Summary
O modelo de camundongo Thyroid Hormone Action Indicator foi desenvolvido para permitir a quantificação tecido-específica da ação local do hormônio tireoidiano usando sua maquinaria regulatória endógena. Recentemente, tem sido demonstrado que o modelo é adequado para caracterizar substâncias químicas desreguladoras do sistema endócrino que interagem com a economia dos hormônios tireoidianos, tanto por metodologias ex vivo quanto in vivo .
Abstract
Os hormônios tireoidianos (HT) desempenham um papel crítico no metabolismo celular e na função tecidual. A economia de HT é suscetível a produtos químicos desreguladores endócrinos (EDCs) que podem perturbar a produção ou ação hormonal. Muitos poluentes ambientais são EDCs, representando uma ameaça emergente tanto para a saúde humana quanto para a produção agrícola. Isso levou a um aumento da demanda por sistemas de teste adequados para examinar os efeitos de potenciais EDCs. No entanto, as metodologias atuais enfrentam desafios. A maioria dos sistemas de teste utiliza marcadores endógenos regulados por múltiplos processos regulatórios, muitas vezes complexos, dificultando a distinção entre efeitos diretos e indiretos. Além disso, os sistemas de teste in vitro carecem da complexidade fisiológica do metabolismo e da farmacocinética do EDC em mamíferos. Além disso, a exposição a EDCs ambientais geralmente envolve uma mistura de múltiplos compostos, incluindo metabólitos gerados in vivo , de modo que a possibilidade de interações não pode ser ignorada. Essa complexidade dificulta a caracterização do EDC. O camundongo Thyroid Hormone Action Indicator (THAI) é um modelo transgênico que carrega um sistema repórter de luciferase responsivo ao HT, permitindo a avaliação da ação tecido-específica do HT. Pode-se avaliar os efeitos tecido-específicos de substâncias químicas sobre a ação local do HT quantificando a expressão da luciferase em amostras de tecido. Além disso, com imagens in vivo , o modelo de camundongo THAI permite estudos longitudinais sobre os efeitos de potenciais EDCs em animais vivos. Essa abordagem fornece uma ferramenta poderosa para testar exposição a longo prazo, estruturas complexas de tratamento ou abstinência, pois permite a avaliação de mudanças na ação local do HT ao longo do tempo no mesmo animal. Este relato descreve o processo de medidas de imagem in vivo em camundongos THAI. O protocolo discutido aqui se concentra no desenvolvimento e na imagem de camundongos hiper e hipotireoideos, que podem servir como controles. Os pesquisadores podem adaptar ou expandir os tratamentos apresentados para atender às suas necessidades específicas, oferecendo uma abordagem fundamental para futuras investigações.
Introduction
A sinalização do hormônio tireoidiano (HT) é um regulador fundamental do metabolismo celular, essencial para o desenvolvimento normal e ótima função tecidual na idade adulta1. Dentro dos tecidos, a ação dos HT é finamente controlada por uma complexa maquinaria molecular, permitindo a manutenção tecido-específica dos níveis locais de HT. Essa autonomia dos diferentes tecidos em relação aos níveis de HT circulantes é de grande importância 2,3,4.
Numerosos produtos químicos têm o potencial de interromper as funções endócrinas e são encontrados no ambiente como poluentes. É uma preocupação crescente que essas moléculas possam entrar na cadeia alimentar por meio de águas residuárias e da produção agrícola, impactando a saúde do gado e do ser humano 5,6,7.
Um dos desafios significativos na abordagem dessa questão é o grande número de compostos envolvidos, incluindo moléculas autorizadas e já proibidas, mas ainda persistentemente presentes. Nos últimos anos, esforços substanciais têm sido feitos para desenvolver sistemas de teste para triagem e identificação do potencial disruptivo de vários produtos químicos 8,9,10,11. Embora esses métodos se destaquem na triagem de alto rendimento de milhares de compostos e na identificação de ameaças potenciais, uma análise detalhada dos efeitos in vivo específicos dessas moléculas é essencial para estabelecer os perigos da exposição humana. Assim, uma abordagem multifacetada é necessária ao estudar e caracterizar produtos químicos desreguladores endócrinos (EDCs).
No contexto da regulação do HT, a compreensão das consequências tecido-específicas da exposição ao EDC requer a quantificação da ação local do HT. Embora vários modelos in vivo tenham sido desenvolvidos para esse fim, a maioria utiliza marcadores endógenos como medida de saída. Apesar de fisiológicos, esses marcadores estão sujeitos a inúmeros mecanismos regulatórios, diretos e indiretos, tornando sua interpretação mais desafiadora. Portanto, caracterizar os efeitos da EDC na regulação dos HT em nível tecidual permanece um desafio significativo12,13.
Para enfrentar os desafios de medir a sinalização de HT tecido-específica, o modelo de camundongo Thyroid Hormone Action Indicator (THAI) foi recentemente desenvolvido. Este modelo permite quantificar especificamente as mudanças na ação local dos HT em condições endógenas. Um transgene da luciferase foi introduzido no genoma de camundongos, que é altamente sensível à regulação pela ação do HT14. Esse modelo tem demonstrado efetividade em responder a diversas questões de pesquisa que requerem a quantificação de alterações na sinalização tecidual local dos HT14,15,16,17,18.
O reconhecimento de um uso potencial do modelo THAI é caracterizar os efeitos tecido-específicos dos EDCs na sinalização de HT. Recentemente, o modelo foi empregado com sucesso para investigar os efeitos tecido-específicos do tetrabromobisfenol A e do diclazuril na sinalização de HT15. Aqui, protocolos basais são apresentados para a utilização de técnicas de imagem in vivo no modelo THAI como um sistema de teste para caracterizar EDCs que interrompem a função do HT. Este método aproveita a natureza bioluminescente da reação luciferina-luciferase. Essencialmente, a enzima luciferase transgenicamente expressa catalisa a oxidação da luciferina administrada, gerando luz luminescente proporcional à quantidade de luciferase no tecido (Figura 1). Consequentemente, a resposta biológica medida é a atividade da luciferase, que foi validada como uma medida adequada da ação local da HT14. Enquanto o modelo THAI é aplicável para quantificar a ação dos HT em praticamente todos os tecidos, os exames de imagem in vivo concentram-se principalmente na ação dos HT no intestino delgado (imagem ventral) e no tecido adiposo marrom interescapular (BAT, imagem dorsal)14.
Uma vantagem significativa da técnica de imagem in vivo é que ela elimina a necessidade de sacrificar animais para medições. Isso permite que os pesquisadores projetem experimentos longitudinais e de acompanhamento como estudos autocontrolados, reduzindo o viés entre os sujeitos e o número de animais utilizados. Esse aspecto é particularmente crucial na caracterização do EDC, e a resistência e a versatilidade do método para esse fim já foram demonstradasanteriormente 14,15.
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Protocol
O presente protocolo foi revisado e aprovado pelo Comitê de Bem-Estar Animal do Instituto de Medicina Experimental (PE/EA/1490-7/2017, PE/EA/106-2/2021). Os dados apresentados são de FVB/Ant background14, camundongos THAI machos de 3 meses de idade (n = 3-6/grupo). FVB/Formiga fundo THAI animais tendem a ter manchas altamente pigmentadas em sua pele que podem distorcer as medidas. Assim, procure manchas pigmentadas na pele da área da imagem após a remoção dos pelos. Os animais não necessitam de condições especiais de alojamento, a menos que a experiência o exija especificamente (por exemplo, uma dieta especial).
1. Tratamento do hipertireoidismo
NOTA: Um protocolo geral para induzir hipertireoidismo em camundongos é fornecido aqui. O guia ATA19 oferece explicações detalhadas sobre os antecedentes dos métodos com as alternativas mencionadas.
- Dissolver T3 (3,5,3'-triiodotironina, ver Tabela de Materiais) em NaOH 40 mM para criar uma solução-mãe com uma concentração entre 5-10 mg/mL.
- Diluir a solução-mãe com soro fisiológico até uma concentração final de 0,1 μg/μL.
- Injetar a solução diluída de T3 por via intraperitoneal (i.p.) em animais acordados a um volume de 10 μL por grama de peso corporal (bwg). Após 24 h, os animais serão considerados hipertireoideos.
NOTA: O tratamento T3 pode ser substituído por qualquer outro tipo de tratamento. O tratamento não afeta o protocolo de imagem in vivo .
2. Tratamento do hipotireoidismo
NOTA: Aqui, apenas um protocolo geral para induzir hipotireoidismo em camundongos é fornecido. O guia ATA19 descreve explicações detalhadas sobre os antecedentes dos métodos com as alternativas mencionadas.
- Mude a dieta para uma dieta de ração isenta de iodo e adicione KClO4 e metimazol à água potável (0,01 % metimazol, 0,05 % KClO4) (ver Tabela de Materiais).
- Substitua a solução de beber regularmente (a cada 2-3 dias) por uma solução de beber fresca porque o metimazol é sensível à luz e degrada-se rapidamente.
- Mantenha o regime de tratamento por pelo menos 2 semanas, não mais do que 4 semanas. Os animais perderão peso e apresentarão desconforto. Se os animais mal se movimentam, perderam grande parte dos pelos ou mal estão conscientes, use um ponto final humano e termine-os por qualquer método (seguindo protocolos aprovados institucionalmente).
- Continuar o tratamento do hipotireoidismo quando combinado com outros tratamentos para prevenir a recuperação potencial do hipotireoidismo.
3. Imagem in vivo
- Inicie o software compatível com o sistema de imagem in vivo (consulte a Tabela de Materiais).
- Faça login e aguarde o carregamento do painel "Assistente de geração de imagens". É um painel menor na parte inferior esquerda da janela.
- No "Assistente de imagem", inicie o resfriamento da câmera clicando em Inicializar no painel "Assistente de imagem". Isso faz com que o instrumento execute um protocolo de instalação, aguarde até que ele seja concluído. O "painel do Assistente de Imagem" fica azul e uma luz verde se acende no painel quando a temperatura da câmera estiver baixa o suficiente e o instrumento estiver pronto.
- Ajuste a temperatura da almofada de aquecimento para 30-37 °C para manter os animais medidos aquecidos.
NOTA: Continue com o protocolo enquanto aguarda que a temperatura da câmera seja ideal. - Não mantenha ou trate animais perto do instrumento. Evite quantidades excessivas de pelos circulando no ar ao redor do instrumento.
- Anestesiar 1-3 animais com injeção i.p. de ketamina-xilazina (cetamina 50 mg/kg de peso corporal, xilazina 10 mg/kg de peso corporal, ver Tabela de Materiais). Alternativamente, se um sistema anestésico com isoflurano estiver instalado, siga protocolos aprovados institucionalmente para usar anestesia com isoflurano, substituindo a mistura de ketamina e xilazina.
NOTA: Camundongos com hipotireoidismo são mais sensíveis à ketamina-xilazina; usar meia dose. - Use gel de proteção ocular durante a anestesia.
- Verifique o reflexo do pedal apertando as almofadas dos pés. Nenhum reflexo pedioso confirma o estado de anestesia no plano cirúrgico.
- Depois que a anestesia fizer efeito, remova os pelos das partes do corpo fotografadas usando o método de remoção de pelos mais adequado (depilador, barbear, creme, etc.). Certifique-se de que nenhum pelo seja deixado nas partes do corpo fotografadas para evitar a dispersão da luz luminescente.
- Dissolver a Na-luciferina (ver Tabela de Materiais) em 1x solução salina tamponada com fosfato (PBS) a uma concentração de 15 mg/mL. Luciferina é sensível à luz; Evite a exposição direta à luz. Armazenar a solução em tubos de âmbar ou envolvê-lo em papel alumínio.
- Tratar animais barbeados com solução de luciferina 10 μL/bwg i.p.
- Coloque os animais no instrumento com o ponto central da câmera marcado como '+' na almofada. Garanta o posicionamento adequado verificando as linhas de grade e confirmando com uma única captura de 'Foto' se não tiver certeza.
- Aguarde 15 min após a administração do substrato antes de fazer a primeira medição. Durante esse tempo, defina o tempo de imagem no painel "Assistente de imagem" para 3 min para luminescência e marque as caixas para Foto e Luminescência. A 'foto' é necessária para coincidir com a luminescência para identificar a fonte do sinal medido.
NOTA: 15 min são necessários para a absorção ideal do substrato e distribuição do tecido. O sinal luminescente platôs 15-20 min após a administração de luciferina. O sinal começa a diminuir lentamente após o platô. - Faça a primeira medição clicando em Medir no painel "Assistente de imagem".
- Se ambas as imagens ventral e dorsal forem realizadas, reorganize os animais para que a segunda parte do corpo seja fotografada imediatamente após a conclusão da primeira.
- Após a realização das imagens, devolva os animais às suas gaiolas e continue o experimento com o próximo conjunto de animais.
- Permita que os animais se recuperem, o que normalmente leva 1-2 h no máximo. Coloque um tubo cheio de água morna perto dos animais para facilitar a recuperação e monitore sinais vitais, como respiração e perfusão.
- Decida o destino dos animais medidos. Nos dados apresentados neste artigo, os animais medidos foram eutanasiados seguindo protocolos aprovados institucionalmente para medições ex vivo . No entanto, isso não é necessário. Considere se a eutanásia ou as experiências de acompanhamento são éticas.
4. Análise dos dados
- Abra o arquivo "ClickInfo" no software. Um painel chamado "Tool Palette" para análise e edição de imagens será aberto no lado direito da janela.
- Converter escala em brilho no canto superior esquerdo da imagem.
- Clique em "Ajuste de imagem".
- Decida sobre o binning ideal e a escala de cores das imagens. Faça com que todas as imagens utilizem as mesmas configurações.
- Clique em "Ferramentas de ROI" na "Paleta de ferramentas".
- Selecione as áreas de interesse clicando em "Colocar ROI" nas "Ferramentas de ROI". Usar ROIs de mesmo tamanho ou ROIs de tamanhos diferentes também pode ser significativo, dependendo do desenho experimental.
- Clique em "Medir ROIs". Uma nova janela será aberta com os dados dos ROIs colocados. Exporte os dados com o comando ctr + c-ctrl + v Windows para um software organizador ou estatístico de sua escolha.
- Os dados podem ser exportados como fluxo total ou radiância média. Escolha qual variável é a mais relevante no cenário experimental atual.
- Continuar a análise dos dados de acordo com o delineamento experimental. Recomenda-se o cálculo individual dos valores (fundo tratado) como "efeito medido em um animal".
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Representative Results
Geralmente, a radiância medida varia de magnitudes de 105 a10 10 p/s/cm2/sr. No entanto, os valores exatos podem variar entre animais dentro da mesma imagem e entre imagens diferentes. Portanto, comparar dados brutos pode ser enganoso. É crucial estabelecer sinais de controle e de fundo em todos os experimentos, tornando os projetos autocontrolados altamente recomendados.
A Figura 2 apresenta imagens representativas e dados das incidências ventral e dorsal em um arranjo experimental envolvendo camundongos hipo, eu e hipertireoideo. Os sinais mais baixos são esperados em camundongos com hipotireoidismo, muitas vezes caindo abaixo do limite inferior da escala de cores.
Áreas sem pelos, como coxins para os pés, cauda e nariz, exibem sinais basais relativamente altos. É importante ressaltar que o sinal da luciferase é influenciado pelo status do hormônio tireoidiano (HT), como observado na Figura 2. Curiosamente, a Figura 3 demonstra que a ação dos HT é significativamente aumentada no tecido adiposo marrom (BAT) de camundongos THAI estressados pelo frio14. No entanto, este tratamento não afeta o sinal de luciferase nos coxins e cauda. Essa disparidade ressalta o potencial para ações marcadamente distintas dos HT em tecidos de um mesmo organismo. A exposição ao frio desencadeia a ativação do BAT, necessitando de upregulation localizado da ativação do HT mediado pela deiodinase tipo 220,21. Após 24 h de exposição ao frio, os níveis de HT circulantes permanecem inalterados, resultando em nenhuma mudança de sinal dependente de HT nos coxins plantares e na cauda. Em contraste, no cenário apresentado na Figura 2, onde níveis sanguíneos elevados de HT aumentam correspondentemente a ação dos HT no coxim plantar, cauda e BAT.
Tanto a Figura 2 quanto a Figura 3 revelam sinais robustos na região testicular. Isso é atribuído à alta expressão basal independente de HT do transgene luciferase nos testículos, uma característica do modelo THAI. Neste órgão, o sinal da luciferase permanece inalterado por alterações nos níveis de HT circulantes.
Como mencionado anteriormente, os tratamentos de hipo e hipertireoidismo podem ser substituídos por outras intervenções, como o teste de compostos desreguladores endócrinos (EDCs). A Figura 4 mostra as imagens de MTD em um experimento de seguimento de três semanas envolvendo diclazuril, um medicamento veterinário com potencial EDC16. Os sinais entre os pontos de tempo são facilmente distinguíveis, e o método captura efetivamente o acúmulo e a depuração do diclazuril.
Figura 1: Conceito e princípios de funcionamento do Construto THAI. (A) O construto THAI Recombinante. Essa figura é adaptada de Mohácsik et al.14. (B) Ilustração esquemática da oxidação da luciferina catalisada pela luciferase. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: Imagens dorsais e ventrais representativas de camundongos hipo-, eu- e hipertireoidiano THAI, juntamente com um diagrama de intensidade da atividade da luciferase. (A) Imagens representativas de camundongos THAI hipo-, eu- e hipertireoide. (B) Quantificação de sinais em (A). Fóton/s médios ± EPM (n = 3). *P < 0,05; P < 0,001, determinado por ANOVA one-way, seguido pelo teste post hoc de Newman-Keuls. Essa figura é adaptada de Mohácsik et al.14. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: Sinais da pata, cauda e MTD antes e após o estresse pelo frio, juntamente com o diagrama de intensidade de luz da atividade da luciferase. (A) Imagens dorsais representativas de camundongos controle e THAI estressados pelo frio. (B) Quantificação de sinais em (A). Fóton/s médios ± EPM (n = 4). **P < 0,001, determinado pelo teste t de Student. Essa figura é adaptada de Mohácsik et al.14. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: Imagens MTD representativas de um estudo de seguimento com diclazuril de três semanas, acompanhado por um diagrama de intensidade luminosa da atividade da luciferase. Camundongos THAI foram tratados por via oral por 2 semanas com 10 mg/kgb/dia de diclazuril como suspensão salina, seguidos por uma semana de recuperação. (A) Quantificação dos sinais bioluminescentes MTD em (B) antes, durante e após o tratamento com diclazuril. (B) Imagens dorsais representativas de camundongos THAI antes, durante e após o tratamento com diclazuril. n = 4-6 camundongos/grupo; a figura exibe um Gráfico da Caixa de Tukey de fóton/s, α = 0,05; : p < 0,001. Esse número é adaptado de Sinko et al.15. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
As ameaças representadas pelos produtos químicos desreguladores endócrinos (EDCs) para a saúde humana são bem reconhecidas; no entanto, a investigação sobre os EDC enfrenta desafios formidáveis. Esses desafios são, em parte, consequência da complexidade do sistema endócrino. Muitos EDCs foram identificados como perturbadores simultâneos de múltiplos sistemas endócrinos22. Além disso, no contexto da economia do hormônio tireoidiano (HT), existe uma camada adicional de complexidade devido a diferenças tecido-específicas na regulação da ação do HT. Essa complexidade fornece uma nova perspectiva sobre a expansão da avaliação da sinalização de HT caracterizando a ação de HT em vários tecidos. O desafio é ainda exacerbado pelo metabolismo dos compostos, que podem aumentar ou atenuar seus efeitos sobre o sistema endócrino. É importante ressaltar que os métodos atuais de triagem para identificação de compostos estão bem estabelecidos e funcionam com altodesempenho8,11. No entanto, ainda há uma carência de sistemas de teste para caracterizar os efeitos tecido-específicos e consequências dos compostos identificados.
O modelo de camundongo THAI foi desenvolvido para enfrentar os desafios de caracterizar a economia de hormônios tireoidianos tecido-específicos. Seu potencial tem sido demonstrado em diversas circunstâncias 14,15,16,18. O modelo THAI oferece uma vantagem na caracterização de substâncias químicas que interrompem os hormônios tireoidianos. É importante notar que o modelo não se destina à triagem rápida de compostos, mas para fornecer insights sobre mecanismos de interrupção em um modelo de mamíferos in vivo.
Neste artigo, um protocolo é apresentado descrevendo como o camundongo THAI pode ser usado para estudos de imagem in vivo . Este método permite testar tratamentos que afetam o eixo Hipotálamo-Hipófise-Tireóide (HPT) e/ou ação dos hormônios tireoidianos em animais. O protocolo suporta estudos autocontrolados e desenhos de seguimento. Além disso, o protocolo pode ser utilizado para gerar animais controles com vários estados hormonais tireoidianos, servindo como referência em cenários experimentais. Os tratamentos apresentados para hipo e hipertireoidismo podem ser substituídos, estendidos e combinados com outros tratamentos, conforme necessário. Essa versatilidade é valiosa para avaliar a economia dos hormônios tireoidianos teciduais, especialmente para a caracterização de desreguladores endócrinos químicos (EDC).
Os sinais de imagem in vivo no lado dorsal provêm do tecido adiposo marrom (BAT), enquanto os sinais ventrais originam-se do intestino delgado14. Assim, o método caracteriza primariamente esses tecidos, e a mensuração de outras partes do corpo pode ser um desafio. A superação dessas limitações técnicas por meio da exposição a órgãos requer uma consideração cuidadosa das implicações éticas e técnicas.
A combinação de imagens in vivo com estudos ex vivo no modelo de IATH permite avaliar a sinalização dos hormônios tireoidianos em vários tecidos e regiões cerebrais14. Por exemplo, a qPCR pode estender e especificar os efeitos observados em imagens in vivo . No entanto, isso sacrifica o acompanhamento e os desenhos autocontrolados, de modo que custos e benefícios devem ser avaliados. A combinação de imagens in vivo com medições ex vivo é recomendada para uma investigação abrangente.
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Disclosures
Os autores não têm nada a revelar.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado pelo Projeto nº. O RRF-2.3.1-21-2022-00011, intitulado Laboratório Nacional de Neurociência Translacional foi implementado com o apoio fornecido pelo Mecanismo de Recuperação e Resiliência da União Europeia no âmbito do Programa Széchenyi Plan Plus.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3,5,3'-triiodothyronine (T3) | Merck | T2877 | |
| Animals, mice | THAI mouse | ||
| Eye protection gel | Oculotect | 1000 IU/g | |
| Falcon tube | Thermo Fisher Scientific | 50 mL volume | |
| Iodine-free chow diet | Research Diets | custom | |
| IVIS Lumina II in vivo imaging system | Perkin Elmer | - | |
| Ketamine | Vetcentre | E1857 | |
| Living Image software 4.5 | Perkin Elmer | - | provided with the instrument |
| Measuring cylinder | 250 mL | ||
| methimazole | Merck | M8506 | |
| Microfuge tubes | Eppendorf | For diluting treatment materials | |
| NaClO4 | Merck | 71852 | |
| Na-luciferin, substrate | Goldbio | 103404-75-7 | |
| NaOH | Merck | 101052833 | |
| Phoshphate buffer saline | Chem Cruz | sc-362302 | |
| Pipette | Gilson | For diluting treatment materials | |
| Pipette tips | Axygen | For diluting treatment materials | |
| Shaving cream/epilator/shaver | Personal preference | ||
| Syringe | B Braun | 1 mL volume | |
| Syringe needle | B Braun | 0.3 x 12 mm | |
| Xylazine | Vetcentre | E1852 |
References
- Larsen, P. R., Davies, T. F., Hay, I. D. Williams Textbook of Endocrinology. Wilson, J. D., Foster, D. W., Kronenberg, H. M., Larsen, P. R. , W.B. Saunders Co. 389-515 (1998).
- Gereben, B., et al. Cellular and molecular basis of deiodinase-regulated thyroid hormone signaling. Endocr Rev. 29 (7), 898-938 (2008).
- Fekete, C., Lechan, R. M. Central regulation of hypothalamic-pituitary-thyroid axis under physiological and pathophysiological conditions. Endocr Rev. 35 (2), 159-194 (2014).
- Bianco, A. C., et al. Paradigms of Dynamic Control of Thyroid Hormone Signaling. Endocr Rev. 40 (4), 1000-1047 (2019).
- Zoeller, R. T. Endocrine disrupting chemicals and thyroid hormone action. Adv Pharmacol. 92, 401-417 (2021).
- Guarnotta, V., Amodei, R., Frasca, F., Aversa, A., Giordano, C. Impact of chemical endocrine disruptors and hormone modulators on the endocrine system. Int J Mol Sci. 23 (10), 5710 (2022).
- La Merrill, M. A., et al. Consensus on the key characteristics of endocrine-disrupting chemicals as a basis for hazard identification. Nat Rev Endocrinol. 16 (1), 45-57 (2020).
- Fini, J. B., et al. An in vivo multiwell-based fluorescent screen for monitoring vertebrate thyroid hormone disruption. Environ Sci Technol. 41 (16), 5908-5914 (2007).
- Mughal, B. B., Fini, J. B., Demeneix, B. A. Thyroid-disrupting chemicals and brain development: an update. Endocr Connect. 7 (4), 160-186 (2018).
- Dong, M., Li, Y., Zhu, M., Li, J., Qin, Z. Tetrabromobisphenol a disturbs brain development in both thyroid hormone-dependent and -independent manners in xenopus laevis. Molecules. 27 (1), 249 (2021).
- Beck, K. R., Sommer, T. J., Schuster, D., Odermatt, A. Evaluation of tetrabromobisphenol A effects on human glucocorticoid and androgen receptors: A comparison of results from human- with yeast-based in vitro assays. Toxicology. 370, 70-77 (2016).
- Li, J., Li, Y., Zhu, M., Song, S., Qin, Z. A multiwell-based assay for screening thyroid hormone signaling disruptors using thibz expression as a sensitive endpoint in xenopus laevis. Molecules. 27 (3), 798 (2022).
- Myosho, T., et al. Preself-feeding medaka fry provides a suitable screening system for in vivo assessment of thyroid hormone-disrupting potential. Environ Sci Technol. 56 (10), 6479-6490 (2022).
- Mohacsik, P., et al. A Transgenic mouse model for detection of tissue-specific thyroid hormone action. Endocrinology. 159 (2), 1159-1171 (2018).
- Sinko, R., et al. Tetrabromobisphenol A and diclazuril evoke tissue-specific changes of thyroid hormone signaling in male thyroid hormone action indicator Mice. Int J Mol Sci. 23 (23), 14782 (2022).
- Sinko, R., et al. Different hypothalamic mechanisms control decreased circulating thyroid hormone levels in infection and fasting-induced non-thyroidal illness syndrome in male thyroid hormone action indicator mice. Thyroid. 33 (1), 109-118 (2023).
- Salas-Lucia, F., et al. Axonal T3 uptake and transport can trigger thyroid hormone signaling in the brain. Elife. 12, 82683 (2023).
- Liu, S., et al. Triiodothyronine (T3) promotes brown fat hyperplasia via thyroid hormone receptor alpha mediated adipocyte progenitor cell proliferation. Nat Commun. 13 (1), 3394 (2022).
- Bianco, A. C., et al. American thyroid association guide to investigating thyroid hormone economy and action in rodent and cell models. Thyroid. 24 (1), 88-168 (2014).
- Silva, J. E., Larsen, P. R. Adrenergic activation of triiodothyronine production in brown adipose tissue. Nature. 305 (5936), 712-713 (1983).
- Bianco, A. C., Silva, J. E. Intracellular conversion of thyroxine to triiodothyronine is required for the optimal thermogenic function of brown adipose tissue. J Clin Invest. 79 (1), 295-300 (1987).
- Caporale, N., et al. From cohorts to molecules: Adverse impacts of endocrine disrupting mixtures. Science. 375 (6582), 8244 (2022).
