En Face Preparación del cojín endocárdico para el análisis de morfogénesis plana en embriones de ratón

Tamara Gonzalez-Costa; Jose Luis de la Pompa; Joaquim Grego-Bessa

doi:10.3791/64207

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Artículo de método

En Face Preparación del cojín endocárdico para el análisis de morfogénesis plana en embriones de ratón

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DOI:

10.3791/64207

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27 de julio de 2022

Tamara Gonzalez-Costa¹^,² , Jose Luis de la Pompa¹^,² , Joaquim Grego-Bessa¹^,²

¹Intercellular Signalling in Cardiovascular Development and Disease Laboratory, Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), ²Ciber de Enfermedades Cardiovasculares

En este artículo

Resumen

Clásicamente, el endocardio del primordio de la válvula embrionaria de ratón se ha analizado utilizando secciones transversales, coronales o sagitales. Nuestro novedoso enfoque para imágenes bidimensionales en la cara del endocardio en regiones valvulogénicas permite el análisis de polaridad plana y reordenamiento celular del endocardio durante el desarrollo de la válvula.

Resumen

El estudio de los mecanismos celulares y moleculares subyacentes al desarrollo del corazón de los mamíferos es esencial para abordar la cardiopatía congénita humana. El desarrollo de las válvulas cardíacas primitivas implica la transición epitelial a mesenquimal (EMT) de las células endocárdicas del canal auriculoventricular (AVC) y las regiones del tracto de salida (OFT) del corazón en respuesta a las señales inductivas locales de miocardio y endocardio. Una vez que las células se deslaminan e invaden la matriz extracelular (jalea cardíaca) ubicada entre el endocardio y el miocardio, se forman los cojines endocárdicos primitivos (CE). Este proceso implica que el endocardio tiene que llenar los huecos dejados por las células deslaminadas y tiene que reorganizarse para converger (estrechar) o extenderse (alargarse) a lo largo de un eje. La investigación actual ha implicado la vía de polaridad de células planas (PCP) en la regulación de la localización subcelular de los factores involucrados en este proceso. Clásicamente, las fases iniciales del desarrollo de la válvula cardíaca se han estudiado en secciones transversales de corazones embrionarios o en explantes ex vivo AVC u OFT cultivados en geles de colágeno. Estos enfoques permiten el análisis de la polaridad apico-basal, pero no permiten el análisis del comportamiento celular dentro del plano del epitelio o de los cambios morfológicos de las células migratorias. Aquí, mostramos un enfoque experimental que permite la visualización del endocardio en regiones valvulogénicas como un campo plano de células. Este enfoque experimental brinda la oportunidad de estudiar PCP, topología plana y comunicación intercelular dentro del endocardio de OFT y AVC durante el desarrollo de la válvula. Descifrar nuevos mecanismos celulares implicados en la morfogénesis de la válvula cardíaca puede contribuir a comprender la cardiopatía congénita asociada con defectos del cojín endocárdico.

Introducción

El corazón es el primer órgano funcional de un embrión de mamífero. Alrededor del día embrionario (E) 7.5 en ratones, las células precardíacas bilaterales del mesodermo forman la media luna cardíaca en el lado ventral¹. La media luna cardíaca contiene dos poblaciones de células precardíacas que incluyen progenitores del miocardio y el endocardio². Alrededor de E8.0, los precursores cardíacos se fusionan en la línea media, formando el tubo cardíaco primitivo que consta de dos tejidos epiteliales, el miocardio externo y el endocardio interno, que es un endotelio especializado separado por una matriz extracelular llamada ja....