न्यूरोहूमीएक्स समीपस्थ और प्रतिनिधि सह-संस्कृति स्थितियों के तहत बैक्टीरिया, उपकला और न्यूरोनल कोशिकाओं की बातचीत का अध्ययन करने के लिए एक उन्नत आंत-ऑन-ए-चिप मॉडल है। यह मॉडल आंत माइक्रोबायोम और तंत्रिका तंत्र के बीच संचार को अंतर्निहित आणविक तंत्र को उजागर करने की अनुमति देता है।
मानव शरीर कम से कम उतनी ही माइक्रोबियल कोशिकाओं द्वारा उपनिवेशित होता है क्योंकि यह मानव कोशिकाओं से बना होता है, और इनमें से अधिकांश सूक्ष्मजीव आंत में स्थित होते हैं। हालांकि आंत माइक्रोबायोम और मेजबान के बीच परस्पर क्रिया का बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है, आंत माइक्रोबायोम आंत्र तंत्रिका तंत्र के साथ कैसे बातचीत करता है, यह काफी हद तक अज्ञात है। आज तक, आंत माइक्रोबायोम-तंत्रिका तंत्र इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए एक शारीरिक रूप से प्रतिनिधि इन विट्रो मॉडल मौजूद नहीं है।
इस अंतर को भरने के लिए, हमने डिवाइस में प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल-व्युत्पन्न एंटरिक न्यूरॉन्स को पेश करके मानव-माइक्रोबियल क्रॉसटॉक (HuMiX) आंत-ऑन-चिप मॉडल विकसित किया। परिणामी मॉडल, ‘न्यूरोहूमिक्स’, अर्ध-पारगम्य झिल्ली द्वारा अलग किए गए माइक्रोफ्लुइडिक चैनलों में बैक्टीरिया, उपकला और न्यूरोनल कोशिकाओं की सह-संस्कृति की अनुमति देता है। विभिन्न सेल प्रकारों के पृथक्करण के बावजूद, कोशिकाएं घुलनशील कारकों के माध्यम से एक दूसरे के साथ संवाद कर सकती हैं, साथ ही साथ प्रत्येक सेल प्रकार का अलग से अध्ययन करने का अवसर प्रदान करती हैं। यह सेटअप पहली अंतर्दृष्टि के लिए अनुमति देता है कि आंत माइक्रोबायोम एंटरिक न्यूरोनल कोशिकाओं को कैसे प्रभावित करता है। यह मानव आंत माइक्रोबायोम-तंत्रिका तंत्र अक्ष का अध्ययन और समझने में एक महत्वपूर्ण पहला कदम है।
मानव आंत माइक्रोबायोम मानव स्वास्थ्य और बीमारी में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। पिछले डेढ़ दशक में इसका बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है, और स्वास्थ्य और बीमारी को संशोधित करने में इसकी संभावित भूमिकाअब स्थापित हो गई है। एक असंतुलित माइक्रोबियल समुदाय (डिस्बिओसिस) के लिए अग्रणी माइक्रोबायोम में व्यवधान को कई पुरानी विकारों, जैसे मोटापा, सूजन आंत्र रोग, और कोलोरेक्टल कैंसर, या यहां तक कि पार्किंसंस रोग 2,3 जैसे न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों के रोगजनन में शामिल माना गया है।
यद्यपि मानव आंत माइक्रोबायोम न्यूरोलॉजिकल स्थितियों से जुड़ा हुआ है, यह अभी भी स्पष्ट नहीं है कि आंत माइक्रोबायोम आंत्र तंत्रिका तंत्र के साथ कैसे संवाद करता है और प्रभावित करता है। चूंकि मानव आंत्र तंत्रिका तंत्र तत्काल अध्ययन के लिए आसानी से सुलभ नहीं है,इसलिए अब तक प्रयोगों में पशु मॉडल का उपयोग किया गया है। हालांकि, पशु मॉडल और मनुष्यों5 के बीच स्पष्ट अंतर को देखते हुए, मानव आंत की नकल करने वाले इन विट्रो मॉडल का विकास तत्काल रुचि का है। इस संदर्भ में, मानव प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल (आईपीएससी) के बढ़ते और आगे बढ़ने वाले क्षेत्र ने हमें प्रतिनिधि एंटरिक न्यूरॉन्स (ईएनएस) 6 प्राप्त करने की अनुमति दी है। आईपीएससी-व्युत्पन्न ईएन इन विट्रो कल्चर मॉडल में एंटरिक तंत्रिका तंत्र के अध्ययन की अनुमति देते हैं, जैसे कि सेल कल्चर इंसर्ट, ऑर्गेनोइड्स, या ऑर्गन-ऑन-ए-चिप 7,8।
मानव-माइक्रोबियल क्रॉसटॉक (HuMiX) मॉडल एक आंत-ऑन-ए-चिप मॉडल है जो मानव आंत9 की नकल करता है। प्रारंभिक HuMiX मॉडल (इसके बाद प्रारंभिक उपकरण के रूप में संदर्भित) ने उपकला कोशिकाओं (Caco-2) और जीवाणु कोशिकाओं10,11 को समायोजित किया। हालांकि, आंत माइक्रोबायोम-तंत्रिका तंत्र लिंक का अध्ययन करने के लिए, आईपीएससी-व्युत्पन्न ईएन6 को सिस्टम में भी पेश किया गया है (चित्रा 1)। न्यूरोनल, उपकला और जीवाणु कोशिकाओं की समीपस्थ सह-संस्कृति व्यक्तिगत रूप से विभिन्न सेल प्रकारों के विश्लेषण और मानव आंत की नकल करने वाले वातावरण में विभिन्न सेल प्रकारों के बीच बातचीत का अध्ययन करने की अनुमति देती है।
हाल के वर्षों में, ऑर्गन-ऑन-ए-चिप (जैसे, आंत-ऑन-ए-चिप) मॉडल का उपयोग करके अधिक शारीरिक रूप से प्रतिनिधि तरीकों से अंगों का अध्ययन करने के लिए मॉडल के विकास में प्रगति हुई है। ये मॉडल निरंतर पोषक तत्वों की आपूर्ति और अपशिष्ट हटाने के कारण मानव आंत के वातावरण के अधिक प्रतिनिधि हैं, साथ ही साथ वास्तविक समय की निगरानी, उदाहरण के लिए, ऑक्सीजन का स्तर या बाधा अखंडता 8,12। ये मॉडल विशेष रूप से मेजबान कोशिकाओं पर आंत बैक्टीरिया के प्रभावों के अध्ययन की अनुमति देते हैं। हालांकि, आंत माइक्रोबायोम और तंत्रिका तंत्र के बीच अंतर्संबंधों का अध्ययन करने के लिए अंगों-ऑन-ए-चिप का उपयोग करने में सक्षम होने के लिए, न्यूरोनल कोशिकाओं को ऐसी प्रणालियों में एकीकृत करने की आवश्यकता होती है। इसलिए, HuMiX को और विकसित करने और न्यूरोHuMiX प्रणाली (इसके बाद डिवाइस के रूप में संदर्भित) की स्थापना का उद्देश्य एक आंत-ऑन-ए-चिप मॉडल विकसित करना था, जिसमें आंत उपकला कोशिकाओं और बैक्टीरिया के साथ समीपस्थ सह-संस्कृति में एंटरिक न्यूरोनल कोशिकाएं शामिल हैं।
अब यह स्थापित हो गया है कि मानव आंत माइक्रोबायोम मेजबान के स्वास्थ्य और बीमारी को प्रभावित करता है। हमारे माइक्रोबायोम के महत्व का सुझाव देने वाले ज्ञान के बावजूद, विशेष रूप से न्यूरोलॉजिकल विकारों जैसे अल्जाइमर या पार्किंसंस रोग 3,13 में, यह काफी हद तक अज्ञात है कि आंत माइक्रोबायोम आंत्र तंत्रिका तंत्र के साथ कैसे बातचीत करता है, और बाद में, मस्तिष्क के साथ।
आंत माइक्रोबायोम और तंत्रिका तंत्र के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए एक प्रतिनिधि मॉडल अब तक अनुपलब्ध है। आंत-मस्तिष्क अक्ष के बारे में अध्ययन पारंपरिक रूप से मुराइन मॉडल13 का उपयोग करके किया गया है। चूहे और मनुष्य अपने जीनोमिक अनुक्रमोंका 85% साझा करते हैं, लेकिन मनुष्यों के लिए चूहों की तुलना करते समय विचार करने के लिए महत्वपूर्ण अंतर हैं। आंत के बारे में, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि, मनुष्यों की तुलना में, चूहे विशेष रूप से शाकाहारी हैं। नतीजतन, उनके जठरांत्र संबंधी मार्ग लंबाई और विशेषताओं में भिन्न होते हैं, जैसे कि ‘गैस्ट्रिक खाली’ 14। मुराइन दिमाग भी महत्वपूर्ण अंतर दिखाते हैं, जिससे चूहों और मनुष्यों के बीच समग्र संरचना अलग-अलगहोती है। महत्वपूर्ण रूप से, मनुष्यों में तंत्रिका पूर्वजों के लंबे सेल चक्र समय15 हैं। नतीजतन, प्रतिनिधि मॉडल विकसित करना महत्वपूर्ण है जिसमें आंतों और न्यूरोनल कोशिकाओंसहित मानव-व्युत्पन्न कोशिकाएं शामिल हैं। इस संदर्भ में, इन विट्रो मॉडल के माध्यम से अधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य अनुसंधान का विकास पशु मॉडल का उपयोग करने की आवश्यकता को कम करता है और प्रजनन क्षमता में सुधार करता है।
neuroHuMiX पिछले HuMiX मॉडल9 का एक उन्नत संस्करण है। HuMiX एक आंत-ऑन-ए-चिप मॉडल है जो उपकला और जीवाणु कोशिकाओं के समीपस्थ और प्रतिनिधि सह-संस्कृतियों की अनुमति देता है। सेल-सेल संचार समीपस्थ सह-संस्कृति और अर्धपारगम्य झिल्ली के माध्यम से स्रावित कारकों और मेटाबोलाइट्स के प्रसार के माध्यम से संभव है। हालांकि, मानव आंत पर्यावरण का अध्ययन करने के लिए प्रारंभिक उपकरण की उपयोगिता का विस्तार करने के लिए, एक अतिरिक्त सेल प्रकार की शुरूआत की आवश्यकता होती है। इसे संबोधित करने के लिए, आईपीएससी-व्युत्पन्न ईएन की शुरूआत के साथ विकसित न्यूरोहूमिक्स, बैक्टीरिया, आंतों के उपकला कोशिकाओं और ईएन के समीपस्थ सह-संस्कृति को सक्षम बनाता है। परिणामी इन विट्रो मॉडल हमें मानव तंत्रिका तंत्र के संबंध में मानव आंत माइक्रोबायोम के बारे में सवालों को संबोधित करने की अनुमति देता है। विभिन्न सेल प्रकारों, विशेष रूप से स्तनधारी कोशिकाओं और बैक्टीरिया की सह-संस्कृतियों को सह-संवर्धन में कई चुनौतियां हैं, जिनमें व्यवहार्यता का नुकसान, खराब आसंजन और संगम में समग्र हानिशामिल है। यहां, हमने दिखाया है कि इस डिवाइस के भीतर, हम सेल व्यवहार्यता को उच्च रखते हुए एक ही प्रणाली के भीतर तीन अलग-अलग सेल प्रकारों को सह-संस्कृति करने में सक्षम हैं।
प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण कदम डिवाइस में प्रवेश करने से पहले न्यूरोनल कोशिकाओं -80% -90% सेल कंफ्लुएंसी और व्यवहार्यता के संयोजन को सुनिश्चित करना है। चूंकि रन के दौरान सेल की वृद्धि का आकलन करना संभव नहीं है, इसलिए यह सुनिश्चित करना अत्यंत महत्वपूर्ण है कि मॉडल में पेश करने से पहले कोशिकाएं अच्छी तरह से बढ़ रही हैं। हालांकि यह एक सीमित कारक हो सकता है, डिवाइस के भीतर देखी गई समग्र व्यवहार्यता और सामंजस्य आम तौर पर उच्च होता है।
डिवाइस को ट्यूबिंग लाइनों के माध्यम से एक पेरिस्टालिक पंप से जोड़ा जाता है। प्रत्येक सेल कक्ष की अपनी विशिष्ट टयूबिंग लाइन होती है। टयूबिंग में एक पंप ट्यूबिंग शामिल है जो माध्यम के छिड़काव के लिए एक पेरिस्टालिक पंप के उपयोग की अनुमति देता है, साथ ही पंप ट्यूबिंग को डिवाइस से जोड़ता है और डिवाइस को बहिर्वाह / अपशिष्ट बोतलों से जोड़ने वाला टयूबिंग करता है। बहिर्वाह माध्यम के टीकाकरण और नमूने की अनुमति देने के लिए डिवाइस से पहले और बाद में सैंपलिंग पोर्ट शामिल किए जाते हैं। प्रत्येक कक्ष को एक अलग माध्यम से जोड़ा जा सकता है, जिससे प्रत्येक व्यक्तिगत सेल प्रकार के लिए सर्वोत्तम संस्कृति की स्थिति हो सकती है। प्रत्येक कक्ष को मध्यम आपूर्ति के लिए विशिष्ट आवश्यकताओं के आधार पर खोला या बंद किया जा सकता है। डिवाइस में, न्यूरोनल कक्ष अधिकांश प्रयोग के लिए बंद रहता है, जबकि बैक्टीरिया और उपकला कक्ष हर समय खुले रहते हैं, जिसका अर्थ है कि उन्हें पूरे प्रयोगात्मक रन में ताजा माध्यम मिलता है। यह सुनिश्चित करने के लिए कि माध्यम बिना किसी रुकावट के बह रहा है, ट्यूबिंग, कनेक्टर या डिवाइस में कोई हवा नहीं बची है। इसलिए, पहले प्राइमिंग चरण में उपकरणों को कुछ मिनटों के लिए चलाने देना महत्वपूर्ण है। यह अक्सर समस्या को हल करता है। यदि नहीं, तो गिरने वाली अन्य लाइनों में से एक को बहिर्वाह के तीन-तरफा स्टॉपकॉक को बंद करके थोड़े समय के लिए बंद किया जा सकता है। यह माध्यम को हवा के बुलबुले के साथ लाइन पर पुनर्निर्देशित करता है, इस प्रकार ट्यूबिंग के माध्यम से बुलबुले को बाहर धकेलकर समस्या को हल करता है।
किसी भी सेल कल्चर प्रयोग के लिए, माध्यम एक प्रमुख घटक है, जहां प्रत्येक सेल प्रकार का अपना संबंधित माध्यम होता है। एक सह-संस्कृति सेटअप में, माध्यम को न केवल इसमें बढ़ने वाले सेल प्रकार के लिए, बल्कि सह-संस्कृति के भीतर अन्य सेल प्रकारों के लिए भी संगत होना चाहिए। यह डिवाइस के लिए अलग नहीं है, जो एक अतिरिक्त चुनौती है क्योंकि हमारे पास तीन अलग-अलग सेल प्रकारों के साथ तीन अलग-अलग डिब्बे हैं- बैक्टीरियल, उपकला और न्यूरोनल कोशिकाएं। हालांकि, हमने दिखाया है कि बैक्टीरियल मीडिया को संशोधित करके- 10% एफबीएस के साथ आरपीएमआई 1640 में 5% एमआरएस को जोड़ने के साथ- सभी सेल प्रकार, विशेष रूप से बैक्टीरिया और उपकला कोशिकाओं में, सिस्टम के भीतर सफलतापूर्वक सह-सुसंस्कृत किया जा सकता है। हालांकि, डिवाइस में, विभिन्न सेल प्रकार निकटता में सह-सुसंस्कृत होते हैं, और इसलिए एक दूसरे के सीधे संपर्क में नहीं होते हैं। भले ही यह मानव आंत में कोशिकाओं के बीच सीधे संपर्क का पूरी तरह से प्रतिनिधि नहीं है, और इसलिए एक सीमा है, समीपस्थ और प्रतिनिधि सह-संस्कृति स्थिति डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए एक ताकत है। घुलनशील कारक विभिन्न कक्षों और सेल प्रकारों के बीच आदान-प्रदान करते हैं; इसलिए, कोशिकाएं अभी भी एक दूसरे के साथ बातचीत कर रही हैं। इसके अतिरिक्त, तथ्य यह है कि सेल प्रकारों को अलग से काटा और विश्लेषण किया जा सकता है, हमें विभिन्न सेल प्रकारों (न्यूरोनल कोशिकाओं सहित) पर एक स्वस्थ और / या रोगग्रस्त माइक्रोबायोम के प्रभाव का अध्ययन करने की अनुमति देता है और इस तरह सेल प्रकार-विशिष्ट रीड-आउट निर्धारित / एक और सीमा यह है कि प्रयोगात्मक रन के दौरान कोशिकाओं की आकृति विज्ञान का पालन नहीं किया जा सकता है, क्योंकि डिवाइस को केवल खोला जा सकता है और प्रत्येक प्रयोग के अंत में कोशिकाओं की जांच की जा सकती है।
हमारे ज्ञान के लिए, न्यूरोहूमीएक्स ईएन सहित पहला आंत-ऑन-चिप मॉडल है। यह आंत माइक्रोबायोटा और एंटरिक तंत्रिका तंत्र के बीच संचार को स्पष्ट करने की दिशा में एक कदम है। यह एक मॉडल है जो एक जीवाणु प्रजातियों, एक उपकला परत और ईएन के बीच परस्पर क्रिया की जांच की अनुमति देता है। इसका डिजाइन हमें विभिन्न सेल प्रकारों द्वारा स्रावित घुलनशील कारकों के आदान-प्रदान और एक दूसरे पर उनके प्रभाव का अध्ययन करने की अनुमति देता है। आगे बढ़ते हुए, डिवाइस को व्यक्तिगत मॉडल में बदलने के लिए न केवल आईपीएससी-व्युत्पन्न ईएन, बल्कि डिवाइस के अंदर आईपीएससी-व्युत्पन्न उपकला कोशिकाओं का होना भी महत्वपूर्ण होगा। महत्वपूर्ण रूप से, इस व्यक्तिगत मॉडल का उपयोग पूर्व, समर्थक और सिंबायोटिक्स10,11 का परीक्षण करने और संभावित रूप से व्यक्तिगत स्क्रीनिंग औरचिकित्सीय दृष्टिकोण विकसित करने के लिए किया जा सकता है। व्यक्तिगत न्यूरोहूमीएक्स अंततः मानव आंत माइक्रोबायोम के ‘डार्क मैटर’ और आंत माइक्रोबायोम-तंत्रिका तंत्र अक्ष के साथ तंत्रिका तंत्र के साथ इसकी बातचीत पर प्रकाश डाल सकता है, जिससे चिकित्सीय मूल्यांकन और हस्तक्षेप का मार्ग प्रशस्त होता है।
हम यह निष्कर्ष निकाल सकते हैं कि आंत्र न्यूरोनल सिस्टम सहित आंत-ऑन-ए-चिप रखने में सक्षम होना आंत माइक्रोबायोम-तंत्रिका तंत्र अक्ष के साथ बातचीत के अध्ययन और समझ में प्रगति के लिए महत्वपूर्ण है। न्यूरोहूमीएक्स हमें मेजबान कोशिकाओं पर जीवाणु प्रजातियों के प्रभावों का अध्ययन करने की अनुमति देता है और हमें मॉडल को और भी अधिक शारीरिक रूप से प्रतिनिधि तरीके से बेहतर बनाने के लिए एक अच्छा आधार प्रदान करता है।
The authors have nothing to disclose.
जेरेड स्टर्नकेर्ट हमें K7 लाइन से कोशिकाओं के साथ प्रदान करने के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं। हम इंजीनियरिंग पहलुओं के साथ उनकी सहायता के लिए एरिज़ोना विश्वविद्यालय से लंबे समय से सहयोगी डॉ फ्रेडरिक ज़ेनहौसर और मैथ्यू डब्ल्यू बैरेट को भी धन्यवाद देना चाहते हैं। हम न्यूरोहूमीएक्स के योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व को डिजाइन करने में उनकी मदद के लिए डॉ वैलेंटिना गलाटा को भी स्वीकार करना चाहते हैं। इस परियोजना को यूरोपीय संघ के क्षितिज 2020 अनुसंधान और नवाचार कार्यक्रम (अनुदान समझौता 863664) के तहत यूरोपीय अनुसंधान परिषद (ईआरसी) से धन प्राप्त हुआ है। चित्रा 1 आंशिक रूप से Biorender.com के साथ बनाया गया था।
2-Mercaptoethanol | Sigma Aldrich | 10712 | |
Aeration cannula (length: 1.10 diameter: 30 mm) | VWR (B.Braun) | BRAU4190050 | |
Agar-agar | Merck Millipore | 1.01614.1000 | |
Aluminium Crimp | Glasgerätebau Ochs | 102050 | |
Ascorbic acid | Sigma Aldrich | A4544 | |
B-27 Supplement Minus Vitamin A (50x) | Gibco | 12587-010 | |
Bacterial Cell Membrane, pore size: 1 µm | VWR (Whatman) | 515-2084 | |
Caco-2 cells | DSMZ | ACC169 | |
Cell Counter & Analyzer CASY | OMNI Life Sceince | ||
CHIR | Axon Mechem BV | CT99021 | |
Collagen I, Rat Tail | Invitrogen | A1048301 | |
Costar 6-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Plates | Corning | 3471 | |
Difco Lactobacilli MRS Broth | BD Biosciences | 288130 | |
Discofix 3-way stopcock | B. Braun | BRAU40951111 | |
DMEM/F12, no glutamine | Thermofisher Scientific | 21331020 | |
Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline, D-PBS | Sigma Aldrich | 14190-169 | |
Essential 6 Medium | Thermofisher Scientific | A1516401 | |
Essential 8 Medium | Thermofisher Scientific | A1517001 | |
Female Luer Lock to Barb Connector | Qosina | 11733 | |
FGF2 | R&D Systems | 233-FB | |
Fibronectin | Sigma Aldrich | F1141 | |
Foetal Bovine Serum, FBS | Thermofisher Scientific | 10500-064 | |
GDNF | PeproTech | 450-10 | |
Human Cell Membrane, pore size: 50 nm | Sigma Aldrich (GE Healthcare) | WHA111703 | |
HuMiX Gasket Collagen | Auer Precision | 216891-003 | |
HuMiX Gasket Sandwich Bottom | Auer Precision | 216891-002 | |
HuMiX Gasket Sandwich Top | Auer Precision | 216891-001 | |
iPSC | Max Planck Institute for Molecular Biomedicine | K7 line | |
L-Glutamine (200 mM) | Gibco | 25030081 | |
Laminin from Engelbreth-Holmswarm | Sigma Aldrich | L2020 | |
LDN193189 | Sigma Aldrich | SML0559 | |
Limosilactobacillus reuteri | ATCC | 23272 | |
Live/Dead BacLight Bacterial Viability kit | Thermofisher Scientific | L7012 | |
Male Luer with Spin Lock to Barb | Qosina | 11735 | |
Marprene tubing (0.8 mm x 1.6 mm) | Watson-Marlow | 902.0008.J16 | |
Matrigel hESC-qualified matrix | Corning | 354277 | |
Mucin, from porcine stomach | Sigma Aldrich | T3924 | |
N2 Supplement (100x) | Gibco | 17502048 | |
NEAA | Thermofisher Scientific | 11140050 | |
Needle (length: 120 mm; diameter: 0.80 mm) | B.Braun (color code: green) | 466 5643 | |
Needle (length: 40 mm; diameter: 0.70 mm) | Henke Sass Wolf (color code: black) | 4710007040 | |
Needle (length: 80 mm; diameter: 0.60 mm) | B.Braun (color code: blue) | 466 5635 | |
Neurobasal Medium | Gibco | 21103049 | |
PE/Cy7 anti-human CD49d antibody | Biolegend | 304314 | |
Penicillin-Streptomycin | Sigma Aldrich | P0781 | |
Peristaltic pump | Watson-Marlow | 205CA | |
Poly-L-ornithine Hydrobromide | Sigma Aldrich | P3655 | |
Polycarbonate lids (HuMiX) | University of Arizona | HuMiX 1.0 / 2.0 | |
Retinoic Acid | Sigma Aldrich | R2625 | |
RLT Buffer (RNeasy Minikit) | Qiagen | 74104 | |
RPMI 1640 Medium | Thermofisher Scientific | 72400-021 | |
SB431542, ALK inhibitor | Abcam | ab120163 | |
Serum bottles | Glasgerätebau Ochs | 102091 | |
Syringe | BD Biosciences | 309110 | |
Trypsin-EDTA solution | Sigma Aldrich | T3924 | |
Y-27632 Dihydrochloride | R&D Systems | 1254 |