Method Article

הערכת התפוקה של תרכובות על לוח TLC באמצעות טכניקת התאורה הכחולה-LED

DOI:

10.3791/64230

⸱

October 6th, 2022

 , 
1Department of Marine Biotechnology and Resources, National Sun Yat-sen University, 2Doctoral Degree Program in Marine Biotechnology, National Sun Yat-sen University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול הנוכחי פיתח שיטה להערכת התפוקה של תרכובות על לוח TLC באמצעות טכניקת התאורה הכחולה-LED. היתרונות של גישה זו הם שהיא בטוחה, יעילה, זולה, ומאפשרת לחוקר למדוד מספר דגימות בו זמנית.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כרומטוגרפיה של שכבה דקה (TLC) היא טכניקה אנליטית נגישה שנעשה בה שימוש נרחב במחקר בכימיה אורגנית כדי לכמת את התשואה של דגימות לא ידועות. המחקר הנוכחי פיתח שיטה יעילה, זולה ובטוחה להעריך את תפוקת הדגימות על צלחת TLC באמצעות תאורת ה-LED הכחולה. לובסטטין שהופק מאספרגילוס טראוס היה התרכובת לדוגמה ששימשה במחקר הנוכחי. מודלים של רגרסיה המבוססים על תקן lovastatin שימשו להערכת התשואה של lovastatin. הושוו שלוש שיטות: ביו-אסאי, גילוי UV ותאורת LED כחולה. התוצאה הראתה כי שיטת התאורה blue-LED יעילה הרבה יותר בזמן מאשר שיטות זיהוי UV ובדיקת ביולוגיה. בנוסף, תאורת ה-LED הכחולה הייתה אופציה בטוחה יחסית בגלל החשש מסכנות ביולוגיות בשיטת הביו-אסאי (למשל, זיהום מיקרוביאלי) וחשיפה לקרינה אולטרה סגולה בשיטת גילוי ה-UV. בהשוואה לשיטות היקרות הדורשות מכשירים מיוחדים והכשרה ארוכת טווח לפני עבודה עצמאית, כגון GC, HPLC ו- HPTLC, השימוש בתאורת Blue-LED היה אפשרות חסכונית להעריך את תפוקת הדגימות מצלחת TLC.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כרומטוגרפיה בשכבה דקה (TLC) נמצאת בשימוש נרחב כטכניקה איכותית וכמותית בתחום הכימיה האורגנית 1,2,3. היתרונות העיקריים של TLC הם שהיא מספקת זיהוי מהיר, דרישות מדגם גמישות, ואינה דורשת ציוד מיוחד4. עד כה, למרות שגישות מתקדמות רבות הוקמו, TLC היא עדיין השיטה העיקרית לזיהוי דגימות לא ידועות בתערובת. עם זאת, האתגר של גישה זו הוא היעדר ציוד בטוח וזול לכימות תפוקת הדגימה, במיוחד לפיתוח מעבדות עם תקציבים מוגבלים. המחקר הנוכחי, אם כן, נועד לפתח שיטה יעילה, בטוחה וזולה בשילוב עם TLC כדי להעריך את התשואה של הדגימות.

שלא כמו TLC בעל ביצו....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול הנוכחי מתואר באמצעות lovastatin כדוגמה. לובסטטין הופק מאספרגילוס טראוס בן שבוע.

1. מיצוי תרכובת

הערה: לפרטים על מיצוי תרכובת, ראו איור 1.

  1. תרבית אספרגילוס טראוס על אגר דקסטרוז תפוחי אדמה (PDA, ראו טבלת חומרים) בינונית ב-30 מעלות צלזיוס.
  2. ייבשו את התרבית בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. העבירו את התרבית המיובשת לצינור של 50 מ"ל באמצעות פינצטה מעוקרת והוסיפו 15 מ"ל אתיל אצטט.
  3. נערו את התערובת במרץ על ידי מערבולת במשך דקה אחת ודגרה במשך שעה אחת בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס עם רעידות ב-200 ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה הציג את שיטת תאורת ה-LED הכחולה כדי להעריך את תפוקת התרכובות, ושיטה זו אומתה והושוותה לשיטות ביו-אסאי ו-UV שזוהו (טבלה 1). מודלי הרגרסיה פותחו על בסיס ממדי הפסים וריכוז התקנים לשלוש שיטות, בהתאמה, כדי לחזות את תפוקת הדגימות. ראשית, בתוצאות שיטת הביו-אסאי, ריבוע ה-R בין ממדי אזור העיכוב לתקני לובסטטין היה 0.99, ותפוקת הדגימה הייתה 0.56 מ"ג שנחזתה על ידי מודל הרגרסיה (איור 2). שנית, בשיטת גילוי UV, ריבוע ה-R בין תקני הלובסטטין לבין ממד הפסים על לוחית ה-TLC היה 0.97, ות.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר הנוכחי תיאר גישה חדשה, תאורת ה-LED הכחולה, לכמת תרכובות ללא שימוש בציוד יקר ומתמחה, כגון שיטת HPTLC, HPLC ו-GC, והשיטה הושוותה לשיטות הביו-אסאי וה-UV שזוהו כדי להעריך את ביצועי הכימות. כתוצאה מכך, הוסק כי שיטת התאורה הכחולה-LED היא פרוטוקול בטוח ויעיל יחסית המשמש לכימות התפוקה של תרכובות ממוקדות על צלחת TLC.

מחקרים קודמים דיווחו על מספר שיטות כמותיות ללא שימוש בציוד כמותי מיוחד, וכל המחקרים הראו כי דיוק הכמות היה קרוב לזה של השימוש בציוד מיוחד 2,9,10,11,12 (<.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי משרד המדע והטכנולוגיה, טייוואן (MOST 108-2320-B-110-007-MY3).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
אגר קונדלב בקטריולוגי אמריקאי1802.00
Aspergillus terreus  ATCC 20542
תאורת LED כחולהMICROTEKBio-1000F
צנטריפוגהתרמו מדעית HERAEUS Megafuge 8
מנורת UV קומפקטיתUVPUVGL-25
אתיל אצטטMACRONMA-H078-10
נייר סינון 125 מ"מADVANTEC60311102
ImageJNIHתוכנה חופשיתhttps://imagej.nih.gov/ij/download.html
לובסטטין תקןACROSA0404262
MiBio פלואו MICROTEKV1.04
n-הקסאןC-ECHOHH3102-000000-72EC
OriginProOriginLab9.1https://www.originlab.com/origin
מרק דקסטרוז תפוחי אדמה HSTBIO MEDIA
מאייד סיבוביEYELASB-1000
חומצה גופרתיתFluka30743-2.5L-GL
ג'ל סיליקה TLC 60 F254MERCK1.05554.0001
חומצה טריפלואורואצטיתAlfa Aesar10229873
מכונת רטט אולטרסאונדDELTADC600
110533

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pyka, A. Detection progress of selected drugs in TLC. BioMed Research International. 2014, 732078(2014).
  2. Hess, A. V. I. Digitally enhanced thin-layer chromatography: An inexpensive, new technique for qualitative and qua....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Thin Layer ChromatographyBlue LED IlluminationTLC Plate YieldLovastatin QuantificationRegression Model AnalysisBioassay MethodUV DetectionOrganic ExtractionSilica Gel ChromatographyNatural Products Chemistry

Related Articles