चूहों में फ्री-हैंड इनट्रेसेरेब्रोवेंट्रिकुलर इंजेक्शन
Summary
यहां, एक फ्री-हैंड दृष्टिकोण (यानी, स्टीरियोटेक्सिक डिवाइस के बिना) का उपयोग करके चूहों में इनट्रेस्रेब्रोवेंट्रिकुलर इंजेक्शन करने के लिए एक सरल और तेज़ दृष्टिकोण का वर्णन किया गया है।
Abstract
न्यूरोएंडोक्राइन सिस्टम की जांच के लिए अक्सर चूहों के दिमाग में सीधे दवाओं, वायरस या अन्य प्रयोगात्मक एजेंटों के वितरण की आवश्यकता होती है। एक इनट्रेसरेब्रोवेंट्रिकुलर (आईसीवी) इंजेक्शन पूरे मस्तिष्क में प्रयोगात्मक एजेंट के व्यापक वितरण की अनुमति देता है (विशेष रूप से वेंट्रिकल्स के पास संरचनाओं में)। यहां, वयस्क चूहों में फ्री-हैंड आईसीवी इंजेक्शन बनाने के तरीकों का वर्णन किया गया है। चूहों के सिर पर दृश्य और स्पर्श स्थलों का उपयोग करके, पार्श्व वेंट्रिकल्स में इंजेक्शन तेजी से और मज़बूती से बनाया जा सकता है। इंजेक्शन प्रयोगकर्ता के हाथ में पकड़े गए ग्लास सिरिंज के साथ बनाए जाते हैं और लैंडमार्क से अनुमानित दूरी पर रखे जाते हैं। इस प्रकार, इस तकनीक को स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम की आवश्यकता नहीं है। इसके अलावा, इस तकनीक के लिए केवल संक्षिप्त आइसोफ्लुरेन संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है, जो जागृत, स्वतंत्र रूप से व्यवहार करने वाले चूहों में माउस व्यवहार और / या शरीर विज्ञान के बाद के मूल्यांकन की अनुमति देता है। फ्री-हैंड आईसीवी इंजेक्शन जीवित चूहों के दिमाग में प्रयोगात्मक एजेंटों के कुशल वितरण के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है और इसे न्यूरोएंडोक्राइन प्रक्रियाओं की जांच के लिए लगातार रक्त नमूनाकरण, तंत्रिका सर्किट हेरफेर या विवो रिकॉर्डिंग जैसी अन्य तकनीकों के साथ जोड़ा जा सकता है।
Introduction
मस्तिष्क में प्रयोगात्मक एजेंटों, जैसे कि ड्रग्स1, वायरस2, या सेल3 का वितरण अक्सर न्यूरोएंडोक्राइन अनुसंधान के लिए आवश्यक होता है। यदि एजेंट आसानी से रक्त-मस्तिष्क बाधा को पार नहीं करता है या प्रयोगात्मक उद्देश्य विशेष रूप से एजेंट के केंद्रीय प्रभावों का परीक्षण करना है, तो मस्तिष्क में इंजेक्शन देने के लिए एक विश्वसनीय विधि होना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, इनट्रेसेब्रोवेंट्रिकुलर (आईसीवी) अंतरिक्ष में इंजेक्शन मस्तिष्क में एजेंट को व्यापक रूप से वितरित करने का अवसर प्रदान करता है और एक बड़ा लक्ष्य क्षेत्र प्रदान करता है, इस प्रकार सफल इंजेक्शन2 की संभावना बढ़ जाती है।
आईसीवी इंजेक्शन बनाने के लिए एक सामान्य विधि में एक स्थायी निवास कैनुला का प्लेसमेंट शामिल है। इस दृष्टिकोण में, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध या कस्टम-निर्मित कैनुला को स्थान देने के लिए एक स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम आवश्यक है, क्योंकि कैनुला को जगह में चिपकाया या सीमेंट किया जाता है। अक्सर, ठीक होने पर, एंजियोटेंसिन II की एक सुप्राफिजियोलॉजिकल खुराक को कैनुला के माध्यम से प्रशासित किया जाता है, और यदि पीने के व्यवहार को तुरंत देखा जाता है, तो कैनुला को सही ढंगसे रखा जाता है। इस दृष्टिकोण के कई फायदे हैं, जिसमें दीर्घकालिक जलसेक करने की क्षमता और एक ही जानवर को कई बार इंजेक्ट करने की क्षमता शामिल है; इसके अतिरिक्त, यदि एंजियोटेंसिन II नियोजित है, तो प्रयोगात्मक यौगिकों के प्रशासन से पहले सही प्लेसमेंट की पुष्टि की जा सकती है। हालांकि, एक स्थायी प्रवेशनी रखने की कुछ सीमाएं हैं, जिनमें महंगे उपकरण (स्टीरियोटेक्सिक फ्रेम) की आवश्यकता, प्लेसमेंट के बाद कैनुला को नुकसान की संभावना (उदाहरण के लिए, चूहे पिंजरे के साथी के प्रवेशनी पर चबा सकते हैं), और स्थायी प्रवेशनी के आसपास संक्रमण की संभावना शामिल है। एकल आईसीवी इंजेक्शन को स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम3 के उपयोग के साथ बनाया जा सकता है, जो प्रभावी होने के बावजूद, संज्ञाहरण के लिए पर्याप्त जोखिम की आवश्यकता होती है और इस प्रकार, उपचार के कुछ तीव्र शारीरिक और व्यवहार संबंधी प्रभावों को अस्पष्ट कर सकता है। इसके अतिरिक्त, एक स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम में चूहों के प्लेसमेंट को स्थिर प्लेसमेंट प्राप्त करने और कान नहरों के टूटने को रोकने के लिए पर्याप्त प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है।
यहां, चूहों में फ्री-हैंड इंजेक्शन बनाने के लिए एक स्थापित विधि का वर्णन किया गया है। यह विधि पिछली रिपोर्ट 5,6 पर आधारित है। इस तकनीक के फायदे यह हैं कि यह सरल, तेज़ है, और स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम जैसे विशेष उपकरणों की आवश्यकता नहीं है। जैसा कि नीचे वर्णित है, इस प्रक्रिया में इंजेक्शन बनाने के लिए माउस सिर पर लैंडमार्क के सापेक्ष एक ग्लास सिरिंज में हेरफेर करना शामिल है, जिसे तेजी से किया जा सकता है और इस प्रकार, प्रयोगात्मक दिन पर केवल कुछ मिनटों के गैस संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहां, चूहों में आईसीवी इंजेक्शन बनाने के लिए एक सरल और प्रभावी साधन का वर्णन किया गया है। चूंकि इस तकनीक को स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम की आवश्यकता नहीं है, इसलिए दवाओं और प्रयोगात्मक एजेंटों के केंद्रीय वि…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम प्रतिनिधि परिणामों में दिखाए गए डेटा को एकत्र करने में उनके योगदान के लिए डॉ केली ब्रीन चर्च, श्री माइकल क्रेसमैन और सुश्री जेसिका जंग को धन्यवाद देना चाहते हैं। इस काम को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) आर 00 HD104994 (आरबीएम) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| 18-gauge blunt needles | SAI Infusion | B18-150 | |
| 18-gauge needles | BD Medical | 305195 | |
| Alcohol pads | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Bench pad | Fisher Scientific | 14-206-62AC22 | |
| Betadine solution | Fisher Scientific | NC1696484 | |
| Buprenorphine | Patterson Vet Supply | 07-892-5235 | Controlled substance |
| Eyelube | Fisher Scientific | 50-218-8442 | |
| Glass syringe | Hamilton | 7634-01 | |
| Injection needle | Hamilton | 7803-01 | 27 gauge, Small Hub RN needle, point style: 4, Needle length: 10cm, Angle: 45 |
| Isoflurane | Patterson Vet Supply | 07-893-8441 | |
| Isoflurane vaporizer | Vet Equip | V-10 | |
| Laboratory Tape | VWR | 89098-128 | |
| Medical grade oxygen | Airgas | OX USPEA | |
| Paraformaldehyde | Millipore-Sigma | 8.18715.1000 | |
| Phosphate Buffered Saline | Fisher Scientific | J67802.K2 | |
| PulsaR Software | Open source, University of Otago | See ref 9 | |
| Ruler | Fisher Scientific | 12-00-152 | |
| Silastic tubing (0.040" I.D.) | DOW | 508-005 | |
| Silastic tubing (0.078" I.D.) | DOW | 508-009 | |
| Sterile saline | VWR | 101320-574 | |
| Sucrose | Fisher Scientific | S5-500 |
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