एक मुराइन मॉडल में बेहतर ग्रीवा गैंग्लियनेक्टोमी के लिए सर्जिकल तकनीक
Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल बेहतर ग्रीवा नाड़ीग्रन्थि की पहचान और बचाव करके एड्रीनर्जिक संक्रमण के पृथक्करण के एक माउस मॉडल का वर्णन करता है।
Abstract
बढ़ते सबूत बताते हैं कि सहानुभूति तंत्रिका तंत्र कैंसर की प्रगति में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। एड्रीनर्जिक संक्रमण लार ग्रंथि स्राव, सर्कैडियन लय, मैकुलर अपघटन, प्रतिरक्षा समारोह और कार्डियक फिजियोलॉजी को नियंत्रित करता है। म्यूरिन सर्जिकल सिम्पैथेक्टोमी बार-बार फार्माकोलॉजिकल हस्तक्षेप और संबंधित दुष्प्रभावों की आवश्यकता से बचते हुए पूर्ण, एकतरफा एड्रीनर्जिक एब्लेशन की अनुमति देकर एड्रीनर्जिक संक्रमण के प्रभावों का अध्ययन करने की एक विधि है। हालांकि, चूहों में सर्जिकल सिम्पैथेक्टोमी बेहतर ग्रीवा नाड़ीग्रन्थि के छोटे आकार के कारण तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है। यह अध्ययन सहानुभूति तंत्रिका तंत्र को नष्ट करने के लिए बेहतर ग्रीवा नाड़ीग्रन्थि को मज़बूती से पहचानने और निकालने के लिए एक शल्य चिकित्सा तकनीक का वर्णन करता है। गैंग्लियन की सफल पहचान और हटाने को ट्रांसजेनिक माउस का उपयोग करके फ्लोरोसेंट सिम्पेथेटिक गैन्ग्लिया की इमेजिंग करके, पोस्ट-रिसेक्शन हॉर्नर सिंड्रोम की पहचान करके, कटे हुए गैन्ग्लिया में एड्रीनर्जिक मार्करों के लिए धुंधला करके, और सिम्पैथेक्टोमी के बाद लक्ष्य अंगों में कम एड्रीनर्जिक इम्यूनोफ्लोरेसेंस का अवलोकन करके मान्य किया जाता है। यह मॉडल कैंसर की प्रगति के साथ-साथ सहानुभूति तंत्रिका तंत्र द्वारा विनियमित अन्य शारीरिक प्रक्रियाओं के भविष्य के अध्ययन को सक्षम बनाता है।
Introduction
कई अध्ययनों ने बताया है कि ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट में तंत्रिकाएं ट्यूमर की प्रगति का समर्थन करने में सक्रिय भूमिका निभाती हैं। एड्रीनर्जिक सहानुभूति तंत्रिकाओं के पृथक्करण को विवो 1,2,3 में प्रोस्टेट और गैस्ट्रिक कैंसर में ट्यूमर के विकास और प्रसार को बाधित करने के लिए दिखाया गया है, जबकि एड्रीनर्जिक रिसेप्टर्स की औषधीय नाकाबंदी सिर और गर्दनके कैंसर में ट्यूमर के विकास को रोकती है। अग्नाशय, गर्भाशय ग्रीवा और बेसल सेल कार्सिनोमा प्रगति 5,6,7 में सहानुभूति तंत्रिका भागीदारी का भी वर्णन किया गया है।
सहानुभूति तंत्रिका तंत्र के भीतर, बेहतर ग्रीवा नाड़ीग्रन्थि (एससीजी) सहानुभूति ट्रंक का एकमात्र नाड़ीग्रन्थि है जो सिर को आंतरिक करता है। एससीजी विभिन्न शारीरिक कार्यों को नियंत्रित करता है, जैसे लार स्राव और सर्कैडियन लय, और सीधे ग्रीवा लिम्फ नोड्स 8,9,10 को आंतरिक करता है। एससीजी को पैथोलॉजिक प्रक्रियाओं जैसे मैकुलर अपघटन11 और महाधमनी विच्छेदन12 की प्रगति में भी फंसाया गया है। इसके अतिरिक्त, एससीजी के अलग होने से इस्किमिया से प्रेरित तीव्र गुर्दे की चोट13 को बढ़ाने और चूहों में आंत माइक्रोबायोटा कोबदलने की सूचना मिली है।
एक माउस मॉडल में एससीजी का पूर्ण पृथक्करण कैंसर और स्वायत्त तंत्रिका तंत्र अनुसंधान को सक्षम करने के लिए एक मूल्यवान प्रयोगात्मक तकनीक का प्रतिनिधित्व करेगा। जबकि कई अध्ययनों ने फार्माकोलॉजिकल एड्रीनर्जिक रिसेप्टर नाकाबंदी का उपयोग एड्रीनर्जिक एब्लेशन 15,16,17,18,19,20 के रूप में किया है, सर्जिकल रिसेक्शन बार-बार फार्माकोलॉजिकल हस्तक्षेप और संबंधित दुष्प्रभावों 21,22,23 की आवश्यकता से बचते हुए पूर्ण, एकतरफा एड्रीनर्जिक एब्लेशन की अनुमति देता है।
एससीजी के सर्जिकल रिसेक्शन को चूहों24 में वर्णित किया गया है, और बेहतर ग्रीवा गैंग्लियनेक्टोमी (एससीजीएक्स) के प्रभाव का अध्ययन करने वाली अधिकांश रिपोर्टों ने चूहे के मॉडल को नियोजित किया है। चूहे के मॉडल की तुलना में, एससीजी के छोटे आकार के कारण एससीजीएक्स चूहों में तकनीकी रूप से अधिक चुनौतीपूर्ण है। हालांकि, चूहों को संभालना अपेक्षाकृत आसान है, अधिक लागत प्रभावी है, और आनुवंशिक हेरफेर के लिए अधिक उत्तरदायी है। गार्सिया एट अल चूहों में एससीजीएक्स की रिपोर्ट करने वाले पहले लोगों में से एक थे, और यह इंसुलिन रिलीज25 को प्रभावित करने के लिए पाया गया था। हाल ही में, ज़िगलर एट अल ने चूहों24,26 के लिए वर्णित प्रकाशित तकनीक के आधार पर चूहों में एससीजीएक्स का वर्णन किया। यह और अन्य लेख एक ऐसी विधि का वर्णन करते हैं जिसमें सामान्य कैरोटिड धमनी (सीसीए) को पहले पहचाना और विच्छेदित किया जाता है, और एससीजी को बाद में सीसीए21,22,27,28 के विभाजन से हटा दिया जाता है। इस लेख में, चूहों में एक कम आक्रामक और सुरक्षित तकनीक का वर्णन किया गया है जो सीसीए के विच्छेदन से बचता है, जिससे इस प्रक्रिया की सबसे गंभीर जटिलता कम हो जाती है – सीसीए की चोट से रक्तस्राव।
Protocol
Representative Results
Discussion
यह प्रोटोकॉल एससीजी इनपुट के सर्जिकल एकतरफा पृथक्करण के लिए एक माउस मॉडल का वर्णन करता है। यह तकनीक विभिन्न सेटिंग्स में एड्रीनर्जिक संक्रमण के प्रभावों का अध्ययन करने की अनुमति देती है। इसके अलावा, ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Q. W. NIH T32CA009685 द्वारा समर्थित था। आर. जे. डब्ल्यू. को एनआईएच R01CA219534 द्वारा समर्थित किया गया था। मेमोरियल स्लोन केटरिंग कैंसर सेंटर कोर सुविधाओं को एनआईएच P30CA008748 द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Anti-Tyrosine Hydroxylase Antibody | EMD Millipore | AB152 | |
| Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment | Akorn | 59399-162-35 | |
| Curity 2 x 2 Inch Gauze Sponge 8 Ply, Sterile | Covidien | 1806 | |
| Derf Needle Holder | Thomas Scientific | 1177K00 | |
| Dissecting Microscope | |||
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| ETHILON Nylon Suture | Ethicon | 698H | |
| Fine Scissors – ToughCut | Fine Science Tools | 14058-09 | |
| Hypoallergenic Surgical Tape | 3M Blenderm | 70200419342 | |
| Induction Chamber, 2 Liter | VetEquip | 941444 | |
| Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
| Nair | Church & Dwight Co., Inc | 40002957 | chemical hair removing agent |
| NORADRENALINE RESEARCH ELISA | Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics) | BA E-5200 | |
| NSG Mouse | Jackson Laboratory | JAX:005557 | |
| Povidone-Iodine Swabstick | PDI | S41350 | |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 |
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