هنا ، يتم استخدام الزرد (Danio rerio) كنموذج لدراسة ردود الفعل التحسسية والاستجابات المناعية المتعلقة بمتلازمة ألفا غال (AGS) من خلال تقييم ردود الفعل التحسسية لعاب القراد واستهلاك لحوم الثدييات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج حيواني لسمك الزرد لدراسة ردود الفعل التحسسية استجابة لجزيئات لعاب القراد الحيوية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
القراد هي ناقلات مفصلية تسبب المرض عن طريق انتقال مسببات الأمراض ويمكن أن تكون لدغاتها مرتبطة بردود الفعل التحسسية التي تؤثر على صحة الإنسان في جميع أنحاء العالم. في بعض الأفراد ، تم تحفيز مستويات عالية من الأجسام المضادة للغلوبولين المناعي E ضد الجليكان Galα1-3Galβ1- (3) 4GlcNAc-R (α-Gal) عن طريق لدغات القراد. ترتبط تفاعلات الحساسية التي تتوسطها البروتينات السكرية والجليكوليبيدات التي تحتوي على الجليكان α-Gal ، الموجود في لعاب القراد ، بمتلازمة ألفا غال (AGS) أو حساسية لحوم الثدييات. أصبح الزرد (Danio rerio) نموذجا للفقاريات يستخدم على نطاق واسع لدراسة الأمراض المختلفة. في هذه الدراسة ، تم استخدام الزرد كنموذج لدراسة ردود الفعل التحسسية استجابة لاستهلاك لحوم α غال والثدييات لأنهم ، مثل البشر ، لا يصنعون هذا الجليكان. لهذا الغرض ، تم تقييم الأنماط السلوكية وردود الفعل التحسسية النزفية من نوع الحساسية استجابة لعاب القراد Ixodes ricinus واستهلاك لحوم الثدييات. يسمح هذا النهج التجريبي بالحصول على بيانات صحيحة تدعم النموذج الحيواني لسمك الزرد لدراسة الحساسية المنقولة بالقراد بما في ذلك AGS.
المقدمة
القراد هي ناقلات مسببات الأمراض التي تسبب الأمراض وهي أيضا سبب الحساسية ، مما يؤثر على صحة البشر والحيوانات في جميع أنحاء العالم 1,2. أثناء تغذية القراد ، تسهل الجزيئات الحيوية في لعاب القراد ، وخاصة البروتينات والدهون ، تغذية هذه الطفيليات الخارجية ، وتجنب دفاعات المضيف3. تؤدي بعض جزيئات اللعاب الحيوية مع تعديلات الجليكان Galα1-3Galβ1- (3) 4GlcNAc-R (α-Gal) إلى إنتاج مستويات عالية من الأجسام المضادة المضادة ل α-Gal IgE بعد لدغة القراد ، فقط في بعض الأفراد ، وهو ما يعرف باسم متلازمة α غال (AGS) 4. هذا مرض مرتبط بالحساسية بوساطة IgE والتي قد تؤدي إلى الحساسية المف....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع الطرق الموضحة هنا من قبل لجنة الأخلاقيات المعنية بالتجارب على الحيوانات بجامعة كاستيلا لا مانشا في إطار دراسة "تقييم الاستجابة المناعية للقاح M. bovis المعطل والتحدي مع M. marinum في رقم طراز الزرد PR-2017-05-12."
تم الحصول على القراد من مستعمرة المختبر ، حيث تم اختبار عينات تمثيلية من القراد في المستعمرة بواسطة PCR لمسببات الأمراض الشائعة للقرادلتأكيد عدم وجود مسببات الأمراض ، والحفاظ عليها في معهد علم الطفيليات ، مركز البيولوجيا التابع للأكاديمية التشيكية للعلوم (IP BC CAS) ، جمهورية التشيك ، تم إجراء جميع التجارب على الحيوانات وفقا لقانون حماية الحيوان في جمهورية التشيك رقم 246/1992 Sb (موافقة الأخ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يعتمد البروتوكول المقدم هنا على عدة جوانب من التجارب المنشورة سابقا27,30 والنتائج التي أجريت في مختبرنا حيث تم إنشاء نموذج الزرد والتحقق من صحته لدراسة AGS والاستجابة المناعية ل α-Gal لأن كلا من البشر وسمك الزرد لا يصنعون هذا الجزيء13. يسمح هذا النموذج بتوصيف وتقييم مجموعة متنوعة من ردود الفعل التحسسية نتيجة استجابة المضيف لعاب القراد (الشكل 4) وآثارها في AGS. بالإضافة إلى ذلك ، لوحظت تغيرات في السلوك مثل السب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الزرد هو نموذج فعال من حيث التكلفة وسهل التعامل معه وكان أيضا أداة مجدية للغاية لدراسة الآليات الجزيئية للاستجابة المناعية ، والأمراض المسببة للأمراض ، واختبار الأدوية الجديدة ، والتطعيم والحماية من العدوى33،34،35. الدراسة حول سلوك الزرد مفيدة لأن الدراسات السابقة وجدت أن بعض أنواع الأسماك تظل بلا حراك في قاع الحوض عندما تتعرض للإجهاد ، مما يؤثر على استهلاكها الغذائي ، وتناول كميات أقل. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يرتبط التعرج عن.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
نود أن نشكر أعضاء مجموعة SaBio على تعاونهم في التصميم التجريبي والمساعدة الفنية مع مرفق تجارب الأسماك وخوان غالسيران سايز (IN-CSIC-UMH ، إسبانيا) لتوفير الزرد. تم دعم هذا العمل من قبل وزارة العلوم والابتكار / الوكالة الحكومية للبحوث MCIN / AEI / 10.13039 / 501100011033 ، إسبانيا والاتحاد الأوروبي (منحة BIOGAL PID2020-116761GB-I00). يتم تمويل Marinela Contreras من قبل وزارة العلوم ، Innovación y Universidades ، إسبانيا ، منحة IJC2020-042710-I.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1.5 مل أنبوب | VWR | 525-0990 | |
| جميع الإعدادية DNA / RNA | Qiagen | 80284 | |
| مرافق | |||
| BCA Protein Assay Kit ؛ | Thermo Fisher Scientific | 23225 | |
| VWR 631-1279 | |||
| طعام - أطباق أكانا | |||
| الكلاسيكية -96 بئر | Thermo Fisher Scientific | 10547781 | |
| Gala1-3Gal-BSA 3 (α-Gal) | Dextra | NGP0203 | |
| iScript النسخ العكسي Supermix Supermix | 1708840 | ||
| محاقن Microliter | هاميلتون | 7638-01 | |
| قارئ | الألواح أي | ||
| محلول ملحي مخزن الفوسفات | Sigma | P4417-50TAB | |
| بيلوكاربين هيدروكلوريد ؛ | سيجما | P6503 | |
| طرف الماصة P10 ؛ | VWR | 613-0364 | |
| طرف الماصة P1000 | VWR | 613-0359 | |
| الغذاء الممتاز الأسماك الاستوائية | DAPC | ||
| حامل الإسفنجية | مصنوعة من رغوة الخردة | ||
| المجهر المجهر المجسم | أي | ||
| Cycler الحراري في الوقت الحقيقي PCR | أي | ||
| ميثان سلفونات التريكايين (MS-222) | سيجما | E10521 |
المراجع
- de la Fuente, J., Estrada-Pena, A., Venzal, J. M., Kocan, K. M., Sonenshine, D. E. Overview: Ticks as vectors of pathogens that cause disease in humans and animals. Frontiers in Bioscience: A Journal and Virtual Library. 13 (18), 6938-6946 (2008).
- de la Fuente, J., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
