الأوعية الدموية في شبكية الفأر مثيرة للاهتمام بشكل خاص في فهم آليات تشكيل نمط الأوعية الدموية. يقيس هذا البروتوكول تلقائيا قطر أوعية شبكية الفأر من صور قاع تصوير الأوعية الفلورية على مسافة ثابتة من القرص البصري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
قياس قطر وعاء الشبكية من صور تصوير الأوعية الفلورية للفأر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
من المهم دراسة تطور الأوعية الدموية في شبكية العين في اعتلال الشبكية حيث يمكن أن يؤدي نمو الأوعية الدموية غير الطبيعي في النهاية إلى فقدان البصر. تظهر الطفرات في جين عامل النسخ المرتبط ب microphthalmia (Mitf) نقص التصبغ ، و microphthalmia ، وتنكس الشبكية ، وفي بعض الحالات ، العمى. يعد التصوير في الجسم الحي لشبكية العين بوسائل غير جراحية أمرا حيويا لأبحاث العين. ومع ذلك ، نظرا لصغر حجمه ، فإن تصوير قاع الفئران صعب وقد يتطلب أدوات متخصصة وصيانة وتدريبا. في هذه الدراسة ، قمنا بتطوير برنامج فريد يتيح تحليل قطر الأوعية الشبكية في الفئران باستخدام برنامج آلي مكتوب في MATLAB. تم الحصول على صور قاع العين باستخدام نظام كاميرا قاع العين التجاري بعد الحقن داخل الصفاق لمحلول ملح الفلوريسين. تم تغيير الصور لتحسين التباين ، وسمح برنامج MATLAB باستخراج متوسط قطر الأوعية الدموية تلقائيا على مسافة محددة مسبقا من القرص البصري. تم فحص التغيرات الوعائية في الفئران البرية والفئران مع طفرات مختلفة في جين Mitf من خلال تحليل قطر وعاء الشبكية. برنامج MATLAB المكتوب خصيصا والذي تم تطويره هنا عملي وسهل الاستخدام ، ويسمح للباحثين بتحليل متوسط القطر ومتوسط القطر الإجمالي ، بالإضافة إلى عدد الأوعية من الأوعية الدموية في شبكية الفأر ، بشكل مريح وموثوق.
المقدمة
ربما يكون السرير الوعائي الأكثر بحثا في الجسم هو الأوعية الدموية في شبكية العين. مع التطور التقني المتطور باستمرار ، يتم تصوير الأوعية الدموية في شبكية العين بسهولة في المرضى الأحياء واستخدامها في العديد من مجالات البحث1. بالإضافة إلى ذلك ، أثبتت الأوعية الدموية في شبكية الفأر أثناء التطور أنها نظام نموذجي فعال للغاية للبحث في البيولوجيا الأساسية لنمو الأوعية الدموية. الغرض الأساسي من الأوعية الدموية في شبكية العين هو تزويد الجزء الداخلي من شبكية العين بدعم التمثيل الغذائي من خلال شبكة شعرية صفائحية تتخلل الأنسجة العصبية2. ومع ذلك ، فإن حالة شبكية العين ، وبالتالي أي خلل وظيفي أو ضمور ، يمكن أن يكون لها آثار كبيرة على كل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل هيئة الأغذية والطب البيطري الأيسلندية (ترخيص MAST رقم 2108002). أجريت جميع الدراسات على وفقا لبيان جمعية أبحاث الرؤية وطب العيون (ARVO) لاستخدام في أبحاث العيون والرؤية. تم استخدام ذكور وإناث C57BL / 6J و Mitfmi-vga9 / + الفئران في هذه الدراسة. تم استخدام الفئران C57BL / 6J (n = 7) كعنصر تحكم. تم الحصول على الأنواع البرية تجاريا (انظر جدول المواد) ، ولكن تم تربية جميع الفئران الطافرة (ن = 7) وتربيتها في مرافق في المركز الطبي الحيوي بجامعة أيسلندا. في هذه الدراسة ، تم استخدام عمرها 3 أشهر. ومع ذلك ، ينطبق البروتوكول حتى على 1 شهر الأكبر سنا.
1. التحضير التجريبي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوضح الشكل 1 العملية المستخدمة لتحليل الأوعية الدموية في شبكية العين ، والتي يتم تطبيقها على صور FFA للفأر من جميع الفئران المختبرة. يستخدم نصف قطر أكبر مرتين من القرص البصري لقياس شدة وحدات البكسل في اتجاه دائري في اتجاه عقارب الساعة من مركز القرص البصري. يقوم بتمييز وحدات البكسل بنقطة بداية أو نهاية عندما يصادف نقاطا أعلى وأسفل عتبة محددة من قبل المستخدم ، على التوالي. يتكرر هذا 30 مرة ، في كل مرة يبتعد قليلا عن مركز القرص البصري. يتم التقاط صور FFA بعد 5 دقائق من حقن الفلوريسئين (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذه المقالة هي الأولى التي تقدم طريقة لتحليل قطر الأوعية الدموية في شبكية العين والأوعية الدموية في شبكية العين من صور FA للفأر. نظرا لأنه تم استخدام تصوير قاع العين فقط لالتقاط صور للأوعية الدموية في شبكية العين ، فإن الطريقة لها العديد من العيوب ، أحدها أنه لا يمكن للمرء إلا أن يستنتج التغيرات في الطبقات السطحية من الأوعية الدموية الشبكية في الفئران التي تم فحصها في هذه الدراسة. أي اختلافات في الطبقات العميقة غير معروفة حتى الآن.
تم تقديم طريقة فريدة لتحليل صور التصوير المقطعي للتماسك البصر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ويعلن أصحاب البلاغ أنه لا توجد مصالح متنافسة.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من خلال منحة زمالة ما بعد الدكتوراه من صندوق البحوث الأيسلندي (217796-052) (AGL) وصندوق Helga Jónsdóttir و Sigurlidi Kristjánsson التذكاري (A.G.L و T.E.). يشكر المؤلفون البروفيسور إيريكور شتاينغريمسون على توفير الفئران.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1٪ تروبيكاميد (ميدرياسيل) | مختبرات | عامل Mydriatic | |
| 2٪ Methocel | OmniVision Eye Care | Hydroxypropryl methylcellulose | |
| gel C57BL / 6J | Jackson Laboratory | 000664 | Wild نوع الفئران |
| Excel لبرنامج Microsoft 365 | Microsoft Inc | البرامج | |
| ملح الصوديوم | الفلورسينسيجما ألدريتش | 28803-100G | تصوير الأوعية الفلورية |
| Matlab 8.0 | The MathWorks، Inc. | حزمة البرمجيات | |
| ميكرون الرابع القوارض قاع العين الكاميرا | فينيكس ميكرون | 40-2200 | قاع العين |
| الفوتوغرافي فينيليفرين 10٪ ث / v | Bausch & عامل لومب | ميدرياتيك | |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات - 100 قرص | جيبكو | 18912-014 | التخفيف |
| سيجمابلوت 13 | حزمة برامج | البرمجيات | |
| جاندل S-Ketamine ، 25 مجم / مل | Pfizer Inc. | PAA104470 | التخدير IP |
المراجع
- Cheung, C. Y., Ikram, M. K., Chen, C., Wong, T. Y. Imaging retina to study dementia and stroke. Progress in Retinal and Eye Research. 57, 89-107 (2017).
- Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. Retinal vasculature development in health and disease. Progress in Retinal ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
