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方法論記事

覚醒した頭部固定ラットのニューロイメージングのための頭部インプラント

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DOI:

10.3791/64324

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2022年9月7日

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この記事について

サマリー

覚醒した頭部固定ラットの機能的イメージングのための詳細な新しい手順が記載されている。

要約

前臨床および基礎科学研究で一般的に使用される麻酔薬は、脳の代謝、ニューロン、および血管機能に抑うつ影響を及ぼし、神経生理学的結果に悪影響を与える可能性があります。研究研究のために覚醒している動物を使用することは有利ですが、データ収集中のモーションアーチファクトを最小限に抑えるために動物を落ち着かせて静止させるという大きな課題をもたらします。より小さなサイズのげっ歯類(マウスなど)での覚醒イメージングは非常に一般的ですが、ラットはより大きく、より強く、イメージングに必要な長時間にわたって運動拘束と頭の固定に反対する傾向があるため、ラットでは乏しいままです。カスタマイズされた手縫いのスリング、3Dプリントされたヘッドインプラント、ヘッドキャップ、およびヘッドフレームを使用した、覚醒した頭部固定ラットのニューロイメージングの新しいモデルについて説明します。シングルウィスカー刺激の単一の試行の後に得られた結果は、誘発された機能的反応の強度の増加を示唆しています。覚醒した頭部固定ラットからの誘発機能応答の獲得は、麻酔をかけたラットからのそれよりも速く、信頼性が高く、再現性があり、繰り返しの縦断的研究に使用できます。

概要

基礎的、前臨床的、およびトランスレーショナルな科学的ニューロイメージング調査のほとんどは、麻酔をかけられた動物から取得されます1,2。麻酔薬は実験を容易にしますが、脳と体の代謝、血圧、心拍数に継続的に影響を与えます3。麻酔薬の種類と投与期間と投与経路は、再現性と翻訳障害に寄与する可能性のある交絡変数をデータ解釈に追加します4。覚醒、頭部固定ラットの神経画像研究の主なボトルネックは、準備およびデータ収集プロセス全体を通してラットを静止させ、落ち着かせ続ける必要があることです。小さな動きは不当なモーションアーティファクトを生成し、データの分析と解釈に悪影響を与える可能性があります。

カスタマイズされたスリング、3次元(3D)プリントされたヘッドインプラント、ヘッドキャップ、およびヘッドフレームを使用した、覚醒した頭部固定ラットからのニューロイメージングの新しいモデルが考案され、実験が容易になるいくつかの利点があります。3Dヘッドインプラントは軽量で、トランスフィックスに必要な頭蓋骨のごく一部をカバーしています。3Dプリントされたヘッドインプラントとキャップは、コンピューター支援設計(CAD)ソフトウェアを使用して設計されています。ウィスカ刺激、データ取得、データ分析、お....

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プロトコル

すべての手順は国立衛生研究所のガイドラインに準拠しており、カリフォルニア大学アーバイン校の動物管理および使用委員会によって承認されています。この研究では、7匹の雄と1匹の雌ラット(Sprague-Dawley、体重:185-350g)を使用しました。研究終了後、ラットを二酸化炭素の過剰摂取を用いて屠殺した。

1.さまざまなコンポーネントの設計

  1. ヘッドインプラントの設計:
    1. CADソフトウェア(図1C)を使用して頭部インプラントを作成し、体性感覚皮質を中心としたブレグマの後方および正中線に隣接する領域を画像化するように設計します。ヘッドインプラントが、イメージング領域から離れた頭蓋骨の0.9mmから1.9mmの領域をカバーしていることを確認してください。
    2. 3本のネジだけで、ヘッドインプラントをラットの頭蓋骨に固定します。画像化された半球の反対側の正中線の反対側に残るように、すべてのネジ穴を設計します。
    3. 図1Dに示すように、ヘッドインプラントの上部に内側からくり抜かれたバーを配置して、ワイヤーがヘッドキャップをヘッドインプラントに固定できるようにします。
  2. ヘッドキャップのデザイン:
    1. ヘッドキャップ....

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結果

麻酔をかけたラットの1回の試行からの代表的な光学画像信号と、覚醒したラットの(収集された40回の試行のうち)合計応答を示します(図4)。覚醒ラットのシングルウィスカー刺激の信号強度は、麻酔をかけたラットよりも高い閾値で視覚化することができ、覚醒動物からのより強い信号を示す。ラットのC2ウィスカーを5Hzで1秒間刺激し、機能応答をベースラインと比較した分数変化として表示します。暗い領域(負の閾値より下)はニューロン活動の主要な領域であり、明るい白い領域(正の閾値より上)は刺激9に対する酸素化された血液応答を示す。画像は、矢印で示されているように、左から右が吻側から尾側(C)方向、上から下が内側から外側(L)方向になるように配置されています。

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ディスカッション

覚醒、頭部固定ラットイメージングの使用は、容易さとカスタマイズの点で多くの利点を提供します。カスタム設計されたスリングにより、ラットを通気性のあるネット素材で包むことができ、動物を閉じたプラスチック製の拘束室に長時間囲む必要がなくなります10,11。ラットは、ラットの軽度の鎮静レベル(1.0-2.5 mg / kg)未満の非常に低用量のアセプロマジンを使用して、連続したイメージングセッションの長期間にわたって落ち着いてストレスのない状態に保たれます12。ラットを安定させ、イメージングセッション中のモーションアーチファクトをさらに排除するために、ベルクロストリップが使用されます。ベルクロストリップは、長時間の不必要な体のくびれを避けるために、互いに3〜6mmの位置に配置されます。ラットは、準備およびデータ取得中にスリングで落ち着いて快適に休むことができるように、若い年齢でスリングで訓練され、慣れています。予備的な結果に基づいて、体重が約150〜175 gの若いラットは、年配の.......

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開示事項

著者は開示する利益相反を持っていません。

謝辞

クララ・ジョーンズ、ジェームズ・スターウォルト、リン・ホアン、ヨン・ジュンハ、アミルソヘイル・ザレがラットの訓練とスリングの準備に協力してくれたことに感謝します。資金提供は、国立衛生研究所(NIH、助成金番号:NS119852)およびLeducq財団(助成金番号:15CVD02)から提供されました。

....

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
ラットチャールズ リバースプレイグ ドーリー
イソフルランピベタール21295098全身麻酔薬
リドカイン HCl 2% 注射フェニックスL-2000-04局所麻酔薬
アトロピン硫酸塩注射Vedco5098907512 呼吸を助ける
乳酸リンガー注射液Vedco
フルニキシン注射Vedco6064408670疼痛管理
エンロサイト注射 (エンロフロキサシン 2.27%)VetOne501084感染を避ける
PromAce 注射 (マレイン酸アセプロマジン)Beohringer Ingelheim136059
Animax 軟膏Dechra 獣医製品122-75ナイスタチン1000グラムあたり1000単位、ネオマイシン硫酸塩2.5mg/グラム、チオストレプトン2500グラム/グラム、トリアムシノロンアセトニド1mg/グラムの有効成分
Puralube眼科用軟膏Dechra Veterinary Products211-38
ビドンヨードPVP準備パッドメドラインMDS093917ベタジンジェネリック
イソプロピルアルコールスワブBD326895
Vetbond組織接着剤3M1469SB
バー (ドリルビット)、標準オペテラリー カーバイドSS ホワイト バー14829#3 バー
ネジ、00-90 x 1/8 フラットヘッド ステンレス鋼J.I. モリスF0090CE125アンカー ネジ
定位固定システムKopf Instruments1430
ホメオサーミック ヒーティング ブランケットハーバード Apparatus50-7220-F
パルスオキシメータ&心拍数モニターKent ScientificMouseStat Jr.
ワセリンフィッシャーサイエンティフィP66-1LBワセリン汎用
ワイヤー、裸銅フィッシャーサイエンティフィック15-545-2C20ゲージ
ティーツコールドキュアパウダーピアソンデンタルC73-0054 有効成分:メタクリル酸メチル
ティーツ コールドキュア リキッドピアソンデンタルC73-0078 有効成分:メタクリル酸メチル
シリコーンモールドゴムスムースオンボディダブルファストシリコン
ポリマーMetricide 28(殺菌剤)MetrexOct-05
インク、黒ペリカン301051
歯科用ドリルNSKデンタルアルティメットXL-F
3DプリンターPrusaResearchi3 MK3S +
クロに縫う90030
ペットスクリーニングユーティリティファブリックジョアン10173334ネット材料
バー(ドリルビット)、標準オペレーターカーバイドSSホワイトバーズ14829#1バー
50989088317ポックインドファスナーベル

参考文献

  1. Cicero, L., Fazzotta, S., Palumbo, V. D., Cassata, G., Lo Monte, A. I. Anesthesia protocols in laboratory animals used for scientific purposes. Acta Biomedica. 89 (3), 337-342 (2018).
  2. Lythgoe, M. F., Sibson, N. R., Harris, N. G. Neuroimaging of animal models of brain disease. B....

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