बायोमार्कर प्रोगैस्ट्रिन-रिलीज़िंग पेप्टाइड (प्रोजीआरपी) के साथ उदाहरण दिए गए सूखे सीरम नमूनों से कम-बहुतायत बायोमार्कर के निर्धारण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है। एंटीबॉडी-लेपित चुंबकीय मोतियों का उपयोग प्रोटिओटिपिक प्रोजीआरपी पेप्टाइड के चयनात्मक सफाई और संवर्धन के लिए किया जाता है। कैप्चर किए गए पेप्टाइड का विश्लेषण बाद में तरल क्रोमैटोग्राफी-टेंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा किया जाता है।
यह पेपर सूखे नमूनों से कम-बहुतायत प्रोटीन के कुशल नमूना सफाई के लिए विस्तृत विवरण के साथ एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। यह प्रोटियोटाइपिक पेप्टाइड आत्मीयता-कैप्चर और तरल क्रोमैटोग्राफी टेंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस / एमएस) निर्धारण से पहले बीड-आधारित प्रोटियोलिसिस का उपयोग करके किया जाता है। प्रक्रिया को पेपर कार्ड (जैसे, सूखे रक्त के धब्बे [डीबीएस] और सूखे सीरम स्पॉट [डीएसएस]) का उपयोग करके पारंपरिक सूखे नमूनों दोनों पर लागू किया जा सकता है, साथ ही वॉल्यूमेट्रिक अवशोषक माइक्रोसैंपलिंग (वीएएमएस) जैसे नए नमूना विधियों के साथ एकत्र किए गए नमूने। इस प्रक्रिया का वर्णन करने के अलावा, ट्रिप्सिन मोती और एंटीबॉडी-लेपित मोतियों दोनों की तैयारी इस काम में चरण-दर-चरण तरीके से प्रस्तुत की जाती है। प्रस्तुत प्रक्रिया के फायदे मोतियों का उपयोग करके समय-कुशल प्रोटियोलिसिस और पेप्टाइड आत्मीयता-कैप्चर का उपयोग करके चयनात्मक मजबूत सफाई हैं। वर्तमान प्रक्रिया सूखे सीरम (डीएसएस और वीएएमएस दोनों) में कम-बहुतायत वाले छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर (एससीएलसी) बायोमार्कर, प्रोगैस्ट्रिन-रिलीज़िंग पेप्टाइड (प्रोजीआरपी) के निर्धारण का वर्णन करती है। मोती तैयार करने के लिए विस्तृत प्रक्रियाएं नए अनुप्रयोगों या अन्य प्रयोगशालाओं में वर्कफ़्लो को लागू करना आसान बनाती हैं। यह प्रदर्शित किया गया है कि परिणाम नमूना सामग्री पर निर्भर हो सकते हैं; वर्तमान परियोजना के लिए, डीएसएस की तुलना में वीएएमएस का उपयोग करके एकत्र किए गए नमूनों के लिए उच्च सिग्नल तीव्रता देखी गई थी।
माइक्रोसैंपलिंग 100 से अधिक वर्षों से है क्योंकि इवर बैंग ने 1913 में डीबीएस से ग्लूकोज निगरानी का वर्णन कियाथा। गुथरी और सूसी ने नवजात शिशुओं में फेनिलएलनिन के निर्धारण के लिए 1963 में डीबीएस पेश करने के बाद, तकनीक तेजी से व्यापक हो गई है। प्रोटीन के नमूने और भंडारण के लिए डीबीएस की पहली रिपोर्ट 1970 के दशक की शुरुआत में बनाई गई थी, और एक दशक बाद, 1980 के दशक में, हमें डीबीएस5 से प्रोटीन के निर्धारण के लिए मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस) की पहली रिपोर्ट मिली। इस शुरुआती परिचय के बावजूद, यह सदी के मोड़ के बाद तक नहीं था कि डीबीएस और अन्य माइक्रोसैंपलिंग तकनीकों से प्रोटीन का एमएस निर्धारण अधिक व्यापक हो गया।
नैदानिक संदर्भ में, रोगों के निदान और अनुवर्ती के साथ-साथ उपचार निगरानी और डोपिंग उद्देश्यों के लिए प्रोटीन निर्धारित करना रुचि का विषय है। सूखे नमूनों की छोटी मात्रा से एमएस द्वारा प्रोटीन विश्लेषणों का यह लक्षित निर्धारण अभी भी चुनौतीपूर्ण है, और अक्सर विश्लेषण से पहले व्यापक नमूना तैयारी की आवश्यकता होती है।
एमएस द्वारा प्रोटीन का लक्षित मात्रात्मक निर्धारण आमतौर पर नीचे-ऊपर दृष्टिकोण को लागू करके किया जाता है, विश्लेषण से पहले प्रोटीन को पेप्टाइड्स में पचाता है। यह प्रक्रिया पेप्टाइड्स के असंख्य का उत्पादन करती है, जो पचे हुए जैविक नमूने के प्रत्यक्ष विश्लेषण को चुनौतीपूर्ण बनाती है। इसे दरकिनार करने का एक तरीका पाचन 6,7,8 से पहले या बाद में एमएस विश्लेषण के सामने एक चयनात्मक आत्मीयता सफाई चरण लागू करना है। इस तरह, रुचि का प्रोटीन (या इसके प्रोटिओटिपिक पेप्टाइड, यदि पाचन के बाद आत्मीयता कैप्चर चरण किया जाता है) को विश्लेषण से पहले नमूना मैट्रिक्स से चुनिंदा रूप से अलग किया जाता है,जो कम पहचान सीमा प्रदान करता है।
डीबीएस कार्ड का उपयोग करके माइक्रोसैंपलिंग में पारंपरिक रक्त के नमूनों की तुलना में कुछ फायदे हैं, जिनमें कम नमूना मात्रा, कम आक्रामक नमूनाकरण और भंडारण स्थिरता में वृद्धि शामिल है। हालांकि, नमूना मैट्रिक्स अलग है और विश्लेषण में अन्य चुनौतियों को पेश कर सकता है (उदाहरण के लिए, सूखे बनाम तरल नमूना मैट्रिक्स और केशिका रक्त बनाम सीरम या प्लाज्मा)10,11। डीबीएस के साथ देखी जाने वाली एक और चुनौती तथाकथित हेमटोक्रिट प्रभाव है, जहां रक्त हेमटोक्रिट विश्लेषण के लिए संसाधित नमूना मात्रा को प्रभावित करता है, और इसलिए विश्लेषण12 में अंतर-व्यक्तिगत परिवर्तनशीलता का परिचय देता है। नई माइक्रोसैंपलिंग इकाइयाँ, जैसे कि 201413 में पेश किए गए वीएएमएस, रक्त की बूंद के बजाय रक्त की एक निश्चित मात्रा एकत्र करके इस मुद्दे को संबोधित करते हैं।
यह प्रोटोकॉल सूखे माइक्रोसैंपल से कम-बहुतायत बायोमाकर्स के विश्लेषण के लिए एक सेटअप का वर्णन करता है। क्षालन के बाद, सूखे नमूने को पचाया जाता है और बाद में, प्रोटिओटिक पेप्टाइड को पेप्टाइड आत्मीयता कैप्चर द्वारा अलग किया जाता है। मॉडल विश्लेषण एससीएलसी बायोमार्कर प्रोजीआरपी है। चूंकि प्रोजीआरपी को पूरे रक्त से मज़बूती से निर्धारित नहीं किया जा सकता है, सीरम का उपयोग नमूना मैट्रिक्स के रूप में किया गया था। वीएएमएस का उपयोग करके एकत्र किए गए डीएसएस और सीरम नमूने दोनों के प्रतिनिधि परिणाम दिखाए गए हैं।
वर्णित प्रोटोकॉल में सूखे माइक्रोसैंपल (डीएसएस और वीएएमएस) से कम-बहुतायत बायोमाकर्स के विश्लेषण में कई महत्वपूर्ण चरणों का संचालन करने के बारे में जानकारी शामिल है, जिसमें ट्रिप्सिन मोती और एंटीबॉडी-लेपित चुंबकीय मोती की तैयारी शामिल है। पिछले अनुभव के आधार पर, हम हमेशा एंटीबॉडी15 के अभिविन्यास में सुधार के लिए मोती स्थिरीकरण से पहले एसिड के साथ एंटीबॉडी का इलाज करते हैं।
इस प्रक्रिया में महत्वपूर्ण चरणों में से एक सबसे उपयुक्त माइक्रोसैंपलिंग प्रारूप का चयन है। सबसे पहले, किसी को यह विचार करना चाहिए कि क्या विचाराधीन विश्लेषण पूरे रक्त से निर्धारित किया जा सकता है, या यदि एकाग्रता रक्त कोशिकाओं से प्रभावित होती है और सीरम या प्लाज्मा में निर्धारित की जानी चाहिए (मॉडल विश्लेषण, प्रोजीआरपी के लिए)।
कागज- और बहुलक-आधारित दोनों दृष्टिकोणों के फायदे और सीमाएं हैं; प्रोजीआरपी के लिए, वीएएमएस नमूनाकर्ता से निष्कर्षण के बाद विश्लेषण वसूली के संबंध में एक स्पष्ट लाभ प्रदान करता है। हालांकि, यह संभवतः डीएसएस नमूनों के लिए एक अलग निष्कर्षण समाधान का उपयोग करके अनुकूलित किया जा सकता है। फिर भी, विश्लेषण और नमूना सामग्री के बीच इस संभावित बातचीत को ध्यान में रखना महत्वपूर्ण है क्योंकि इसके परिणामस्वरूप विश्लेषणात्मक भिन्नता और उच्च पहचान सीमा बढ़ सकती है। चूंकि उपयोग किया जाने वाला आईएस एक एसआईएल पेप्टाइड है और पाचन के बाद पहली बार जोड़ा जाता है, आईएस पाचन के बाद के चरणों के लिए सही करता है (उदाहरण के लिए, आत्मीयता निष्कर्षण और एलसी-एमएस / एमएस विश्लेषण)। वीएएमएस से निष्कर्षण और पाचन चरण के लिए आईएस सुधार संभव नहीं है।
प्रक्रिया में दो प्रकार के मोतियों का उपयोग किया जाता है: सैंपलर से सीरम नमूने के निष्कर्षण के बाद पाचन के लिए ट्रिप्सिन मोती, और पाचन के बाद प्रोटिओटिक पेप्टाइड को पकड़ने के लिए एंटीबॉडी-लेपित चुंबकीय मोती। पाचन को तेज करने के अलावा ट्रिप्सिन मोतियों का उपयोग करने का एक प्रमुख कारण, आत्मीयता कैप्चर के दौरान नमूने में अवशिष्ट ट्रिप्सिन गतिविधि को कम करना है। आत्मीयता कैप्चर के दौरान एमएबी के ट्राइप्टिक प्रोटियोलिसिस से बचने के लिए यह महत्वपूर्ण है।
ट्रिप्सिन मोतियों की तैयारी के लिए अगारोस मोतियों का उपयोग किया गया था, जबकि एंटीबॉडी-लेपित मोतियों की तैयारी के लिए चुंबकीय मोतियों का उपयोग किया गया था। Agarose मोती चुंबकीय मोतियों की तुलना में कम महंगे होते हैं, लेकिन एक सीमा होती है कि घोल से मोतियों को अलग करने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन की आवश्यकता होती है। यह चुंबकीय मोतियों का उपयोग करते समय मोतियों और सतह पर तैरने वाले का पृथक्करण कम कुशल बनाता है। इसके अलावा, अगारोस मोतियों का उपयोग करके वर्कफ़्लो का स्वचालन मुश्किल है। हालांकि, चुंबकीय एनएचएस-सक्रिय मोती उपलब्ध हैं और इसका उपयोग अधिक सुव्यवस्थित और स्वचालित नमूना तैयारी वर्कफ़्लो के लिए किया जा सकता है।
दवाओं और बायोमाकर्स दोनों के जैव विश्लेषण में माइक्रोसैंपलिंग एक महत्वपूर्ण प्रवृत्ति है। वर्तमान दृष्टिकोण के साथ एक चुनौती नमूना मात्रा (10 μL) की सीमित मात्रा है, जो ProGRP (pg / mL-कम ng / mL स्तर) जैसे बहुत कम-बहुतायत विश्लेषणों के निर्धारण में विशेष महत्व का हो सकता है। हालांकि, अत्याधुनिक विश्लेषणात्मक उपकरणों का उपयोग करके इस चुनौती को दरकिनार किया जा सकता है। इन कम-बहुतायत विश्लेषणों के लिए, नमूना तैयार करने का विकल्प महत्वपूर्ण है, और एंटीबॉडी-आधारित आत्मीयता कैप्चर के माध्यम से चयनात्मक नमूना सफाई की सबसे अधिक आवश्यकता होती है। चूंकि पेप्टाइड कैप्चर को प्रोटीन कैप्चर (एक ही एंटीबॉडी का उपयोग करके) 14 की तुलना में क्लीनर अर्क और कम पहचान सीमा प्रदान करने के लिए दिखाया गया है, वर्तमान विधि माइक्रोसैंपलिंग के साथ संयोजन में इस दृष्टिकोण पर केंद्रित है। पेप्टाइड कैप्चर दृष्टिकोण का एक और लाभ यह है कि आईएस एसआईएल पेप्टाइड आत्मीयता कैप्चर चरण के लिए भी सही है।
इस काम में, पेप्टाइड कैप्चर के लिए एक प्रोटीन को लक्षित करने वाले एंटीबॉडी का उपयोग किया गया था। यह एक फायदा है क्योंकि प्रोटीन को लक्षित करने वाले ऑफ-द-शेल्फ एंटीबॉडी की उपलब्धता प्रोटिओटिक पेप्टाइड्स को लक्षित करने वाले ऑफ-द-शेल्फ एंटीबॉडी की तुलना में अधिक है। हालांकि, एक एंटी-प्रोटीन एंटीबॉडी के लिए एक प्रोटिओटिपिक पेप्टाइड को कुशलतापूर्वक पकड़ने के लिए, प्रोटीन पाचन के बाद एपिटोप को बरकरार रखने की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, कई एंटीबॉडी के लिए, सटीक एपिटोप ज्ञात नहीं है, जिससे एंटी-प्रोटीन एंटीबॉडी की खोज थकाऊ हो जाती है। यह पेप्टाइड कैप्चर के लिए लागू उपलब्ध एंटी-प्रोटीन एंटीबॉडी की संख्या को सीमित करता है। वर्णित प्रक्रिया को सीरम को मैट्रिक्स के रूप में और प्रोजीआरपी को लक्ष्य विश्लेषण के रूप में प्रदर्शित किया जाता है। प्रक्रिया का उद्देश्य अन्य मैट्रिक्स और अन्य लक्ष्य विश्लेषणों पर लागू होना है। प्रोटिओटिपिक पेप्टाइड के आत्मीयता कैप्चर के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एंटी-प्रोटीन एंटीबॉडी का उपयोग करने के बजाय, कस्टम-निर्मित, एंटी-पेप्टाइड एंटीबॉडी का उपयोग करना भी संभव है। प्रोटीन कैप्चर की तुलना में पेप्टाइड कैप्चर की सफाई दक्षता चित्रा 5 में चित्रित की गई है। चुंबकीय मोतियों के साथ ट्रिप्सिन मोतियों की तैयारी के लिए उपयोग किए जाने वाले अगारोस मोतियों का आदान-प्रदान करके, प्रक्रिया बाजार पर रोबोट नमूना तैयारी कार्य स्टेशनों के साथ भी संगत होनी चाहिए।
The authors have nothing to disclose.
हम प्रोजीआरपी मानक और एंटी-प्रोजीआरपी मोनोक्लोनल एंटीबॉडी, एम 18 प्रदान करने के लिए नॉर्वेजियन रेडियम अस्पताल (ओस्लो यूनिवर्सिटी अस्पताल, ओस्लो, नॉर्वे) में प्रोफेसर एलिजाबेथ पाउस को बहुत स्वीकार करते हैं। प्रकाशन शुल्क को एपोटेकर हैराल्ड कॉनराड थाउलोज लेगेट से अनुदान द्वारा कवर किया गया था। ट्रिन ग्रोनहौग हलवोरसेन और लेओन रूबसेट नेशनल नेटवर्क ऑफ एडवांस्ड प्रोटिओमिक्स इंफ्रास्ट्रक्चर (एनएपीआई) कंसोर्टियम में भागीदार हैं, जिसे नॉर्वे इन्फ्रास्ट्रक्टर-प्रोग्राम की रिसर्च काउंसिल (परियोजना संख्या: 295910) द्वारा वित्त पोषित किया जाता है।
Acetic acid N-hydroxysuccinimide ester | Carbosynt (Staad, Switzerland) | FA33719 | Store in freezer below -20 °C |
ALGNQQPSWDSEDSSNF[K_13C6 _15N2] (≥ 95%) |
Innovagen (Lund, Sweden) | Not applicable | Store in freezer below -20 °C |
Ammonium bicarbonate BioUltra (≥ 99.5% ) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 09830-500G | |
Aquasil C18 column, 3 µm, 50 mm x 1 mm | Thermo scientific (Waltham, MA, USA) | 77503-051030 | Analytical column compatible with 100% aqueous mobile phase |
Benzamidine (≥ 95.0% ) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 12072 | Store in fridge at 2-6 °C |
Calsium chloride dihydrate (≥ 99% ) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 223506-500G | |
Centrifuge 5804 | Eppendorf (Hamburg, Tyskland) | 5804000010 | |
Cloned ProGRP isoform 1 | Radium hospital, Oslo University Hospital (Oslo, Norway) | Not applicable | Store in freezer below -20 °C |
Disodium hydrogenphosphate dihydrate (pro analysis) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 30435-500G | |
Disodium hydrogenphosphate dodecahydrate (pro analysis) | Merck (Darmstadt, Tyskland) | 1.06579.0500 | |
Dynabeads M-280 tosylactivated 10 mL | Invitrogen (Carlsbad, USA) | 14204 | Store in fridge at 2-6 °C |
DynaMag-2 | Invitrogen (Carlsbad, USA) | 123-21D | |
Ethanolamine (pro analysis, ≥ 99%) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | #02400 | |
Formic acid (≥ 99% ) for LC-MS | VWR International (Radnor, PA, USA) | 84865.260 | |
FTA DMPK-C cellulose card | Whatman (Kent, UK) | WB129243 | DBS card |
HPLC vials, clear glass, 1.5 mL, 32 x 11.6 mm, Clean Pack | Nerliens Meszansky (Oslo, Norge) | LPP 11 09 0519 | |
Hulamixer sample mixer | Invitrogen (Carlsbad, USA) | 101561503016 | Sample mixer with end-over-end mixing and reciprocal rotation and vibration |
Human serum from healty blood donors | Bloodbank, Ullevål, Oslo University Hospital (Oslo, Norway) | Not applicable | Store in freezer below -20 °C |
Hydrochloric acid fuming 37% (Emsure for analysis) | Merck (Darmstadt, Tyskland) | 1.00317.1000 | |
LC-MS/MS system: Ultimate 3000 system (Autosampler, WPS-3000TRS; Micropump, LPG-3400M; Flow manager, FLM-3300, MIC, 1X2P-10P) and TSQ Quantum access. Controlled by Xcalibur 2.2 SP1.48 | Thermo scientific (Waltham, MA, USA) | Not applicable | |
LiChrosolv Acetonitrile hypergrade for LC-MS | Merck (Darmstadt, Tyskland) | 1.00029.2500 | |
LL Biotrode, Combined glass electrode | Metrohm (Herisau, Sveits) | 6.0224.100 | |
Magnetic stirrer, Type M10 | Franz Morat KG (Eisenbach, Germany) | 10236 | |
Micro inserts, glass (31 x 6 mm, 0.1 mL) | VWR International (Radnor, PA, USA) | 548-0006 | |
MilliQ integral 3 with Q-POD | Merck Millipore (Molsheim, France) | ZRXQ003T0 | For production of Type 1 water |
monoclonal antibody M18 | Radium hospital, Oslo University Hospital (Oslo, Norway) | Not applicable | Store in fridge at 2-6 °C |
Neoteryx Mitra microsampler (10 μL) 4 sampler Clamshell | Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | NC1382947 | |
NHS-activated sepharose beads 4 fast flow | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | GE17-0906-01 | Agarose beads, store in fridge at 2-6 °C |
Optifit, Refill pipet tips, 10 mL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 613-2911 | |
Optifit, Refill pipet tips, 10 μL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 790012 | |
Optifit, Refill pipet tips, 1,000 μL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 791002 | |
Optifit, Refill pipet tips, 200 μL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 790202 | |
pH glass electrode | Metrohm (Herisau, Sveits) | 6.0233.100 | |
pH meter 744 | Metrohm (Herisau, Sveits) | 8.744.1003 | |
Pipet 10 mL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 725090 | |
Pipet m10 µL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 725020 | |
Pipet m100 µL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 725050 | |
Pipet m1,000 µL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 725070 | |
Pipet m20 µL | Sartorius Biohit (Helsinki, Finland) | 725030 | |
Potassium chloride (KCl ≥ 99.9%) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | P-3911 | |
Potassium dihydrogenphosphate (pro analysis) | Merck (Darmstadt, Tyskland) | 1.04873.0250 | |
Protein LoBind Eppendorf tube 0.5 mL | Eppendorf (Hamburg, Tyskland) | 525-0133 (0030 108.094) | |
Protein LoBind Eppendorf tube 1.5 mL | Eppendorf (Hamburg, Tyskland) | 525-0132 (0030 108.116) | |
Protein LoBind Eppendorf tube 2.0 mL | Eppendorf (Hamburg, Tyskland) | 525-0134 (0030 108.450) | |
Protein LoBind Eppendorf tube 5.0 mL | Eppendorf (Hamburg, Tyskland) | 525-0792 (0030108.302) | |
Scissors | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | Z186716-1EA | |
Sodium azide (BioUltra; ≥ 99.5% ) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 71289-5G | |
Sodium chloride (for analysis) | Merck (Darmstadt, Tyskland) | 1.06404.1000 | |
Sodium dihydrogenphosphate monohydrate (pro analysis) | Merck (Darmstadt, Tyskland) | 1.06346.0500 | |
Sodium hydroxide (AnalaR NORMAPUR) | VWR International (Radnor, PA, USA) | 28244.295 | |
Sodium tetraborate decahydrate (≥ 99. %) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | S9640-500G | |
Spectrafuge Mini Centrifuge | LABNET International (Edison, NJ, USA) | C1301 | |
Stirring magnet, 25 mm x 6 mm Ø, circular | Leybold (Cologne, Germany) | 666 851 | |
Stuart Scientific SA8 vortex mixer | Stuart (Staffordshire, UK) | Z648531-1EA | |
SuperClear centrifuge tubes (15 mL) | VWR International (Radnor, PA, USA) | 525-0150 | |
SuperClear centrifuge tubes (50 mL) | VWR International (Radnor, PA, USA) | 525-0155 | |
Thermomixer comfort 1.5 mL | Eppendorf (Hamburg, Tyskland) | 53,55,27,831 | Temperature controlled mixer |
Trizma base (reagent grade, ≥ 99.0 %) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | T6066 | Tris(hydroxymethyl)aminometan (tris) |
Trizma HCl (reagent grade, ≥ 99.0%) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | T3253-100G | Tris(hydroxymethyl)aminometan HCl (tris HCl) |
Trypsin (TCPK-treated from bovine pancreas, 10,000-15,000 BAEE units/mg Protein) | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | T8802 | Store in freezer below -20 °C |
Tween 20 | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | P7949-500ML | polysorbate 20 |
Tweezers | Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) | TEM-78511-27 | |
Vial caps, white, 9 mm | Nerliens Meszansky (Oslo, Norge) | LPP 09 15 0981 | |
Mitra microsampler with VAMS (Volumetric adsorptive microsampling) technology, 10 µL, 4-sampler clamshell | Neoteryx (Torrance, CA, USA) |