritiske trinnene i protokollen er riktig konstr…
The authors have nothing to disclose.
Denne studien ble finansiert av tilskudd fra Jain Foundation Inc., R03HD091648 fra NICHD, et pilotstipend fra AR3T under NIH P2CHD086843, en FRAP-pris fra EACPHS ved Wayne State University, en fakultetsoppstartspakke fra Wayne State University, og en underkontrakt fra 1R01AR079884-01 (Peter L. Jones PI) til JAR. Denne studien ble også finansiert av et amerikansk fysioterapiforening – Michigan (APTA-MI) forskningsstipend til JMB, MEP og JAR. Forfatterne anerkjenner Dr. Renuka Roche (lektor, Eastern Michigan University, MI) for kritisk å lese manuskriptet og gi tilbakemelding. Forfatterne anerkjenner Mr. Anselm D. Motha for råd om 3D-utskrift. Forfatterne takker pasientene med dysferlinopatier som har delt sine historier på Jain Foundation nettside på https://www.jain-foundation.org/patient-physician-resources/patient-stories, spesielt deres erfaringer med trening.
AnMiao Star 608 Ceramic Ball Bearing | Anmiao Star (N/A) | AMS127 | High precision, low friction wheel bearing. If make and model is not commercially available, an alternative version of a 608 low-friction wheel bearing, 8 mm bore diameter, 22 mm outside diameter, with silicon nitride ceramic balls in 420 stainless steel housing should suffice. Excess friction in the wheel bearing will adversely impact performance of the DART device and will increase overall resistance to muscle contractions. |
Axio Scope.A1 microscope | Carl Zeiss (Peabody, MA) | Product #Axio Scope.A1 | Light and fluorescence microscope |
B6.A-Dysfprmd/GeneJ (a.k.a. BLAJ mice) | The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). Special colony maintained by The Jain Foundation Inc. for collaborators who study dysferlin. | Stock #012767 | Dysferlin deficient mice that model human limb girdle muscular dystrophy type 2B/R2. |
Bipolar, transcutaneous, neuromuscular electrical stimulation (NMES) electrode | Harvard Apparatus, Holliston, MA | BS4 50–6824 | Electrode for NMES. If this electrode is not commercially available, please contact corresponding author for alternatives. |
Coplin Staining Dish | ThermoFisher (Waltham, MA) | Catalog No. S17495 | Staining dish/jar for hematoxylin and eosin (H&E) staining of sections |
Cura 4.4.1. Software | Ultimaker, Utrecht, Netherlands | Ultimaker Cura 4.4.1. | Slicing software to convert stereolithography files into G-CODE files |
Deltaphase isothermal gel heating pad | Braintree Scientific (Braintree, MA) | Item #39DP | Heating pad to provide thermal support to animals while under anesthesia |
Eosin Y | Millipore Sigma (Burlington, MA) | HT110132-1L | Pink cytoplasmic stain |
Gorilla Super Glue | The Gorilla Glue Company (Cincinnati, OH) | Gorilla Super Glue Micro Precise | Cyanoacrylate adhesive to bond PLA components |
Hematoxylin solution, Gill No.3 | Millipore Sigma (Burlington, MA) | GHS332-1L | Dark blue stain for nuclei |
HM525NX cryostat | ThermoFisher (Waltham, MA) | Catalog #HM525NX | Cryostat to make frozen sections of muscle |
Lab Wipes. Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-Ply | ThermoFisher (Waltham, MA) | Catalog No. 06-666. Manufacturer #34120 | Laboratory wipes to blot mineral oil from muscle tissue before snap freezing and for other purposes. |
Labview 2014 | National Instruments, Austin, Texas, USA | Labview 2014 | Software for custom-written programs/routines that operate the dynamometer and trigger the NMES stimulator. |
Liquid nitrogen HDPE Dewar Flasks | ThermoFisher (Waltham, MA) | S34074B. Thermo Scientific 41502000/EMD | Flask to hold liquid nitrogen for snap freezing muscle or other tissue |
Magic depilatory cream | Softsheen Carson (New York, NY) | N/A | Razorless hair removal cream |
Metal alligator clip | JINSHANGTOPK (web-based business) | 24Pcs 51mm Metal Alligator Clip Spring Clamps | Spring clamp to hold tibial pin |
Micrscope slides | Globe Scientific (Mahwah, NJ) | 1354W. Diamond White Glass Slides | Charged microscope slides |
Mineral Oil | ThermoFisher (Waltham, MA) | BP26291 | Mineral oil to cryoprotect muscle tissue before snap freezing |
Monoprice Premium 3D Printer Filament PLA | Monoprice (Rancho Cucamonga, CA) | #11778 | Premium 3D Printer Filament PLA 1.75mm 1 kg/spool, Gray. This is the material used to 3D print device components. |
Monoprice Select Mini V2 3D printer | Monoprice (Rancho Cucamonga, CA) | Mini V2 3D | 3D printer for computer-aided fabrication of device components. |
NIH Image software | National Instritues of Health (NIH, Bethesda, MD) | NIH Image for Windows | Image processing and analysis software used to quantify area of muscle damage. NIH Image is also known as Image J. |
Photoshop CS4 | Adobe (San Jose, CA) | Creative Suite (CS4). 64 bit version for Windows | Image processing and analysis software used to generate tiled/stiched images of entire muscle cross-section from images of indvidual overlapping fields |
PSIU6 stimulation isolation unit | Grass Instruments (West Warwick, RI) | PSIU6 isolation unit | Isolation unit for NMES. Stimulators, such as Model 4100 from A-M come with a built in stimulation isoloation unit |
Roboz 4-0 silk black braided suture material | Roboz Surgical (Gaithersburg, MD) | Roboz Surgical SUT152 | Suture material to connect DART device footplate to dynamometer footplate or resistance for resistance training |
S48 square pulse stimulator | Grass Instruments (West Warwick, RI) | S48 Stimulator | Laboratory electrical stimulator for NMES . If this stimulator is not commercially available, Model 4100 Isolated High Power Stimulator from A-M systems could be an alternative. Please contact co-author Jones for more information. |
Scott’s bluing reagent | Ricca Chemical Company (Arlington, TX) | 6697-32 | Bluing solution that intensifies hematoxylin nuclear staining |
SigmaStat version 3.5 | Systat Software (San Jose, CA) | SigmaStat version 3.5 | Statistical software package for statistical analyses |
Tabletop isoflurane vaporizer | VetEquip (Livermore, CA) | Item #901801 | Inhaled tabletop anesthesia system |
Triple antibiotic first aid ointment | Global Health Products (wed-based business) | Globe Triple Antibiotic First Aid Ointment, 1 oz (2-Pack) First Aid Antibiotic Ointment | Antibiotic ointment applied on tibial pin as part of post-procedural care |