Melhor fixação da suspensão usando jaqueta de rato em experimentos de acupuntura em ratos

Summary

Aqui, apresentamos um método aprimorado de fixação da suspensão usando uma jaqueta de rato para imobilizar efetivamente ratos durante experimentos de acupuntura. Além disso, a estrutura e aplicação desse aparelho de fixação, bem como as instruções e avaliação para sua utilização na eletroacupuntura, são elucidados.

Abstract

Na pesquisa experimental básica em acupuntura, ratos são comumente usados como animais de laboratório. No entanto, é difícil para eles manter uma postura fixa. Durante os procedimentos de eletroacupuntura, a imobilização adequada de ratos é essencial. Vários métodos de fixação de ratos são usados atualmente, incluindo fixação em anestesia, fixação em plataforma alta, fixação de ligação e fixação com revestimento de rato de fabricação própria. No entanto, esses métodos têm suas limitações, que podem afetar a eficiência e a operacionalidade do experimento até certo ponto. Este protocolo introduz um método de suspensão e fixação de ratos usando roupas de ratos. Em primeiro lugar, os ratos são vestidos com jaquetas de ratos que combinam com sua forma corporal, aproveitando sua preferência pela escuridão e escavação. A operação de agulhamento pode então ser realizada após os ratos terem usado roupas de rato. Quando suspensos, os ratos ficam relativamente parados, pois seus membros não podem se mover. Este método de fixação oferece não só benefícios econômicos e fáceis de usar, mas também garante uma fixação estável e confiável dos ratos em uma posição confortavelmente relaxada. Também minimiza efetivamente o consumo de tempo, espaço experimental e recursos de mão de obra. Além disso, esse método permite a exposição da maioria dos acupontos utilizados para acupuntura em ratos. Este artigo concentra-se principalmente na composição do dispositivo, abrangendo uma jaqueta de ratos especialmente projetada, um rack de fixação elevada e suas estruturas de conexão. Adicionalmente, um exemplo ilustrativo será apresentado para demonstrar a aplicação do método de fixação em suspensão à base de roupas de rato em procedimentos de eletroacupuntura em ratos.

Introduction

A acupuntura é uma terapia tradicional caracterizada pelo agulhamento em acupontos específicos ou outras posições para prevenir e tratar doenças. A eletroacupuntura combina agulhas filiformes com estimulação elétrica¹, o que permite um controle preciso sobre a quantidade de estimulação por meio do ajuste de parâmetros relevantes, promovendo a padronização do tratamento com acupuntura². Nos últimos anos, as pesquisas sobre os mecanismos da eletroacupuntura continuaram a se expandir e aprofundar^3,4, o que tem levado a um aumento anual de estudos enfocando os mecanismos da eletroacupuntura⁵.

Na pesquisa básica em eletroacupuntura, os ratos são os animais mais comumente usados. Durante o tratamento de eletroacupuntura, o receptor deve permanecer imóvel para garantir um procedimento suave. Ao contrário dos ensaios clínicos com seres humanos, pequenos animais usados em experimentos com animais não podem seguir comandos conscientemente durante procedimentos de eletroacupuntura de 15 a 30 minutos de duração. Isso apresenta aos pesquisadores um desafio primário de alcançar uma fixação estável e confiável. A fixação inadequada pode levar a emoções negativas, como ansiedade, depressão e medo^{em animais6}, o que não só aumenta o risco de lesões em ratos e a chance de ser mordido para o pessoal experimental, mas também afeta a estabilidade e a persuasão dos resultados da pesquisa.

Em estudos anteriores, os pesquisadores frequentemente utilizaram fixação anestésica⁷, fixação com plataforma alta⁸, fixação com ligação ^6,9 ou fixação com jaleco de rato¹⁰ antes de operações de acupuntura ou eletroacupuntura. No entanto, dados os efeitos da anestesia sobre o organismo¹¹ e a função cerebral¹², e considerando que a acupuntura é realizada em pacientes conscientes em casos clínicos, a anestesia pode impactar os resultados da pesquisa até certo ponto. Portanto, em comparação com a fixação anestésica, a fixação confortável de ratos em estado de vigília é uma opção melhor.

No entanto, no estado não anestesiado, vários métodos de fixação também possuem suas respectivas limitações, incluindo a exposição restrita do acuponto devido à cobertura do revestimento do rato em ratos 10, a necessidade de pelo menos dois indivíduos para realizar a operação¹³, o tamanho do fixador não ajustável¹⁴ ou o estado estressado de ratos em posição forçada⁶. Para resolver essas questões técnicas, projetamos uma jaqueta de rato e um rack de fixação adequado para manipulação de acupuntura na maioria das partes do corpo do rato. Isso pode ajudar os pesquisadores a realizar procedimentos de acupuntura com ratos de forma eficiente.

A justificativa para esse protocolo é a seguinte: em primeiro lugar, o capacete fechado na jaqueta do rato aproveita a inclinação natural dos ratos para a escuridão e a escavação, restringindo assim seu leque de atividades. Em segundo lugar, as cordas de ligação próximas às articulações dos membros dos ratos proporcionam contenção física à compressão, impondo certas limitações aos seus movimentos. No entanto, os ratos ainda são capazes de saltar e se mover horizontalmente, mesmo usando a jaqueta. Por fim, como os ratos não podem tocar o solo sem um ponto de força fixo quando suspensos, adicionamos um dispositivo de fixação da suspensão à jaqueta do rato, restringindo ainda mais seus movimentos e garantindo a retenção da agulha. A composição do dispositivo de fixação é mostrada na Figura 1.

Figura 1: Diagrama esquemático da jaqueta do rato e fixação da suspensão. (A) A aparência geral da jaqueta de rato em uma vista plana. (B) Visão tridimensional da jaqueta do rato. (C) Jaqueta de rato especialmente adaptada com uma incisão perto dos acupontos na cabeça e cintura traseira. (D) Ilustração de múltiplos ratos simultaneamente suspensos no rack elevado. 1: Visão geral da tela; 2: Saída do membro torácico; 3: Saída dos membros posteriores; 4: Corda de amarração; 5: Cavidade formada após sutura; 6: Incisão para exposição de acupontos cefálicos; 7: Incisão para exposição dos acupontos das costas e cintura. 8: Posição de sutura. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Protocol

Todos os procedimentos realizados nos ratos deste estudo aderiram ao National Standard for Laboratory Animal Welfare and Ethics Review Guidelines (2018) adotado oficialmente pela República Popular da China e ao Guide for the Care and Use of Laboratory Animals da National Academies Press15. Esse protocolo é composto por três etapas principais. Em primeiro lugar, as jaquetas de ratos são feitas sob medida e montadas com base nas formas individuais do corpo de ratos com diferentes pesos. Em segui…

Representative Results

Neste experimento, um total de 12 ratos foram selecionados para o tratamento com eletroacupuntura, e suas reações sob o método de fixação foram observadas (como mostra a Tabela 2). Entre os 12 ratos, apenas 1 apresentou intensa luta durante o período de retenção da agulha de eletroacupuntura de 15 min. Como resultado de seus movimentos vigorosos, a agulha saiu no meio do caminho, representando 8,33% do total de ratos. Esse resultado sugere que o método de fixação utilizado geralmente demonstra…

Discussion

A eletroacupuntura tem demonstrado bons efeitos terapêuticos em várias doenças, como comprometimento cognitivo 16,17^, lesão miocárdica¹⁸ e dor inflamatória¹⁹. Para entender seu mecanismo de ação, experimentos com animais principalmente usando ratos foram realizados. A fixação dos animais durante os procedimentos é fundamental para resultados precisos. Embora muitos estudos tenham administrado eletroacupun…

Materials

75% alcohol	Shandong Lircon medical technology co., ltd	2002-0059	Disinfection
acupuncture needles	Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd.		needling
Adult Sprague-Dawley (SD) rats	Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd.	SCXK 2020-0001	The recipient  subjected to fixation
an elevated fixation rack	Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research  Co., ltd	/	Fix rats
Hans electronic acupuncture apparatus	Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd.	HANS-200A	electroacupuncture
Medical cotton ball	Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd.	20172142357	Disinfection
Pet electric clipper	Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory	/	Shave the hair of rats
Tweezers	Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd		Pinch cotton balls