마우스의 심방 세동 감수성을 평가하기위한 경식도 심방 페이싱의 최적화
Summary
본 프로토콜은 마우스에서 심방 세동 감수성을 평가하기 위해 경식도 심방 페이싱을 사용할 때 실험 파라미터의 최적화를 설명합니다.
Abstract
심방 세동 (AF)에 대한 유전 적 및 후천적 위험 인자의 마우스 모델은 AF의 분자 결정 요인을 조사하는 데 가치있는 것으로 입증되었습니다. 프로그램된 전기 자극은 생존 절차로 경식도 심방 페이싱을 사용하여 수행할 수 있으므로 동일한 동물에서 연속 테스트가 가능합니다. 그러나 수많은 페이싱 프로토콜이 존재하여 재현성이 복잡합니다. 본 프로토콜은 연구 간의 재현성을 향상시키기 위해 모델 별 실험 매개 변수를 개발하기위한 표준화 된 전략을 제공하는 것을 목표로합니다. 예비 연구는 연구 당시의 연령, 성별 및 페이싱 프로토콜의 매개변수(예: 페이싱 모드 및 AF 감수성의 정의)를 포함하여 조사 중인 특정 모델에 대한 실험 방법을 최적화하기 위해 수행됩니다. 중요한 것은 높은 자극 에너지를 피하기 위해주의를 기울여야하는데, 이는 부주의 한 부교감 신경 활성화로 신경절 신경총의 자극을 유발할 수 있으며, 이는 페이싱 중 과장된 방실 (AV) 차단에 의해 나타나고 종종 인공물 AF 유도와 관련이 있습니다. 이 합병증을 나타내는 동물은 분석에서 제외해야합니다.
Introduction
심방 세동 (AF)은 여러 후천적 및 유전 적 위험 요소에 대한 최종 공통 경로를 나타냅니다. AF 기질의 병태생리학적 메커니즘을 조사하는 연구의 경우, 마우스 모델은 유전자 조작의 용이성과 일반적으로 상이한 임상 표현형 1,2,3에 대해 인간에서 관찰된 AF 감수성을 재현한다는 사실을 고려할 때 유리하다. 그러나 마우스는 자발적인 AF4를 거의 개발하지 않으므로 도발적인 심방 페이싱 연구를 사용해야합니다.
프로그램 된 전기 자극 (PES)은 심장 내5 또는 경식도6 페이싱을 사용하여 쥐 심방 전기 생리학 및 AF 감수성을 평가하기 위해 수행 될 수 있습니다. 경식도 접근법은 생존 절차로서 특히 유리하지만, 그 사용은 수많은 발표 된 실험 프로토콜 7,8 및 재현성을 방해 할 수있는 가변성 원인9에 의해 복잡합니다. 또한 보고된 프로토콜 비교가 제한적으로 인해 적절한 페이싱 프로토콜을 선택하는 것이 어렵습니다.
현재 프로토콜은 재현성을 높이기 위해 쥐 AF 감수성을 평가하기 위한 모델별 경식도 PES 방법을 개발하기 위한 체계적인 전략을 활용하는 것을 목표로 합니다. 중요하게도, 초기 파일럿 연구는 연령, 성별 및 페이싱 모드 변동성을 고려하여 페이싱 프로토콜을 최적화하기 위해 수행되며, 페이싱은 결과를 혼란스럽게 할 수 있는 부주의한 부교감 신경 자극을 최소화하도록 설계되었습니다9.
Protocol
Representative Results
Discussion
경식도 심방 페이싱은 동일한 동물에 대한 연속 연구를 허용할 뿐만 아니라 일반적으로 지속 시간이 심장 내 연구(~20분)보다 짧기 때문에 마취 사용과 전기 생리학적 매개변수에 미치는 영향을 최소화합니다.
처음에는 각 개별 마우스 모델에 대해 방법을 최적화하는 것이 중요합니다. 노화는 정상 마우스(18, 19)에서 AF 유도성을 증가시키고…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
그림 2 는 BioRender.com 로 작성되었습니다. 이 작업은 국립 보건원 (HL096844 및 HL133127)의 국립 심장, 폐 및 혈액 연구소의 보조금으로 지원되었습니다. 미국 심장 협회 (2160035, 18SFRN34230125 및 903918 [MBM]); 및 국립 보건원 (UL1 TR000445)의 번역 과학 발전을위한 국립 센터.
Materials
| 27 G ECG electrodes | ADInstruments | MLA1204 | |
| 2-F octapolar electrode catheter | NuMED | CIBercath | |
| Activated carbon canister | VetEquip | 931401 | |
| Analysis software | ADInstruments | LabChart v8.1.13 | |
| Biological amplifier | ADInstruments | FE231 | |
| Data acquisition hardware | ADInstruments | PowerLab 26T | |
| Eye ointment | MWI Veterinary | NC1886507 | |
| Heating pad | Braintree Scientific | DPIP | |
| Isoflurane | Piramal | 66794-017-25 | |
| Stimulator | Bloom Associates | DTU-210 | |
| Stimulus Isolator | World Precision Instruments | Model A365 |
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