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方法文章

外泌体负载胶原贴片联合非体外循环冠状动脉旁路移植术治疗慢性心肌缺血的猪外科模型

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DOI：

10.3791/65553

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2023年9月15日

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, University of Minnesota, 2School of Medicine, Dentistry and Biomedical Sciences, Queen’s University Belfast, 3Cardiology, Richmond VA Medical Center, 4Department of Research Service, Center for Veterans Research and Education, Veterans Affairs Health Care System, 5Department of Neuroscience, University of Minnesota

本文内容

摘要

本研究介绍了一种由于进行性冠状动脉狭窄导致慢性心肌缺血的猪外科模型，该模型在无心肌梗死的情况下引起心脏功能受损。缺血发生后，动物接受非体外循环冠状动脉旁路移植术，并在心外膜放置富含干细胞来源外泌体的胶原贴片作为辅助治疗。该辅助疗法可改善心肌功能和恢复。

摘要

由进行性冠状动脉狭窄引起的慢性心肌缺血可导致心肌冬眠（HIB），即心肌通过降低代谢活动来适应供氧减少的状态，从而防止心肌细胞发生不可逆损伤和梗死。这与心肌梗死不同，因为HIB在血运重建后具有恢复的潜力。患有显著冠状动脉疾病（CAD）的患者会经历慢性缺血，使其面临心力衰竭和猝死的风险。目前治疗严重CAD的标准外科手术是冠状动脉旁路移植术（CABG），但研究表明该疗法并不完善，且尚无辅助疗法可用于恢复已适应慢性缺血的心肌细胞。为弥补这一空白，本研究采用了一种适用于CABG并能模拟临床情况的猪HIB外科模型。该模型包含两次手术：第一次手术是在左前降支（LAD）动脉上植入一个1.5 mm的刚性缩窄器；随着动物生长，缩窄器逐渐引起显著狭窄，导致局部收缩功能下降。当狭窄程度达到80%时，心肌血流和功能受损，从而形成HIB。随后使用左内乳动脉（LIMA）进行非体外循环CABG，以实现缺血区域的血运重建。术后动物恢复一个月，以在牺牲前获得最佳心肌功能改善，从而便于对不同治疗组进行生理学和组织学研究。该动物模型表明，即使经过CABG，心脏功能仍可能持续受损，提示需要开发新型辅助干预措施。在本研究中，开发了一种嵌有间充质干细胞（MSC）来源外泌体的胶原贴片，可在手术中将其应用于LIMA吻合口远端的心外膜表面。该材料可贴合心外膜，具有可吸收性，并为信号因子的持续释放提供支架。这种再生疗法可促进单纯血运重建无法奏效的心肌恢复。该模型为HIB恢复过程中的生理机制研究提供了临床转化途径。

引言

全球范围内，严重冠状动脉疾病（CAD）影响着超过一亿患者，尽管其死亡率已有所下降，但它仍然是导致死亡的主要原因之一1,2。CAD 的临床表现谱广泛，从心肌梗死（MI）到存在心肌存活性的缺血状态均属其范畴。大多数临床前研究集中于心肌梗死，因其特征为存在梗死组织，可在小型和大型动物模型中进行研究。然而，该模型无法涵盖那些心肌存活性保留且适合血运重建的患者。接受冠状动脉旁路移植术（CABG）的大多数患者表现为血供减少和功能受限，同时在收缩储备和心肌存活性方面存在差异3。若不进行治疗，这些患者可能在负荷增加时进展为晚期心力衰竭甚至猝死4。在这些患者中，冠状动脉旁路移植术（CABG）是一种有效的治疗方法，但可能无法实现完全的功能恢复5。值得注意的是，舒张功能障碍是临床预后不良的标志，在血运重建后往往无法恢复，提示在 CABG 术中需要新的辅助治疗策略6,7。目前尚无可用于临床的、与 CABG 联用的辅助干预手段，以使心肌细胞恢复至完全功能状态。鉴于许多患者即使接受了适当的血运重建仍会进展为晚期心力衰竭，这一治疗空白尤为突出8。

本研究建立了一种创新的猪慢性心肌缺血模型，该模型适用于冠状动脉旁路移植术（CABG），可模拟临床冠状动脉疾病（CAD）的情况9。与其他大型动物相比，猪是研究心脏疾病的理想模型，因其缺乏心外膜桥接侧支循环，单独左前降支（LAD）狭窄即可导致区域性心肌缺血10。本研究采用16周龄雌性约克夏-长白猪。在该模型中，通过使用左乳内动脉（LIMA）移植物进行非体外循环CABG对LAD进行血运重建（补充表1）。由于缩窄装置为刚性结构，无法通过经皮冠状动脉介入治疗（PCI）解除狭窄。采用心脏磁共振成像（MRI）评估整体与区域性心功能、冠状动脉解剖结构及心肌组织存活性。心脏MRI分析显示，尽管实施了CABG，舒张功能仍受损，表现为峰值充盈率（PFR）持续降低6。舒张功能障碍的机制可能与HIB（慢性缺血性心肌病）中线粒体生物能量代谢障碍及胶原形成异常有关，且这些异常在CABG术后仍持续存在11。

间充质干细胞（MSC）在冠状动脉旁路移植术（CABG）期间通过外泌体传递治疗性信号，以促进心肌功能恢复。在该猪模型及平行研究中 体外 研究显示，在冠状动脉旁路移植术（CABG）期间植入心外膜MSC聚乳酸-羟基乙酸共聚物（vicryl）补片可恢复心肌收缩功能，并增加关键线粒体蛋白（如PGC-1α）的表达水平。12线粒体能量代谢的重要调控因子13。该 体外 该模型使我们能够探究间充质干细胞（MSCs）对受损线粒体功能的信号转导机制。外泌体是分泌型的稳定微囊泡（50–150 nm），含有蛋白质或核酸，包括微小RNA（miRNA）14. 近期 体外 数据表明，间充质干细胞来源的外泌体是恢复线粒体呼吸所必需的重要信号机制。

干细胞来源的外泌体作为一种辅助治疗手段具有广阔前景，因其易于获取、可进行商业化生产，且不存在伦理争议。考虑到临床转化应用，研究人员开发了一种将间充质干细胞（MSC）来源外泌体嵌入其中的胶原蛋白贴片，该贴片可通过手术缝合至心肌冬眠区域。研究表明，该贴片可实现外泌体的持续递送，提供一种基于旁分泌信号机制的无细胞再生疗法，靶向促进线粒体功能恢复并增强线粒体生物合成15。该方法建立了临床前研究模型，用于探讨MSC来源疗法在血管重建时通过改善线粒体功能、减轻炎症反应，逆转心肌细胞对慢性缺血适应性改变的能力，从而改善心脏功能。

本研究展示了采用左乳内动脉（LIMA）至左前降支（LAD）吻合的非体外循环冠状动脉旁路移植术（off-pump CABG）外科手术方法，以绕过近端LAD狭窄区域，模拟冠状动脉疾病（CAD）患者的常规治疗方案。作为CABG的辅助治疗，本研究还演示了将间充质干细胞（MSC）来源的外泌体负载的胶原贴片应用于心肌缺血区域的外科操作。该手术模型可用于研究外泌体贴片所产生的旁分泌效应所引发的生理反应，以及心肌修复过程中的分子机制。

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方案

明尼阿波利斯退伍军人事务医疗中心和明尼苏达大学的机构动物照护与使用委员会（IACUC）已批准所有动物实验研究。实验遵循美国国家卫生研究院（NIH）现行的实验动物使用与照护指南。

1. 间充质干细胞的分离及外泌体的制备与表征

  1. 分离骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）
    1. 从一头20周龄雌性约克夏-长白猪的胸骨或胫骨获取30–50 mL无菌骨髓。操作时，将一根25 mm长的15G骨内针插入胸骨或胫骨，用含10 mL肝素的60 mL注射器抽取骨髓样本。
      注：有关骨髓采集的更多细节，请参见Pittenger等和Hocum-Stone等的研究12,16。
    2. 简而言之，将骨髓样本加入含肝素的Vacutainer CPT管中，在1800 x g条件下离心30分钟。
    3. 收集含有单个核细胞的白膜层，并用Hank's平衡盐溶液洗涤。通过离心沉淀单个核细胞，然后重悬于生长培养基（含10%胎牛血清[FBS]）中。
    4. 将单个核细胞转移至细胞培养瓶中进行贴壁培养。利用其贴壁特性，从单个核细胞组分中分离出MSCs。
    5. 在24小时内洗去所有非MSC细胞，仅在组织培养瓶中保留一层MSC单层细胞。通过流式细胞术确认MSC表型，确保其对造血细胞标志物CD45呈阴性，而对MSC标志物CD90和CD105呈阳性。
  2. 猪间充质干细胞来源外泌体的制备与表征
    1. 接种1 × 104个H9C2大鼠心肌细胞，使用1× DMEM + 10% FBS及1×青霉素-链霉素培养基进行培养。同时，在高级DMEM + 5% FBS及1×青霉素-链霉素培养基中接种2 × 104个猪MSCs。
    2. 当两种细胞均达到至少80%汇合度时，更换为无外泌体的H9C2和MSC培养基。
    3. 将H9C2心肌细胞暴露于轻度缺氧环境（1% O2，持续24小时）。24小时后从缺氧环境中取出培养瓶，并用移液器吸出H9C2培养基。
    4. 移除并弃去MSC培养瓶中的培养基，加入经纯化的H9C2培养基至MSC培养瓶中。在常氧条件下（5% CO2、20% O2、37 °C）孵育6小时。
    5. 使用总外泌体分离试剂，按照制造商说明书从共培养的条件培养基中提取外泌体。
    6. 通过Western blot检测常见外泌体蛋白（使用抗CD63抗体，稀释比1:1000）来验证外泌体的身份17。
    7. 进行纳米颗粒追踪分析（NTA），以定量外泌体并评估纳米颗粒的大小及其分布。具体操作为：将外泌体总蛋白（50 μg）溶解于500 μL PBS中，利用纳米颗粒追踪分析仪测定外泌体的浓度和粒径分布。
    8. 使用纳米颗粒追踪分析软件进行数据分析。

2. 非体外循环冠状动脉旁路移植术

  1. 动物准备
    1. 在预定手术前3天称量动物（16周龄雌性约克夏-长白猪）。手术前禁食12小时，禁食期间可自由饮水。
    2. 术前2-4小时通过肌内注射给予0.18 mg/kg的丁丙诺啡。
  2. 动物的诱导
    1. 通过肌肉注射给予动物6.6 mg/kg的替来他明-唑拉西泮/赛拉嗪以进行镇静。
    2. 等待15分钟，通过评估下颌张力确认充分镇静后，于中央耳缘静脉置入22G导管。
      注意：若耳缘静脉不适用，可考虑其他外周静脉（例如头静脉）。
    3. 每只眼睛局部涂抹眼膏。通过静脉途径给予 1-2 mg/kg 剂量的丙泊酚以诱导全身麻醉。下颌张力是反映麻醉深度最可靠的指标，应在整个操作过程中持续评估。
    4. 使用合适尺寸的气管插管对动物进行插管。
  3. 外科手术
    1. 剃除动物胸骨和腹股沟区域的毛发，以准备手术操作。
    2. 将机械通气设置为每分钟10-15次呼吸，氧气流量1-4 L/min，并根据需要调节异氟烷浓度为1.0-3.0%，以维持手术所需的深度麻醉状态。通过检查角膜反射或下颌反射消失确认深度麻醉。
    3. 体位监测设备（心电图、呼气末二氧化碳）2心率、血氧饱和度、血压和体温
    4. 将静脉导管连接至生理盐水袋或乳酸林格液袋，以持续输注维持液体。
    5. 使用无菌技术，以聚维酮碘 scrub 和溶液清洁皮肤 3 次，以确保充分无菌并降低手术部位感染的风险。
    6. 通过血管内途径给予利多卡因（负荷剂量 2 mg/kg 或持续输注剂量 50 mcg/kg/min）以预防心律失常。
    7. 将动物置于背侧卧位，并用无菌毛巾覆盖。
    8. 通过Seldinger技术行左侧或右侧股动脉切开置入动脉导管，术中连接换能器以持续监测血压。
    9. 使用单极电灼器从近端的胸骨切迹开始，向远端的剑突作一长度为20 cm的切口，并切开肌肉层、皮下脂肪及结缔组织，直至胸骨。
    10. 使用摆动锯行胸骨正中切开术。
      注意：为避免既往左开胸放置LAD缩窄器手术所致的心包粘连增加心肌损伤风险，再次胸骨切开术应避免使用标准锯。
    11. 使用剪刀分离胸骨后板。使用专用的胸腔牵开器以充分暴露纵隔。
    12. 使用单极电凝或梅岑鲍姆剪刀分离粘连组织。仔细解剖胸骨旁肌肉和脂肪组织，以暴露左侧乳内动脉（LIMA）。
    13. 暴露左乳内动脉（LIMA）至胸骨边缘外侧后，使用电凝钩以钝性分离法将其从胸壁小心分离。采用骨架化左乳内动脉作为移植血管。
    14. 从第3水平开始解剖rd 肋间隙。轻柔抬高左侧胸骨边缘以获得最佳视野。
    15. 轻轻牵拉胸廓内动脉（LIMA）外膜以暴露其动脉和静脉分支。使用血管夹夹闭LIMA侧的分支，并电凝胸壁侧的分支。
      注意：必须注意避免电灼LIMA上的夹子，因为这可能导致血管通路狭窄。
    16. 在初步游离一段LIMA后，继续向近端解剖至锁骨下静脉水平，向远端解剖至LIMA分叉处。
    17. 解剖完成后，通过静脉途径给予肝素，剂量为100–300 U/kg。肝素给药后等待3分钟。
    18. 3分钟后，在左内乳动脉（LIMA）分叉水平之前夹闭其远端，并切断血管桥。用一根游离的2-0丝线结扎远端。
    19. 准备近端以进行移植。通过让移植物流出血液数秒钟，目视检查血流质量。
    20. 用无创血管夹轻轻夹住LIMA远端以防止出血。做倒T形切口，切开心包，切口长约5-6 cm。在切口两侧的心包上各缝合一根3-0缝线用于牵拉。
    21. 用硅胶牵开带和组织稳定器固定前降支（LAD），并将稳定器固定于胸骨牵开器上。使用11号刀片在狭窄段（由缩窄带引起）远端的前降支上做动脉切口，并用虹膜剪扩大切口。
    22. 在左前降支（LAD）中放置合适尺寸的冠状动脉分流管。采用非体外循环旁路技术，使用7-0连续不可吸收缝线将左乳内动脉（LIMA）与LAD进行吻合。松开LIMA上的血管夹，确认止血完全。
  4. 间充质干细胞（MSC）来源外泌体贴片的制备
    1. 从MSCs中成功分离外泌体后，将约3 x 108 将外泌体加入3 mL生理盐水中，并滴加至胶原海绵上。
    2. 将3 mL外泌体悬液于约22 °C室温下放置10分钟。将2块可吸收胶原海绵（每块1.27 cm × 2.54 cm）放入中等大小的培养皿中。
    3. 使用5 mL注射器连接18G针头轻轻混匀外泌体悬液。缓慢将1.5 mL悬液滴加至每块胶原海绵上，静置5分钟使其完全吸收。
  5. 外泌体贴片的放置
    1. 将含有外泌体的海绵倒置放置于心脏的冬眠区域，即前间隔区心外膜在左前降支（LAD）分布的区域。
    2. 轻轻放置两块海绵以覆盖心脏的停搏区域。每块胶原海绵上各覆盖一块3.5 cm × 1.0 cm的聚乙醇酸-乳酸交酯网膜。
    3. 用细的7-0间断缝线将网片缝合至心外膜。
  6. 胸腔引流管置入
    1. 通过胸骨切口下缘附近的独立戳孔置入胸腔引流管。小心地将胸腔引流管置于心脏前表面。
    2. 导管放置到位后，使用3-0缝线以水平褥式缝合法置入荷包缝线，以便在拔除导管时闭合伤口。
    3. 胸管应保留至胸腔完全闭合。
  7. 胸部关闭
    1. 使用不可吸收缝线以八字缝合法对合胸骨。沿切口全长经肌肉途径给予1 mg/kg布比卡因。
      注意：使用缝线而非金属丝，以避免对磁共振成像（MRI）造成干扰。
    2. 使用2-0和3-0可吸收缝线分别以标准方式逐层缝合肌肉和皮肤。
    3. 屏气并进行抽吸，以清除胸腔内的全部气体。密切监测呼吸机上的气道压力，将压力维持在15–22 mmHg之间，操作完成后释放压力。
    4. 待所有空气排出后，结扎荷包缝线以闭合伤口的同时拔除胸腔引流管。将医用粘合剂局部涂抹于胸骨切口以覆盖创面。
  8. 术后护理
    1. 在关闭皮肤切口的同时，逐渐使动物脱离呼吸机。在将动物与麻醉设备断开连接之前，确保动物能够自主呼吸并保护反射功能。
    2. 确认动物能够保护其气道后，拔除气管插管。用浸有抗生素软膏的无菌非粘连敷料覆盖皮肤切口，以尽量减少手术部位感染。
    3. 每15分钟监测一次生命体征，包括心率、呼吸频率和体温，直至动物能够无需辅助维持体位。
    4. 确保动物能够自主抬起并保持头部抬起状态，且无需辅助即可站立之前，不得无人看管。在将动物转运至恢复区前，应通过皮下注射途径给予美洛昔康，剂量为0.2 mg/kg。
    5. 当动物生命体征稳定后，将其转运至恢复室。手术切口处的敷料应保留至术后第3天。若敷料污染，应及时更换。
    6. 术后前5天内持续监测动物的疼痛程度、皮肤切口状况及整体健康状况。若出现突破性疼痛，可根据需要每日给予一次半剂量美洛昔康（0.1 mg/kg）。
    7. 术后最初5天内将动物单独饲养，直至切口愈合，以降低其他动物造成手术部位感染的风险。5天后将动物重新放回群养环境。
    8. 向兽医或相关工作人员报告动物状况的任何并发症或变化（如发热、腹水、体重减轻、食欲减退等）。

3. 采用股动脉入路的冠状动脉造影

  1. 将动物仰卧位固定于手术台上。启动机械通气，频率为每分钟10-15次。调节氧气流速为2-4 L/min，异氟烷浓度为1%，必要时可上调至4%，以维持深度麻醉状态。
  2. 将心电图导联置于动物四肢，以监测心律。评估动物的麻醉深度。当眼球或下颌反射消失时，可认为动物已处于深度麻醉状态。
  3. 使用聚维酮碘溶液清洁胸部和颈部区域，随后用毛巾进行术区铺巾。
  4. 通过外科切开术暴露股动脉，建立股动脉通路，并同时显露股静脉。使用11号刀片在股动脉上做1-2 mm的纵行切口，随后将11 Fr导引鞘管插入血管腔内进行动脉插管。
  5. 建立通路后，送入导管以进行冠状动脉造影，评估LIMA-LAD桥血管的解剖通畅性。

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结果

血运重建后，通过冠状动脉造影评估左前降支（LAD）狭窄程度（大于80%）以及左乳内动脉-左前降支（LIMA-LAD）桥血管的通畅性（图1）。血运重建手术及负载外泌体的胶原贴片植入后4周，进行心脏磁共振成像（MRI），通过以5 µg/kg/min速率输注低剂量多巴酚丁胺，评估静息和应激状态下的心脏收缩和舒张功能。收缩功能通过测定室壁增厚率（收缩末期室壁厚度－舒张末期室壁厚度）进行分析。舒张功能通过测定峰值充盈率与舒张末期容积的比值（PFR/EDV；图2）进行评估。进行延迟对比增强成像以确认LAD供血区域无心肌梗死。若LAD区域存在梗死，可能源于缩窄器导致血栓形成继而引起的动脉闭塞。局部室壁运动无异常表明不存在冬眠表型。

在低剂量多巴酚丁胺输注下，HIB动物组的舒张功能（以PFR/EDV衡量）较对照组显著下降（分别为5.5 ± 0.8与6.9 ± 1.5，p < 0.05）。CABG组相较于HIB组在PFR/EDV方面呈现改善趋势（分别为6.3 ± 0.9与5....

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讨论

本研究首次建立了慢性缺血性心肌的猪模型，结果表明，在外科血管重建术期间使用富含间充质干细胞来源外泌体的胶原贴片进行治疗，可通过靶向线粒体功能恢复，从而在正性肌力刺激下改善舒张期和收缩期功能。既往研究表明，在大型动物的心肌梗死后综合征（HIB）模型中，通过心脏磁共振成像（MRI）测量的舒张期和收缩期功能仍存在明显障碍，仅通过血管重建术可实现轻微改善，但无法完全恢复6,19。尽管左心室射血分数得以保留，心功能障碍依然存在。这些发现准确地模拟了临床上单支血管供血区域慢性缺血性心肌患者在左心室功能保留情况下的真实病程。

在再血管化手术过程中存在若干关键且技术性较强的挑战，尤其是在既往接受过开胸手术的情况下。由于心包此前已被打开且可能存在粘连，经胸骨入路时有发生心血管损伤的风险。胸骨切开术可能因心脏与胸骨位置邻近或存在粘连而造成心脏损伤。使用摆动锯可降低此类风险，研究表明该器械有助于实现顺利的胸骨再次进入。

成功实施冠状...

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披露

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

本工作获得了美国退伍军人事务部生物医学实验室研究与开发局（BLR&D）的VA Merit Review基金#I01 BX000760（RFK）以及美国退伍军人事务部基金#I01 BX004146（TAB）的支持。我们还衷心感谢明尼苏达大学Lillehei心脏研究所提供的支持。本研究内容并不代表美国退伍军人事务部或美国政府的观点。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
5 EthibondEthiconMG46G缝合线
# 40 剪毛刀头Oster078919-016-701清除手术部位毛发
0 VicrylEthiconJ208H缝合线
1 mL 注射器Medtronic/Covidien1188100777给药注射剂
1" 医用胶带MedlineMMM15271Z固定伤口敷料和静脉导管
1000mL 0.9% 氯化钠Baxter2B1324X静脉补液
12 mL 注射器Medtronic/Covidien8881512878给药注射剂
18 号针头BD305185注射剂给药
20 号针头BD305175注射剂给药
20 mL 注射器Medtronic/Covidien8881520657给药注射剂
2-0 VicrylEthiconJ317H缝合线
250 mL 0.9% 生理盐水Baxter UE1322D静脉补液
3 mL 注射器Medtronic/Covidien1180300555给药注射剂
3-0 VicrylEthiconVCP824G缝合线
36” 压力监测管路Smith’s MedicalMX563连接动脉导管 至传感器
4.0 mm 内径气管插管MedlineDYND43040建立冬眠状态下的气道
4-0 Tevdek II 缝线Deknatel7-922用于固定LAD周围缩窄器的缝线
48” 压力监测管路Smith’s MedicalMX564连接动脉导管 至传感器
500mL 0.9% 氯化钠Baxter2B1323Q药物输送，为吹雾器提供雾化液体
6  mL 注射器Medtronic/Covidien1180600777给药注射剂
6.0 mm 内径气管插管Mallinckrodt86049建立再灌注、MRI 和终止实验时的气道
6.5 mm 内径气管插管MedlineDYND43065建立再灌注、MRI 和终止实验时的气道
6” 压力管路Smith’s MedicalMX560采集骨髓
60 mL 注射器Medtronic/Covidien8881560125给药注射剂
7.0 mm 内径气管插管MedlineDYND43070建立再灌注、MRI 和终止实验时的气道
7-0 ProleneEthiconM8702缝合线
Advanced DMEM (1X)ThermoFisher Scientific12491023
酒精消毒棉片MedSourceMS-17402皮肤消毒剂
Amicon Ultra-15 离心过滤装置Millipore SigmaUFC910024
麻醉机DragerFabious Trio维持全身麻醉
麻醉机 + 呼吸机DRE Drager- Fabius TiroDRE0603FT向患者输送氧气和吸入麻醉剂
麻醉监护仪Phillips  IntellivueMP70多参数监护以保障患者安全
动脉导管套件ArrowASK-04510-HF股动脉导管用于血压监测
人工泪液Rugby0536-1086-91润滑眼睛，防止角膜干燥
Bair Hugger3MModel 505患者保温系统
基础手术包MedlineDYNJP1000无菌铺巾和手术台覆盖物
采血管-绿色盖帽Fisher Scientific02-689-7采集微球血样
吹雾器套件Medtronic/Covidien22120清除手术区域以利于血管吻合
BODIPY TR CeramideThermoFisher ScientificD7540
骨髓穿刺针- 25mm 15 号骨内针Vidacare9001-VC-005采集骨髓
骨蜡MedlineETHW31G骨断面止血
Bovie 电凝手柄CovidienE2516止血
布比卡因Pfizer00409-1161-01局部麻醉药
丁丙诺啡 0.3 mg/mLSigma AldrichB9275术前镇痛药，用于可存活手术
细胞刮刀Corning353085
头孢唑啉 1 gPfizer00409-0805-01抗生素
胸腔引流管Covidien8888561043排出胸腔内空气
氯己定-碘复合消毒液（Cloroprep）Becton Dickenson260815外科皮肤准备
CPT 管BD362753从骨髓中分离间充质干细胞（MSC）
Delrin 缩窄器明尼苏达大学（U of MN）定制造成左前降支（LAD）狭窄
DermabondEthiconDNX12皮肤粘合剂
DMEM (1X) 达尔伯克改良伊格尔培养基，含 HEPESThermoFisher Scientific12430062
多巴酚丁胺 12.5 mg/mLPfizer00409-2344-01在第二次微球血样采集期间升高血压和心率
心电图电极片DRE1496监测心律
外泌体去除胎牛血清（FBS）ThermoFisher ScientificA2720801
Falcon 一次性聚苯乙烯刻度移液管，无菌，10 mLFisher Scientific13-675-20
股动脉和颈动脉导引器Cordis- J&J504606P股动脉和颈动脉插管
胎牛血清，热灭活，Gibco FBSThermoFisher Scientific16140089
Flo-thru 1.0BaxterFT-12100用于LIMA与L的吻合
Flo-thru 1.25BaxterFT-12125FT-12125
Flo-thru 1.5BaxterFT-12150FT-12150
Flo-thru 2.0BaxterFT-12200FT-12200
GlutaMAX 补充剂ThermoFisher Scientific35050061
毛发剪刀Oster078566-011-002清除手术部位毛发
Helistat 胶原海绵McKesson570973 1690ZZ用于包埋外泌体的海绵
肝素Pfizer 0409-2720-03抗凝剂
组织学标本瓶Fisher Scientific316-154用于组织样本的福尔马林固定
HyClone 鉴定过的胎牛血清（FBS）CytivaSH30071.03
HypafixBSN Medical4210固定伤口敷料和静脉导管
异氟烷Sigma AldrichCDS019936全身麻醉吸入剂
吹雾器用静脉输液管Carefusion42493E连接至吹雾器的静脉输液装置
Jelco 18 号静脉导管Smiths medical4054用于再灌注、MRI 和终止实验时的静脉通路
利多卡因 2%Pfizer00409-4277-01局部麻醉药/抗心律失常药
LigaclipsEthiconMSC20LIMA 切断术用外科缝合钉
喉镜长刀片DRE12521便于观察气管以便插管
美洛昔康 5 mg/mLBoehringer Ingelheim141-219术后镇痛药
微球泵从股动脉导引器采集血样
单极电凝CovidienValleylab™ FT10止血
Nanosight NS 300Malvern PanalyticalMAN0541-03-EN
NTA 3.1.54 软件Malvern PanalyticalMAN0520-01-EN-00
OPVAC Synergy IITerumo Cardiovascular System401-230心脏定位和稳定装置
氧气瓶 E 型气瓶多种多种若麻醉机无辅助流量计，则用于吹雾器
PBS，pH 7.2ThermoFisher Scientific20012050
青霉素-链霉素-新霉素（PSN）抗生素混合液ThermoFisher Scientific15640055
猪尾导管 145 型，6 法国Boston Scientific08641-41测量左心室压力
压力传感器多种必须适配麻醉监护仪监测直接动脉压
丙泊酚Diprivan269-29诱导麻醉药
罗库溴铵Mylan67457-228-05神经肌肉阻滞剂
缓释丁丙诺啡 10 mg/mLAbbott LabsNADA 141-434术后镇痛药
无菌生理盐水 20 mLFisher Scientific20T700220静脉导管冲洗液
胸骨锯/尸检锯Thermo Fisher812822用于打开胸腔
三通阀Smith MedicalMX5311L2 个用于连接猪尾导管
琥珀胆碱 20 mg/mLPfizer00409-6629-02神经肌肉阻滞剂
吸引 管路MedlineDYND50223
吸引容器MedlineDYNDCL03000
含胸腔牵开器的手术包多种参见包内清单股动脉切开和胸骨正中切开术
外科器械多种参见包内清单股动脉、颈动脉切开术及胸骨切开术
外科弹簧夹Applied MedicalA1801LIMA 切断后夹闭其末端
注射泵Harvard静脉输注多巴酚丁胺
SYTO RNASelect 绿色荧光细胞染料 - DMSO 中 5 mM 溶液Millipore SigmaS32703
Telazol 100 mg/mLFort Dodge01L60030术前镇静剂
Telpha 敷料Covidien2132无菌伤口敷料
计时器计时血样采集
总外泌体分离试剂（来自细胞培养上清）ThermoFisher Scientific4478359
TPP 细胞培养瓶，T75，带 0.22 µm PTFE 滤膜盖ThermoFisher ScientificTP90076
三重抗生素软膏Johnson & Johnson23734伤口表面外用
Vicryl 网状补片EthiconVKML用于心外膜细胞移植的补片
涡旋振荡器混匀微球
赛拉嗪 100 mg/mLVedco468RX术前镇静/镇痛药

参考文献

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