Method Article

Entomopatojenik Fungusların Partenogenetik Böcek, Hardal Yaprak Biti, Lipaphis erysimi (Kalt.)

DOI:

10.3791/65312

⸱

July 21st, 2023

 , 
1Department of Entomology, National Chung Hsing University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, partenogenetik bir böcek olan hardal yaprak bitine (Lipaphis erysimi (Kalt.)) karşı entomopatojenik mantarların (EPF) etkinliğini değerlendirmek için optimize edilmiş bir müstakil yaprak biyo-tahlil sistemi sunar. Yöntem, Petri kabı deneyleri sırasında veri toplama sürecini özetleyerek, araştırmacıların EPF'nin hardal yaprak bitlerine ve diğer partenogenetik böceklere karşı virülansını tutarlı bir şekilde ölçmelerini sağlar.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hardal yaprak biti (L. erysimi), çeşitli turpgillerden bitkileri istila eden ve bitki virüslerini bulaştıran bir zararlıdır. Çevre dostu haşere yönetimi elde etmek için, entomopatojenik mantarlar (EPF), bu haşereyi kontrol etmek için potansiyel mikrobiyal kontrol ajanlarıdır. Bu nedenle, saha uygulamasından önce Petri kabı koşulları altında EPF izolatlarının virülans taraması gereklidir. Bununla birlikte, hardal yaprak biti partenogenetik bir böcektir ve Petri kabı deneyleri sırasında veri kaydetmeyi zorlaştırır. Bu sorunu çözmek için, yaprak bitlerine konidia aşılamak ve spor süspansiyonundan sonra havayla kurutmayı kolaylaştırarak boğulmayı önlemek için bir mikro püskürtücü kullanarak, müstakil yapraklı biyo-tahliller için değiştirilmiş bir sistem geliştirilmiştir. Sistem, gözlem süresi boyunca yüksek bağıl nemi korudu ve yaprak diski on günden fazla taze kaldı ve yaprak bitlerinin partenogenetik üremesine izin verdi. Yavru oluşumunu önlemek için, bir boyama fırçası kullanarak günlük bir çıkarma işlemi uygulandı. Bu protokol, EPF izolatlarının hardal yaprak bitlerine veya diğer yaprak bitlerine karşı virülansını değerlendirmek için kararlı bir sistem gösterir ve yaprak biti kontrolü için potansiyel izolatların seçilmesini sağlar.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hardal yaprak biti (L. erysimi), çeşitli turpgillerden bitkileri istila eden ve önemli ekonomik kayıplara neden olan kötü şöhretli bir zararlıdır1. Yaprak biti istilasıyla mücadele etmek için birkaç sistematik insektisit önerilmiş olsa da, bu insektisitlerin sık kullanımı pestisit direnciile ilgili endişeleri artırmaktadır 2,3. Bu nedenle, çevre dostu haşere yönetimi açısından, entomopatojenik mantarlar (EPF) uygun bir alternatif kontrol stratejisi olarak hizmet edebilir. EPF, konakçıların tırnak etlerine nüfuz ederek enfekte etme yeteneğine sahip bir böcek patojenidir, bu da o....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Akış şemasının tamamı Şekil 1'de gösterilmektedir.

1. Hardal yaprak biti toplama ve bakımı

  1. Hardal yaprak bitlerinin toplanması
    1. Yaprakları çevirin ve tarladaki turpgillerden mahsullerde hardal yaprak bitlerinin istilasını görsel olarak kontrol edin.
    2. Numune alma sahası bilgilerini (yani GPS) ve ev sahibi tesis(ler)i kaydedin ve çiftçilerle birlikte insektisit uygulamalarının geçmişini onaylayın.
    3. Tarladaki turpgillerden yaklaşık 50 hardal yaprak bitini 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne toplamak için bir böcek aspiratörü veya ince boyama fırçası ( <....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir grup sebze olan turpgiller, hardal yaprak biti (L. erysimi) ve lahana yaprak biti (Brevicoryne brassicae) dahil olmak üzere birden fazla yaprak biti türü tarafından sıklıkla istila edilir26. Her iki tür de Tayvan27'de rapor edilmiştir ve toplama alanında bir arada bulunmaları mümkündür. Yakından ilişkili yaprak biti türlerini ayırt etmek için, bu çalışmada bir multipleks primer seti21 kullanılarak moleküler tanımlama tekniği kul.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, bu çalışmada herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan (MOST) 109-2313-B-005 -048 -MY3 tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
10 & mu; L Aşılama DöngüsüNEST Scientific718201
100 bp DNA Merdiveni IIIGeneaidDL007
2x SuperRed PCR Master MixBiotoolsTE-SR01
50 mL santrifüj tüpüBioman ScientificET5050-12
6 cm Petri kabıAlpha Plus Scientific16021
6 mm böcek aspiratörüMegaView ScienceBA6001
70 mm filtre kağıdı NO.1Toyo Roshi Kaisha
%70 etanol
9 cm Petri kabıAlpha Plus Scientific16001
AgarBioman ScientificAGR001.1Mikrobiyoloji sınıfı
AgaroseBioman ScientificPB1200
BioGreen Güvenli DNA Jel TamponuBioman ScientificSDB001T
ChromasTechnelysium
GeneDoc
GenepHlow Jel/PCR KitiGeneaidDFH300https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf
Gene-Spin Genomik DNA İzolasyon KitiProtech TeknolojisiPT-GD112-V3http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf
HemositometrePaul Marienfeld640030
Komatsuna yaprakları (Brassica rapa var. perviridis)Tai Cheng Çiftliği1-010-300410
Mikro Püskürtücü
MiniAmp Termal DöngüleyiciThermo Fisher ScientificA37834
Hardal yaprak biti (Lipaphis erysimi)
Boyama fırçasıTian Cheng fırça şirketi4716608400352
Parafilm MBemisPM-996
Pelet havaneliBioman ScientificGT100R
Sabouraud Dekstroz Suyu HiMediaMH033-500G
SPSS İstatistikIBM
TAE tamponu 50xBioman ScientificTAE501000
Tween 80PanReac AppliChem142050.1661

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
  2. Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Entomopathogenic FungiMustard Aphid ControlDetached Leaf BioassayParthenogenetic InsectVirulence ScreeningConidia InoculationFungal Isolate RecoveryGenomic DNA ExtractionPCR AmplificationAphid Mortality

Related Articles