पार्थेनोजेनेटिक कीट, मस्टर्ड एफिड, लिपाफिस एरिसिमी (केएलटी) के खिलाफ एंटोमोपैथोजेनिक कवक के एफिसाइडल प्रभाव का आकलन।
Summary
यह प्रोटोकॉल एक पार्थेनोजेनेटिक कीट सरसों एफिड (लिपाफिस एरिसिमी (काल्ट)) के खिलाफ एंटोमोपैथोजेनिक कवक (ईपीएफ) की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए एक अनुकूलित अलग-पत्ती बायोसेसे प्रणाली प्रस्तुत करता है। यह विधि पेट्री डिश प्रयोगों के दौरान डेटा संग्रह प्रक्रिया को रेखांकित करती है, जिससे शोधकर्ताओं को सरसों एफिड्स और अन्य पार्थेनोजेनेटिक कीड़ों के खिलाफ ईपीएफ की उग्रता को लगातार मापने में सक्षम बनाता है।
Abstract
मस्टर्ड एफिड (एल एरिसिमी) एक कीट है जो विभिन्न क्रूसिफेरस फसलों को संक्रमित करता है और पौधों के वायरस को प्रसारित करता है। पर्यावरण के अनुकूल कीट प्रबंधन प्राप्त करने के लिए, एंटोमोपैथोजेनिक कवक (ईपीएफ) इस कीट को नियंत्रित करने के लिए संभावित माइक्रोबियल नियंत्रण एजेंट हैं। इसलिए, क्षेत्र आवेदन से पहले पेट्री डिश स्थितियों के तहत ईपीएफ आइसोलेट्स की विषाणु स्क्रीनिंग आवश्यक है। हालांकि, मस्टर्ड एफिड एक पार्थेनोजेनेटिक कीट है, जिससे पेट्री डिश प्रयोगों के दौरान डेटा रिकॉर्ड करना मुश्किल हो जाता है। इस मुद्दे को हल करने के लिए अलग-पत्ती बायोएसेस के लिए एक संशोधित प्रणाली विकसित की गई थी, जिसमें एफिड्स पर कोनिडिया को टीका लगाने और बीजाणु निलंबन के बाद हवा में सुखाने की सुविधा प्रदान करके डूबने से रोकने के लिए माइक्रो-स्प्रेयर का उपयोग किया गया था। प्रणाली ने अवलोकन अवधि के दौरान उच्च सापेक्ष आर्द्रता बनाए रखी, और पत्ती डिस्क दस दिनों से अधिक समय तक ताजा रही, जिससे एफिड्स के पार्थेनोजेनेटिक प्रजनन की अनुमति मिली। संतान निर्माण को रोकने के लिए, पेंटिंग ब्रश का उपयोग करके दैनिक हटाने की एक प्रक्रिया लागू की गई थी। यह प्रोटोकॉल सरसों एफिड्स या अन्य एफिड्स के खिलाफ ईपीएफ आइसोलेट्स की उग्रता का मूल्यांकन करने के लिए एक स्थिर प्रणाली प्रदर्शित करता है, जिससे एफिड नियंत्रण के लिए संभावित आइसोलेट्स का चयन संभव हो जाता है।
Introduction
सरसों एफिड (एल एरिसिमी) एक कुख्यात कीट है जो विभिन्न प्रकार की क्रूसिफेरस फसलों को प्रभावित करता है, जिससे महत्वपूर्णआर्थिक नुकसान होता है। जबकि एफिड संक्रमण से निपटने के लिए कई व्यवस्थित कीटनाशकों की सिफारिश की गई है, इन कीटनाशकों का लगातार उपयोग कीटनाशक प्रतिरोध 2,3 के बारे में चिंताओं को बढ़ाता है। इसलिए, पर्यावरण के अनुकूल कीट प्रबंधन के संदर्भ में, एंटोमोपैथोजेनिक कवक (ईपीएफ) एक उपयुक्त वैकल्पिक नियंत्रण रणनीति के रूप में काम कर सकता है। ईपीएफ एक कीट रोगज़नक़ है जिसमें उनके क्यूटिकल्स को भेदकर मेजबानों को संक्रमित करने की क्षमता होती है, जिससे यह एफिड्स और अन्य पौधे-चूसने वाले कीड़ों को नियंत्रित करने के लिए एक शक्तिशाली एजेंट बन जाताहै। इसके अलावा, ईपीएफ एक व्यवहार्य और टिकाऊ कीट प्रबंधन तकनीक साबित हुई है, जो पौधे रोगज़नक़ प्रतिरोध और पौधे केविकास को बढ़ावा देने जैसे लाभ प्रदान करती है।
ईपीएफ कीट-मिट्टी चारा के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता हैया क्षेत्र में कीट शवों से अलग किया जा सकता है। हालांकि, फंगल आइसोलेट्स के आगे उपयोग से पहले, रोगजनकता स्क्रीनिंग आवश्यक है। एफिड्स के खिलाफ ईपीएफ की प्रभावशीलता पर कई अध्ययन किए गए हैं, जो महत्वपूर्ण फसल कीट हैं जो गंभीर नुकसान पहुंचा सकते हैं 8,9. एफिड्स की विभिन्न प्रजातियों के बीच सरसों एफिड्स का परीक्षण ब्यूवेरिया एसपीपी, मेटारिज़ियम एसपीपी, लेकेनिसिलियम एसपीपी, पेसिलोमाइसेस एसपीपी, और यहां तक कि अल्टरनेरिया के कई उपभेदों के लिए संवेदनशीलता के लिए किया गया है, जिसे मुख्य रूप से सैप्रोफाइटिक और प्लांट रोगजनक कवक के रूप में जाना जाता है, लेकिन सरसों एफिड्स10,11,12 के खिलाफ कुछ घातक प्रभाव दिखाए हैं।
प्रयोगशाला स्थितियों के तहत एफिड्स के खिलाफ ईपीएफ की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए, बायोएसेस को दो मुख्य भागों में विभाजित किया जा सकता है: टीकाकरण कक्ष और फंगल टीकाकरण। वर्तमान प्रोटोकॉल एक टीकाकरण कक्ष के निर्माण का वर्णन करता है, जहां एफिड्स को विभिन्न तरीकों का उपयोग करके बनाए रखा जा सकता है जैसे कि नम कपास में लिपटे पेटीओल के साथ एक उत्पादीकृत पत्ती, नम फिल्टर पेपर के साथ पंक्तिबद्ध पेट्री डिश के साथ एक एक्साइज्ड लीफ डिस्क, पॉट पौधों पर सीधा रखरखाव, या पेट्री डिश या कंटेनर10 के भीतर पानी के आगर में एम्बेडेड एक एक्साइज्ड लीफ डिस्क। 11,13. फंगल टीकाकरण के सामान्य तरीकों में कोनिडिया छिड़काव, एफिड को कोनिडिया निलंबन में विसर्जित करना, पत्ती को कोनिडिया निलंबन में डुबोना, और प्लांट एंडोफाइट टीकाकरण 11,14,15,16 शामिल हैं। जबकि विभिन्न टीकाकरण विधियां मौजूद हैं, बायोएसेस को क्षेत्र अनुप्रयोग स्थितियों का अनुकरण करना चाहिए। उदाहरण के लिए, पत्ती की डूबी हुई विधि12,17 के मामले में, ईपीएफ की दक्षता का मूल्यांकन किया जा सकता है, लेकिन चूंकि एफिड्स कवक से भरी पत्तियों को संक्रमित करते हैं, इसलिए एफिड का पृष्ठीय पक्ष, जो एक अधिमान्य प्रवेश स्थल है, आमतौर पर कवक के संपर्क में नहीं आता है।
प्रयोगशाला स्थितियों के तहत ईपीएफ के एफिसाइडल प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए, यह प्रोटोकॉल कुछ संशोधनों के साथ योकोमी और गॉटवाल्ड18 द्वारा वर्णित अलग-पत्ती विधि का उपयोग करने का सुझाव देता है, इसके बाद माइक्रो-स्प्रेयर का उपयोग करके कोनिडिया टीकाकरण किया जाता है। यह विधि पानी की अतिरिक्त पुनःपूर्ति की आवश्यकता के बिना कम से कम सात दिनों के लिए बायोसेचैंबर में लगभग100% आर्द्रता बनाए रखती है। इसके अतिरिक्त, एफिड्स को एक सतह तक सीमित करने से कोनिडिया छिड़काव के लिए उनका जोखिम सुनिश्चित होता है और अवलोकनकी सुविधा मिलती है। हालांकि, टीकाकरण कक्ष के भीतर चलते समय एफिड्स उजागर आगर की सतह में फंस सकते हैं। इसके अलावा, सरसों एफिड्स के साथ पेट्री डिश प्रयोग में डेटा रिकॉर्ड करना, जो पार्थेनोजेनेटिक कीड़े हैं, उनके तेजी से विकास और प्रजनन के कारण चुनौतीपूर्ण हो सकते हैं। हटाए बिना टीका लगाए गए वयस्कों और उनकी संतान के बीच अंतर करना मुश्किल है। इस कदम के साथ आगे बढ़ने के विवरण का शायद ही कभी उल्लेख किया जाता है, और कुछ असंगत कारकों, जैसे कि पत्ती की खपत क्षेत्र, को अनुकूलित करने की आवश्यकता होती है।
यह प्रोटोकॉल मस्टर्ड एफिड्स के खिलाफ ईपीएफ आइसोलेट्स की उग्रता की जांच के लिए एक स्थिर प्रणाली को प्रदर्शित करता है, जिससे व्यापक ईपीएफ लाइब्रेरी से विभिन्न एफिड प्रजातियों के खिलाफ संभावित आइसोलेट्स का चयन किया जा सकता है। क्षेत्र-एकत्रित एफिड्स की पहचान की जा सकती है, और लगातार परिणामों के साथ एक आसान और व्यवहार्य पद्धति का उपयोग करके विभिन्न फंगल आइसोलेट्स के एफिसाइडल प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए सरसों एफिड्स की पर्याप्त प्रयोगशाला आबादी स्थापित की जा सकती है। एफिड्स ने कृषि पारिस्थितिकी प्रणालियों में तीव्र और बार-बार मानवजनित दबावों के जवाब में कई विकासवादी तंत्र विकसित किए हैं, जोखाद्य सुरक्षा के लिए चुनौतियां पेश करते हैं। इसलिए, इस वर्णित विधि को विभिन्न एफिड प्रजातियों के खिलाफ संभावित ईपीएफ आइसोलेट्स का मूल्यांकन करने के लिए बढ़ाया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
क्रूसिफर्स, सब्जियों का एक समूह, अक्सर कई एफिड प्रजातियों से संक्रमित होता है, जिसमें मस्टर्ड एफिड (एल एरिसिमी) और गोभी एफिड (ब्रेविकोरिन ब्रासिका) 26 शामिल हैं। ताइवान27 में दोनो?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध को विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय (MOST) से 109-2313-B-005-048-MY3 द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| 10 μL Inoculating Loop | NEST Scientific | 718201 | |
| 100 bp DNA Ladder III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| 50 mL centrifuge tube | Bioman Scientific | ET5050-12 | |
| 6 cm Petri dish | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| 6 mm insect aspirator | MegaView Science | BA6001 | |
| 70 mm filter paper NO.1 | Toyo Roshi Kaisha | ||
| 70% ethanol | |||
| 9 cm Petri dish | Alpha Plus Scientific | 16001 | |
| Agar | Bioman Scientific | AGR001.1 | Microbiology grade |
| Agarose | Bioman Scientific | PB1200 | |
| BioGreen Safe DNA Gel Buffer | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| GenepHlow Gel/PCR Kit | Geneaid | DFH300 | https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf |
| Gene-Spin Genomic DNA Isolation Kit | Protech Technology | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Hemocytometer | Paul Marienfeld | 640030 | |
| Komatsuna leaves (Brassica rapa var. perviridis) | Tai Cheng Farm | 1-010-300410 | |
| Microsprayer | |||
| MiniAmp Thermal Cycler | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| Mustard aphid (Lipaphis erysimi) | |||
| Painting brush | Tian Cheng brush company | 4716608400352 | |
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| Pellet pestle | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud Dextrose Broth | HiMedia | MH033-500G | |
| SPSS Statistics | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
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