כאן, דג זברה (Danio rerio) משמש כמודל לחקר תגובות אלרגיות ותגובות חיסוניות הקשורות לתסמונת אלפא-גל (AGS) על ידי הערכת תגובות אלרגיות לרוק קרציות וצריכת בשר יונקים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל בעלי חיים של דגי זברה לחקר תגובות אלרגיות בתגובה לביומולקולות של רוק קרציות
במאמר זה
סיכום
תקציר
קרציות הן וקטורים של פרוקי רגליים הגורמים למחלות על ידי העברת פתוגנים, ועקיצותיהם יכולות להיות קשורות לתגובות אלרגיות המשפיעות על בריאות האדם ברחבי העולם. אצל אנשים מסוימים, רמות גבוהות של נוגדנים אימונוגלובולינים E נגד גליקן Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) נגרמו על ידי עקיצות קרציות. תגובות אנפילקטיות המתווכות על ידי גליקופרוטאינים וגליקוליפידים המכילים את הגליקן α-גל, הנמצאים ברוק הקרציות, קשורות לתסמונת אלפא-גל (AGS) או אלרגיה לבשר יונקים. דג זברה (Danio rerio) הפך למודל חולייתי נפוץ לחקר פתולוגיות שונות. במחקר זה, דגי זברה שימשו כמודל לחקר תגובות אלרגיות בתגובה לצריכת בשר α-גל ויונקים, מכיוון שבדומה לבני אדם, הם אינם מסנתזים גליקן זה. לשם כך הוערכו דפוסי התנהגות ותגובות אלרגיות אנפילקטיות דימומיות בתגובה לרוק קרציות Ixodes ricinus ולצריכת בשר יונקים. גישה ניסיונית זו מאפשרת קבלת נתונים תקפים התומכים במודל בעלי החיים של דגי הזברה לחקר אלרגיות המועברות על ידי קרציות, כולל AGS.
מבוא
קרציות הן וקטורים של פתוגנים הגורמים למחלות והם גם הגורם לתגובות אלרגיות, המשפיעות על בריאותם של בני אדם ובעלי חיים ברחבי העולם 1,2. במהלך הזנת קרציות, ביומולקולות ברוק הקרציות, במיוחד חלבונים ושומנים, להקל על האכלה של ectoparasites אלה, הימנעות הגנות המארח3. חלק מהביומולקולות של הרוק עם גליקן Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) מובילות לייצור רמות נוגדנים גבוהות נגד α-Gal IgE לאחר עקיצת הקרציה, רק אצל אנשים מסוימים, מה שידוע בשם תסמונת α-גל (AGS)4. זוהי מחלה הקשורה לאלרגיה בתיווך IgE שעלולה לגרום לאנפילקסיס לעקיצות קרציות, צריכת בשר יונקים שאינם פרימטים, וכמה תרופ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת קסטילה לה מנצ'ה במסגרת המחקר "הערכת התגובה החיסונית לחיסון מומת של M. bovis ואתגר עם M. marinum במספר דגם דג הזברה PR-2017-05-12."
קרציות התקבלו ממושבת המעבדה, שם דגימות מייצגות של קרציות במושבה נבדקו על ידי PCR לפתוגנים נפוצים של קרציותכדי לאשר את היעדר הפתוגנים, ונשמרו במכון לפרזיטולוגיה, המרכז הביולוגי של האקדמיה הצ'כית למדעים (IP BC CAS), צ'כיה.כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם לחוק הגנת בעלי חיים של הרפובליקה הצ'כית מס '246/1992 Sb (אישור אתיקה מס '34/2018).
1. טיפול בדגי זברה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הפרוטוקול המוצג כאן מבוסס על מספר היבטים של ניסויים שפורסמו בעבר27,30 ותוצאות שבוצעו במעבדה שלנו, שם מודל דג הזברה מבוסס ומאומת לחקר AGS והתגובה החיסונית ל- α-Gal מכיוון שגם בני אדם וגם דגי זברה אינם מסנתזים מולקולה זו13. מודל זה מאפשר אפיון והערכה של מגוון תגובות אלרגיות כתוצאה מתגובת המאכסן לרוק הקרציות (איור 4) והשלכותיהן על AGS. בנוסף, שינויים בהתנהגות כגון שחייה איטית (סרט 6), שכיבה על תחתית המיכל (סרט
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
דג זברה הוא מודל חסכוני וקל לטיפול שהיה גם כלי אפשרי מאוד לחקר מנגנונים מולקולריים של התגובה החיסונית, מחלות פתוגנים, בדיקות תרופות חדשניות, חיסון והגנה מפני זיהומים33,34,35. המחקר על התנהגות דגי הזברה שימושי מכיוון שמחקרים קודמים מצאו כי חלק ממיני הדגים נשארים ללא תנועה בתחתית המיכל כאשר הם בסטרס, מה שמשפיע על צריכת המזון שלהם, אוכלים פחות; בנוסף, זיגזג כאשר הם זזים יכול להיות קשור גם עם מתח דגיםוחרדה 36,37
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
ברצוננו להודות לחברי קבוצת SaBio על שיתוף הפעולה בתכנון הניסוי והסיוע הטכני עם מתקן ניסויי הדגים ולחואן גלסרן סאז (IN-CSIC-UMH, ספרד) על אספקת דגי הזברה. עבודה זו נתמכה על ידי Ministerio de Ciencia e Innovación/Agencia Estatal de Investigación MCIN/AEI/10.13039/501100011033, ספרד והאיחוד האירופי-פדרציה (Grant BIOGAL PID2020-116761GB-I00). Marinela Contreras ממומן על ידי Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades, ספרד, מענק IJC2020-042710-I.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שפופרת 1.5 מ"ל | VWR | 525-0990 | |
| All Prep DNA/RNA | Qiagen | 80284 | |
| מתקני | |||
| ערכת בדיקת חלבון BCA | Thermo Fisher Scientific | 23225 | |
| VWR | 631-1279 | ||
| מזון לכלבים - צלחות אקאנה | |||
| באר | Thermo Fisher Scientific | 10547781 | |
| Gala1-3Gal-BSA 3 (α-Gal) | Dextra | NGP0203 | |
| iScript Reverse Transcription Supermix | Supermix | 1708840 | |
| מזרקי מיקרוליטר | המילטון | 7638-01 | |
| קורא צלחות | כל | ||
| פוספט חוצץ | מלח סיגמא | P4417-50TAB | |
| פילוקרפין הידרוכלוריד | סיגמא | P6503 | |
| קצה פיפטה P10 | VWR | 613-0364 | |
| קצה פיפטה P1000 | VWR | 613-0359 | |
| מזון פרימיום דגים טרופיים | DAPC | ||
| ספוג מחזיק בעלי חיים | עשוי מקצף גרוטאות | ||
| סטריאומיקרוסקופ | כל | ||
| Thermal Cycler, PCR בזמן אמת | , כל | ||
| Tricaine methanesulphonate (MS-222) | Sigma | E10521 |
מקורות
- de la Fuente, J., Estrada-Pena, A., Venzal, J. M., Kocan, K. M., Sonenshine, D. E. Overview: Ticks as vectors of pathogens that cause disease in humans and animals. Frontiers in Bioscience: A Journal and Virtual Library. 13 (18), 6938-6946 (2008).
- de la Fuente, J., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
