Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल इलुमिना आधारित 16S आरआरएनए जीन अनुक्रमण का उपयोग करके आंतों के वनस्पतियों का विश्लेषण करने की विधि का वर्णन करता है और हर्बल काढ़े की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए एक रूपरेखा प्रदान करता है।
Abstract
चूहों में गैस्ट्र्रिटिस और आंतों के वनस्पतियों पर डेसमोडियम कॉडाटम के प्रभावों का प्रारंभिक रूप से पता लगाने के लिए, क्लासिक सोडियम सैलिसिलेट विधि का उपयोग करके एक पुरानी गैस्ट्र्रिटिस चूहा मॉडल स्थापित किया गया था। अठारह एसपीएफ़ चूहों को तीन समूहों में विभाजित किया गया था: नियंत्रण समूह (समूह सी), मॉडल समूह (समूह एम), और उपचार समूह (समूह टी)। गैस्ट्रिक दीवार के पैथोलॉजिकल सेक्शन प्रत्येक समूह में चूहों से लिए गए थे। इसके अलावा, प्रत्येक समूह में चूहों के सीरम में गैस्ट्रिन और मैलोंडायल्डिहाइड की सांद्रता एलिसा द्वारा निर्धारित की गई थी। इसके अतिरिक्त, गैस्ट्र्रिटिस के साथ चूहों की आंतों के वनस्पतियों पर डी. कॉडाटम के प्रभावों का पता तीन समूहों में आंत जीवाणु समुदायों की विस्तृत तुलना के माध्यम से लगाया गया था, जिसमें इलुमिना-आधारित 16S rRNA जीन अनुक्रमण को नियोजित किया गया था। परिणामों ने संकेत दिया कि डी. कॉडाटम काढ़ा मैलोंडायल्डिहाइड सामग्री को कम कर सकता है और गैस्ट्रिन सामग्री को बढ़ा सकता है। इसके अलावा, डी. कॉडाटम काढ़ा आंतों के वनस्पतियों की विविधता और प्रचुरता को बढ़ाने के लिए पाया गया था, आंतों के वनस्पतियों को विनियमित और बहाल करके गैस्ट्र्रिटिस के उपचार पर सकारात्मक प्रभाव डालता है।
Introduction
क्रोनिक गैस्ट्र्रिटिस (सीजी), सबसे आम नैदानिक बीमारियों में से एक, गैस्ट्रिक म्यूकोसा उपकला में पुरानी और लगातार भड़काऊ परिवर्तनों की विशेषता है, जो अक्सर और बार-बार विभिन्न रोगजनककारकों द्वारा हमला किया जाता है। सीजी की घटना दर सभी प्रकार के पेट रोगों में पहले स्थान पर है, गैस्ट्रोएंटरोलॉजी विभाग में आउट पेशेंट सेवा दर के 40% से 60% के लिए लेखांकन। इसके अलावा, घटना दर आम तौर पर उम्र के साथ बढ़ जाती है, खासकर उन व्यक्तियों में जो मध्यम आयु वर्ग के हैं और3 वर्ष से अधिक उम्र के हैं। निस्संदेह, सीजी लोगों के जीवन की गुणवत्ता को काफी कम कर देता है, नए चिकित्सीय एजेंटों की खोज करने की महत्वपूर्ण आवश्यकता पर बल देता है।
कई अध्ययनों से पता चला है कि सीजी की घटना और विकास गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन के स्राव से जुड़ा हुआ है, जैसे गैस्ट्रिन (जीएएस)4,5। जीएएस, पाचन तंत्र में एक आम गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल पेप्टाइड हार्मोन, कोशिकाओं को ईोसिनोफिल से हिस्टामाइन की रिहाई को बढ़ावा देकर गैस्ट्रिक एसिड का स्राव करने के लिए उत्तेजित करता है। इसके अतिरिक्त, यह गैस्ट्रिक म्यूकोसा के पोषण और रक्त की आपूर्ति में सुधार करता है, गैस्ट्रिक म्यूकोसा और पार्श्विका कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ावा देताहै। इसलिए, गैस्ट्रिन का उपयोग सीजी के विकास स्तर का मूल्यांकन करने के लिए एक संकेतक के रूप में किया जा सकता है। इसके अलावा, प्रतिक्रियाशील ऑक्साइड द्वारा ट्रिगर किए गए लिपिड पेरोक्सीडेशन उत्पाद भड़काऊ कोशिकाओं को सक्रिय कर सकते हैं, जिससे सीजी हो सकता है। Malondialdehyde (MDA), एक लिपिड peroxidation मार्कर, oxidative तनाव की डिग्री को मापने के लिए एक आमतौर पर इस्तेमाल किया संकेतक है. यह कुछ हद तक गैस्ट्रिक म्यूकोसा में मुक्त कणों के स्तर को दर्शाता है। एमडीए स्तर मुक्त कणों 7,8 की वजह से स्थानीय गैस्ट्रिक म्यूकोसा में असंतृप्त फैटी एसिड के हमले का संकेत कर सकते हैं.
आंतों के सूक्ष्मविज्ञान में मेजबान आंत में रहने वाले लाखों सूक्ष्मजीव होते हैं, जो मेजबान स्वास्थ्य को बनाए रखने और मेजबान प्रतिरक्षा को विनियमित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। एक स्वस्थ आंतों की वनस्पति, जो उच्च समृद्धि, विविधता और स्थिर माइक्रोबायोटा फ़ंक्शन की विशेषता है, चयापचय में भाग लेकर रोगजनक सूक्ष्मजीवों के आक्रमण के खिलाफ एक सुरक्षात्मक बाधा के रूप में कार्य करती है। आंतों के वनस्पतियों में गड़बड़ी व्यक्तियों को तीव्र और पुरानी जठरांत्ररोगों 9,10 के प्रति अधिक संवेदनशील बनाती है। हाल के वर्षों में, जठरांत्र रोगों के लिए माइक्रोबायोटा थेरेपी तेजी से प्रगति की है और महत्वपूर्ण प्रभावकारिता11 का प्रदर्शन किया है. सारांश में, आंतों के वनस्पतियों का विचार गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल रोगों को समझने और संबोधित करने में महत्वपूर्ण है।
पारंपरिक चीनी चिकित्सा के खजाने के एक अनिवार्य घटक के रूप में, लोक औषधीय सामग्री नैदानिक अभ्यास और राष्ट्रीय चिकित्सा के आधुनिकीकरण के लिए बहुत महत्व रखती है। जड़ें और डेस्मोडियम कॉडाटम (थुनब) के पूरे भाग। डीसी का व्यापक रूप से विस्तारित अवधि के लिए मियानयांग शहर के बेइचुआन कियांग क्षेत्र में पेट की परेशानी से राहत के लिए उपयोग किया गया है। कुछ लेख डी. कॉडाटम के साथ जठरांत्र रोगों के इलाज के लिए वैज्ञानिक आधार का संकेत देते हैं, इसके प्रभावों का हवाला देते हुए जैसे कि हेमोस्टेसिस, एंटी-ऑक्सीकरण, और जठरांत्र संरक्षण 12,13,14. हालांकि, गहन शोध की कमी के कारण, कोई नैदानिक फार्माकोडायनामिक्स तंत्र स्थापित नहीं किया गया है। इस लेख का उद्देश्य गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन और आंतों के वनस्पतियों के आधार पर गैस्ट्र्रिटिस के इलाज में डी. कॉडाटम के प्रभावों का अध्ययन करना है, जो इसके तर्कसंगत नैदानिक अनुप्रयोग के लिए एक आधार प्रदान करता है।
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Protocol
जानवरों की देखभाल और उपयोग की प्रक्रियाओं को मियांयांग नॉर्मल यूनिवर्सिटी की आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था, और जानवरों के नैतिक उपयोग से संबंधित सभी प्रासंगिक संस्थागत और सरकारी नियमों का सख्ती से पालन किया गया था। वर्तमान अध्ययन के लिए, एसपीएफ़ चूहों (कुनमिंग प्रजातियां, नर और मादा दोनों, वजन 180-220 ग्राम) का उपयोग किया गया था। जानवरों को एक वाणिज्यिक स्रोत से प्राप्त किया गया था ( सामग्री की तालिकादेखें)। सभी जानवरों को एक रोगजनक मुक्त वातावरण में रखा गया था और भोजन के लिए विज्ञापन लिबिटम पहुंच प्रदान की गई थी।
1. अभिकर्मकों की तैयारी
- इलेक्ट्रॉनिक पैमाने के साथ 2.5 ग्राम सोडियम सैलिसिलेट पाउडर ( सामग्री की तालिकादेखें) वजन करके 5% सोडियम सैलिसिलेट समाधान तैयार करें। पाउडर को थोड़ी मात्रा में आसुत जल में घोलें और इसे 50 एमएल की कुल मात्रा में पतला करें।
- डी कॉडाटम (12.8 ग्राम/किग्रा) का काढ़ा तैयार करें। डी कॉडाटम (सामग्री की तालिकादेखें) के 128 ग्राम वजन, इसे प्रयोगशाला आसुत जल के 1000 एमएल युक्त एक गोल-तल फ्लास्क में रखें, और इसे 100 एमएल की अंतिम मात्रा में केंद्रित करें।
2. समूहीकरण और प्रशासन
- चूहों को विभिन्न समूहों में विभाजित करें और इंट्रागैस्ट्रिक रूप से आवश्यक समाधानों का प्रशासन करें।
नोट: वर्तमान अध्ययन के लिए, 18 चूहों (9 पुरुषों, 9 महिलाओं) को तीन समूहों में विभाजित किया गया था: नियंत्रण समूह (समूह सी), मॉडल समूह (समूह एम), और उपचार समूह (समूह टी), प्रत्येक समूह में 6 चूहों के साथ। नियंत्रण समूह को खारा समाधान प्राप्त हुआ, और मॉडल समूह को 10 एमएल / किग्रा / दिन15 की खुराक पर 5 सप्ताह के लिए 5% सोडियम सैलिसिलेट समाधान प्राप्त हुआ। उपचार समूह को 10 एमएल/किग्रा/दिन की खुराक पर 5 सप्ताह के लिए 5% सोडियम सैलिसिलेट समाधान के साथ पूर्ववत किया गया था, इसके बाद 10 दिनों 15,16के लिए 1 एमएल/100 ग्राम की खुराक पर डी. कॉडाटम काढ़े का प्रशासन किया गया था। - प्रयोग के अंतिम दिन पूंछ ले जाने विधि17 का उपयोग कर सूखी और बाँझ microcentrifuge ट्यूबों में चूहों से मल लीजिए और उन्हें एक तरल नाइट्रोजन अल्ट्रा कम तापमान फ्रीजर में फ्रीज.
- नमूना लेने के अंत के बाद, गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था (संस्थागत रूप से अनुमोदित प्रोटोकॉल के बाद) द्वारा चूहों बलिदान. उदर महाधमनी का पर्दाफाश करने के लिए कैंची के साथ पेट की गुहा खोलें।
- उदर महाधमनी में लगभग समानांतर सुई (23-25 ग्राम) डालें, सीरम इकट्ठा करें, और इसे अल्ट्रा-लो-तापमान फ्रीजर में संरक्षित करें। पेट गुहा16 से पेट बाहर ले लो और संरक्षण के लिए एक 10% formalin समाधान में भिगोएँ.
नोट: समूह एम में, क्रोनिक गैस्ट्र्रिटिस मॉडल सफल माना जाता है यदि गैस्ट्रिक म्यूकोसा पतला होता है और नियमित ग्रंथियों आकृति विज्ञान15 के साथ भीड़भाड़ होता है, जबकि लैमिना प्रोप्रिया में थोड़ी मात्रा में भड़काऊ सेल घुसपैठ का अवलोकन किया जाता है।
- उदर महाधमनी में लगभग समानांतर सुई (23-25 ग्राम) डालें, सीरम इकट्ठा करें, और इसे अल्ट्रा-लो-तापमान फ्रीजर में संरक्षित करें। पेट गुहा16 से पेट बाहर ले लो और संरक्षण के लिए एक 10% formalin समाधान में भिगोएँ.
3. गैस्ट्रिक दीवार का पैथोलॉजिकल सेक्शन
- पैथोलॉजिकल वर्गों के लिए प्रत्येक समूह में चूहों से गैस्ट्रिक दीवार के नमूने लें। इसके बाद, रोग परिवर्तनों का निरीक्षण और विश्लेषण करने के लिए नियमित हेमेटोक्सिलिन-ईोसिन धुंधला प्रदर्शन18.
4. सीरम गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन का निर्धारण
- सीरम नमूने में, निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए एलिसा का उपयोग करके गैस्ट्रिन (जीएएस) और मैलोंडायल्डिहाइड (एमडीए)19 की सामग्री का पता लगाएं ( सामग्री की तालिकादेखें)। विश्लेषण के लिए एक माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करें।
5. फेकल कुल डीएनए निष्कर्षण और पीसीआर प्रवर्धन और शुद्धि
- व्यावसायिक रूप से उपलब्ध डीएनए अलगाव किट ( सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करके माइक्रोबियल डीएनए निष्कर्षण करें और यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर16 का उपयोग करके एकाग्रता और शुद्धता निर्धारित करें। इसके बाद, 1% agarose जेल वैद्युतकणसंचलन18 के माध्यम से डीएनए अखंडता का आकलन.
- प्राइमर 338F (5′-ACT, CCT, ACG, GGA, GGC, AGC, AG-3′) और 806R (5′-GAC, TAC, HVG, GGG, GTW, TCT AT-3′) के साथ बैक्टीरिया17S rRNA जीन को बढ़ाएं। प्राइमर वाणिज्यिक स्रोतों से प्राप्त किए जाते हैं ( सामग्री की तालिकादेखें)।
नोट: पीसीआर कार्यक्रम का पालन करें: विकृतीकरण (3 मिनट, 95 डिग्री सेल्सियस), इसके बाद 27 चक्र (30 एस, 95 डिग्री सेल्सियस; 30 एस, 55 डिग्री सेल्सियस; 45 एस, 72 डिग्री सेल्सियस), और एक अंतिम विस्तार (10 मिनट, 72 डिग्री सेल्सियस)। निम्नलिखित घटकों के साथ पीसीआर प्रतिक्रियाओं का संचालन करें: 5 के 4 माइक्रोन× डीएनए पोलीमरेज़ बफर, 2.5 एमएम डीएनटीपी के 2 माइक्रोन, प्रत्येक प्राइमर के 0.8 माइक्रोन (5 माइक्रोन), डीएनए पोलीमरेज़ के 0.4 माइक्रोन, और टेम्पलेट डीएनए के 10 एनजी ( सामग्री की तालिकादेखें)। - निकालें, शुद्ध करें, और पीसीआर उत्पादों को क्रमिक रूप से 2% एगरोज जेल, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध डीएनए जेल निष्कर्षण किट और फ्लोरोमीटर का उपयोग करके क्रमशः17.
6. अनुक्रमण
नोट: चरण 6 और चरण 7 पहले प्रकाशित विधियों20,21 के बाद किए जाते हैं।
- अनुक्रमण के लिए इलुमिना मंच का उपयोग करें।
नोट: डीएनए टुकड़े का एक छोर चिप में एम्बेडेड कनेक्टर के आधार को पूरक करता है, इसे चिप पर सुरक्षित करता है। दूसरा छोर बेतरतीब ढंग से एक और आसन्न दफन संयुक्त के आधार को पूरक करता है, जिससे "पुल" बनता है। - डीएनए क्लस्टर उत्पन्न करने के लिए पीसीआर प्रवर्धन करें। डीएनए एम्पलीफायरों को एकल किस्में में रैखिक करें।
- चार अलग-अलग फ्लोरोसेंट मार्करों की विशेषता वाले डीऑक्सीराइबोन्यूक्लियोटाइड ट्राइफॉस्फेट (डीएनटीपी) के साथ एक परिवर्तित डीएनए पोलीमरेज़ का परिचय दें। प्रति चक्र केवल एक आधार संश्लेषित करें।
- प्रतिक्रिया प्लेट की सतह को स्कैन करने के लिए एक लेजर का उपयोग करें और प्रत्येक टेम्पलेट अनुक्रम की प्रारंभिक प्रतिक्रिया के दौरान न्यूक्लियोटाइड प्रकारों को निर्धारित करें।
- रासायनिक 3 'चिपचिपा अंत को फिर से स्थापित करने के लिए "प्रतिदीप्ति समूह" और "समाप्ति समूह" को साफ करें। इसके बाद, दूसरे न्यूक्लियोटाइड को पोलीमराइज़ करने के लिए अग्रिम।
- प्रत्येक दौर में एकत्र प्रतिदीप्ति संकेत परिणामों का विश्लेषण करके टेम्पलेट डीएनए टुकड़े के अनुक्रम प्राप्त करें।
7. अनुक्रमण डेटा का प्रसंस्करण
- प्रारंभ में, Q20 के स्कोर के साथ किसी भी साइट पर कच्चे फास्टक्यू डेटा के रीड्स < ट्रिम करें और अनिश्चित आधारों के साथ रीड को समाप्त करें। इसके अतिरिक्त, ठीक मिलान प्राइमरों में दो बेमेल की अनुमति दें। इसके बाद, एक ओवरलैप >10 बीपी के साथ दृश्यों को मर्ज करें।
- UPARSE का उपयोग करके 97% समानता के साथ क्लस्टर ऑपरेशनल टैक्सोनोमिक यूनिट (OTUs), और UCHIME20,21 के साथ काइमेरिक अनुक्रमों को हटा दें।
- 70% की आत्मविश्वास सीमा का उपयोग करके, सिल्वा (SSU123) 16S rRNA डेटाबेस के खिलाफ प्रत्येक 16S rRNA जीन अनुक्रम के वर्गीकरण का विश्लेषण करने के लिए RDP क्लासिफायर एल्गोरिथ्म को नियोजित करें।
- क्रमशः मोथुर और क्यूइम का उपयोग करके अल्फा विविधता विश्लेषण और बीटा विविधता विश्लेषण करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
8. सांख्यिकीय विश्लेषण
- सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके इस अध्ययन में डेटा का विश्लेषण करें ( सामग्री की तालिकादेखें)। कई समूहों के बीच तुलना के लिए विचरण (एनोवा) के एक-तरफ़ा विश्लेषण को नियोजित करें और दो समूहों के बीच तुलना के लिए कम-महत्वपूर्ण-अंतर (एलएसडी) परीक्षण का उपयोग करें।
- पी < 0.05 को सभी तुलनाओं में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण मानें। P < 0.01 को अत्यंत महत्वपूर्ण माना जाता है।
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Representative Results
पेट की दीवार के रोग खंड के परिणाम चित्रा 1 में दर्शाए गए हैं। ग्रुप सी की तुलना में, ग्रुप एम ने हल्के गैस्ट्रिक दीवार शोष और हल्के सूजन का प्रदर्शन किया। हालांकि, जब ग्रुप एम की तुलना में, ग्रुप टी ने कोई स्पष्ट सूजन, आंतों का मेटाप्लासिया या शोष नहीं दिखाया। इससे पता चलता है कि डी. कॉडाटम काढ़ा गैस्ट्र्रिटिस में प्रभावी रूप से सुधार कर सकता है।
सीरम गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन परख परिणाम चित्रा 2 में प्रस्तुत कर रहे हैं. मैलोंडायल्डिहाइड (एमडीए) की सामग्री समूह सी की तुलना में समूह एम में काफी अधिक थी। डी कॉडाटम काढ़े के साथ उपचार के बाद, यह काफी कम हो गया था। गैस्ट्रिन (जीएएस) की सामग्री के संबंध में, समूह एम ने समूह सी की तुलना में काफी कम स्तर दिखाया, लेकिन समूह टी ने महत्वपूर्ण वृद्धि का प्रदर्शन किया। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि डी. कॉडाटम काढ़ा गैस्ट्र्रिटिस के इलाज के लिए गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन के स्तर को नियंत्रित कर सकता है।
अल्फा विविधता विश्लेषण, जैसा कि तालिका 1 और चित्रा 3 में दिखाया गया है, समूह एम और समूह टी के समुदायों के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर का पता चलता है। समूह सी और समूह टी में बैक्टीरिया की संख्या समूह एम की तुलना में अधिक है, यह सुझाव देते हुए कि चूहों में आंतों के बैक्टीरिया की संख्या और प्रकार धीरे-धीरे उपचार के बाद सामान्य स्तर पर जाते हैं।
प्रजाति संरचना विश्लेषण
चित्रा 4 ए के अनुसार, सामुदायिक बारप्लॉट दिखाता है कि लैक्टोबैसिलस और norank_f__Muribaculaceae समूह सी में सबसे बड़े अनुपात के लिए खाते हैं। समूह एम में Clostridium_sensu_stricto_1 और कुछ हेलिकोबैक्टर की उच्च बहुतायत होती है। ग्रुप टी की सामुदायिक संरचना ग्रुप सी के समान है, जिसमें महत्वपूर्ण घटक लैक्टोबैसिलस और रोम्बोटिया हैं। इसके अतिरिक्त, सर्कोस आरेख(चित्रा 4सी)के साथ संयुक्त स्पीयरमैन सहसंबंध हीटमैप(चित्रा 4बी)प्रमुख वनस्पतियों में अलग-अलग बदलावों के साथ, समूह सी और समूह एम के बीच वनस्पतियों की संरचना में महत्वपूर्ण अंतर प्रकट करता है। उपचार के बाद, समूह टी एक सामान्य वनस्पति अवस्था में वापस आ जाता है। इसके अलावा, चित्रा 5 समूह एम और समूह सी के बीच सामुदायिक संरचना में अत्यधिक अंतर को इंगित करता है, गैस्ट्र्रिटिस के साथ चूहों में आंतों के वनस्पतियों की संरचना और संरचना में होने वाले महत्वपूर्ण परिवर्तनों के साथ। उपचार के बाद, समूह सी और समूह टी के बीच वनस्पतियों की संरचना में समानताएं हैं, साथ ही समूह टी और समूह एम के बीच कुछ समानताएं भी हैं। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि डी. कॉडाटम काढ़ा गैस्ट्र्रिटिस के साथ चूहों की आंतों के वनस्पतियों को सामान्य या करीब-से-सामान्य स्थिति में बहाल कर सकता है।
प्रजाति अंतर विश्लेषण
चित्रा 6 ए में बहु प्रजातियों की तुलना स्तंभ चार्ट से, यह Norank_f_Muribaculaceae समूह सी में प्रचुर मात्रा में है और काफी समूह एम और समूह टी से अलग है कि देखा जा सकता है. उपचार के बाद, समूह टी में Norank_f_Muribaculaceae की संख्या में वृद्धि की प्रवृत्ति दिखाई देती है। इसके अतिरिक्त, Clostridium_sensu_stricto_1, ग्रुप एम में प्रचुर मात्रा में, कठोर वातावरण में लचीलापन प्रदर्शित करता है। उपचार के बाद, संख्या में काफी कमी आती है, यह सुझाव देते हुए कि डी. कॉडाटम काढ़ा आंतों के वनस्पतियों के अस्तित्व के वातावरण को कुछ हद तक बेहतर बनाता है। दूसरी ओर, चित्रा 6 बी में एलईएफएसई बहु-स्तरीय प्रजाति पदानुक्रम वृक्ष विश्लेषण समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर के साथ 44 प्रजातियों को इंगित करता है। Norank_f_muribaculaceae, Clostridium_sensu_stricto_1 और रोम्बोत्सिया क्रमशः ग्रुप सी, ग्रुप एम और ग्रुप टी में प्रचुर मात्रा में पाए गए।
चित्रा 1: पेट की दीवार के रोग अनुभाग के परिणाम। (ए) समूह सी में पेट के पैथोलॉजिकल खंड। (बी) समूह एम में पेट के पैथोलॉजिकल खंड। (सी) समूह टी में पेट के पैथोलॉजिकल खंड। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: सीरम गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन की सामग्री। (ए) एमडीए (मैलोंडियलडिहाइड) निर्धारण परिणामों का बार विश्लेषण चार्ट। (बी) जीएएस निर्धारण परिणामों का बार विश्लेषण चार्ट। *पी < 0.05, **पी < 0.01। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 3: विविधता सूचकांक टी के कॉलम ग्राम। लाल पट्टी समूह C का प्रतिनिधित्व करती है, नीला समूह T का प्रतिनिधित्व करता है, जबकि हरा समूह M.*P < 0.05, **P < 0.01 का प्रतिनिधित्व करता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: सामुदायिक संरचना विश्लेषण। (ए) सामुदायिक हिस्टोग्राम विश्लेषण। (बी) जीनस के स्तर पर सामुदायिक हीटमैप विश्लेषण। (सी) नमूनों और प्रजातियों के बीच संबंधों का सर्कोस आरेख विश्लेषण। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5: जीनस के स्तर पर पीएलएस-डीए विश्लेषण। लाल समूह C का प्रतिनिधित्व करता है, नीला समूह T का प्रतिनिधित्व करता है, और हरा समूह M का प्रतिनिधित्व करता है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 6: प्रजाति अंतर विश्लेषण। (ए) क्रुस्कल-वालिस एच टेस्ट बार प्लॉट। (बी) लेफसे बहु-स्तरीय प्रजातियों का वृक्ष मानचित्र। लाल समूह C का प्रतिनिधित्व करता है, नीला समूह T का प्रतिनिधित्व करता है, और हरा समूह M का प्रतिनिधित्व करता है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| समूह | मीन वैल्यू | मानक विचलन |
| के आसपास | 3.5201 | 0.63641 |
| लाख | 3.2755 | 0.28494 |
| टन | 3.5388 | 0.29945 |
तालिका 1: अल्फा विविधता सूचकांक परिणाम।
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Discussion
D. caudatum, Qiang राष्ट्रीयता12 द्वारा आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली लोक चिकित्सा, ने गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल रोगों के इलाज में महत्वपूर्ण प्रभावकारिता दिखाई है। आधुनिक औषधीय अनुसंधान की प्रगति के साथ, जठरांत्र संबंधी सूक्ष्मपारिस्थितिकी असंतुलन से उत्पन्न वनस्पतियों के असंतुलन तीव्र और पुरानी जठरांत्र रोगों22,23 में एक महत्वपूर्ण कारक के रूप में पहचान की है. आंत्र पथ में कुछ सूक्ष्मजीव शरीर में गतिशील संतुलन बनाए रखने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, और सीरम में हार्मोन शरीर की शारीरिक और रोग स्थिति को दर्शाते हैं। इसलिए, अध्ययन आंतों के वनस्पतियों और जठरांत्र संबंधी हार्मोन पर केंद्रित है।
16S rRNA उच्च-थ्रूपुट जीन अनुक्रमण आंतों के सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए एक प्राथमिक विधि है। यह एकत्रित नमूनों में सूक्ष्मजीव प्रकारों और कार्यों का पता लगाने में सक्षम बनाता है, जिससे आंतों के सूक्ष्मजीवों की प्रत्येक प्रजाति के सटीक और मात्रात्मक विश्लेषण की अनुमति मिलती है। हाल के वर्षों में, 16 एस आरआरएनए उच्च थ्रूपुट जीन अनुक्रमण तेजी से विकसित हुआ है और व्यापक रूप से विभिन्न पारिस्थितिक वातावरण 24,25,26में माइक्रोबियल विविधता विश्लेषण के लिए उपयोग किया गया है।
गैस्ट्र्रिटिस के साथ चूहों की आंतों के वनस्पतियों पर डी. कॉडाटम के प्रभावों की जांच इलुमिना स्थित 16S rRNA जीन अनुक्रमण के आधार पर तीन समूहों में आंत जीवाणु समुदायों की विस्तृत तुलना के माध्यम से की गई थी। आधुनिक वैज्ञानिक अनुसंधान इंगित करता है कि लैक्टोबैसिलस, norank_f__Muribaculaceae, रोम्बौटिया, और बिफीडोबैक्टीरियम प्रोबायोटिक्स हैं, जिनमें से प्रत्येक विशिष्ट स्वास्थ्य लाभ के साथ है जैसे कि कई घातक ट्यूमर के जोखिम को कम करना, विरोधी भड़काऊ क्षमता के साथ विटामिन के का उत्पादन, पॉलीसेकेराइड चयापचय को बढ़ावा देना, और दस्त और कब्जमें सुधार 27,28,29 . Clostridium_sensu_stricto_1, आंतों की चोट में एक रोगजनक जीवाणु, सूजन और बैक्टीरिया पैदा कर सकता है और बारीकी से रक्त और जठरांत्र ट्यूमर30 से जुड़ा हुआ है. क्रोनिक गैस्ट्र्रिटिस और एट्रोफिक गैस्ट्र्रिटिस गैस्ट्रिक ट्यूमर31 के लिए महत्वपूर्ण योगदान है.
बीटा विश्लेषण लैक्टोबैसिलस, norank_f__Muribaculaceae, रोम्बोटिया, बिफीडोबैक्टीरियम और उपचार के बाद Clostridium_sensu_stricto_1 की सामग्री में महत्वपूर्ण परिवर्तन को इंगित करता है। लैक्टोबैसिलस, norank_f__Muribaculaceae और रोम्बोटसिया की सामग्री में काफी वृद्धि हुई, जबकि डी. कॉडाटम उपचार के बाद बिफीडोबैक्टीरियम और Clostridium_sensu_stricto_1 में काफी कमी आई। इसके अतिरिक्त, सामुदायिक बारप्लॉट से पता चलता है कि समूह टी की सामुदायिक संरचना समूह सी के समान है। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि डी. कॉडाटम चूहों में गैस्ट्र्रिटिस के प्रसार में सुधार कर सकता है। हालांकि, प्रोबायोटिक बिफीडोबैक्टीरियम की सामग्री में कमी के पीछे विशिष्ट तंत्र डी. कॉडाटम को और शोध की आवश्यकता है।
एलिसा किट विधि में उच्च संवेदनशीलता, मजबूत विशिष्टता, संचालन में सरलता और छोटे नमूना आकारों के लिए उपयुक्तता32 है। इस अध्ययन में, इसका उपयोग चूहे के सीरम में मैलोंडायल्डिहाइड (एमडीए) और गैस्ट्रिन (जीएएस) की सामग्री का पता लगाने के लिए किया गया था। एमडीए लिपिड पेरोक्सीडेशन की डिग्री को दर्शाता है, अप्रत्यक्ष रूप से सेल क्षति की सीमा का संकेत देता है। गैस्ट्र्रिटिस वाले चूहों में, एमडीए का स्तर सामान्य चूहों की तुलना में काफी अधिक था, जो गैस्ट्रिक पार्श्विका कोशिकाओं को नुकसान पहुंचाता था। कॉडाटम उपचार ने एमडीए स्तर को काफी कम कर दिया, जो गैस्ट्र्रिटिस के इलाज में इसकी क्षमता का संकेत देता है। इसके विपरीत, डी. कॉडैटम ने कम जीएएस स्तर को बढ़ा दिया, गैस्ट्र्रिटिस की मरम्मत या उपचार में योगदान दिया।
हालांकि, 16S rRNA उच्च-थ्रूपुट जीन अनुक्रमण और एलिसा किट विधि दोनों की सीमाएँ हैं। 16S आरआरएनए उच्च-थ्रूपुट जीन अनुक्रमण में, कम रिज़ॉल्यूशन अत्यधिक समान अनुक्रमों के साथ उपभेदों या जेनेरा को अलग करना चुनौतीपूर्ण बना सकता है, जिससे जीनस, परिवार या फ़ाइलम33 जैसे उच्च वर्गीकरण स्तरों पर वर्गीकरण में कठिनाइयों का सामना करना पड़ता है। एलिसा किट विधि के लिए, कमजोर पड़ने और धोने की तरह नमूना pretreatment कदम आमतौर पर संभावित त्रुटियों और परिवर्तनशीलता34 शुरूआत, आवश्यक हैं.
इस अध्ययन से पता चलता है कि डी. कॉडाटम गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन और आंतों के वनस्पतियों को विनियमित करके गैस्ट्र्रिटिस का इलाज कर सकता है, जो इसके व्यापक नैदानिक अनुप्रयोगों में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। हालांकि, भविष्य के अनुसंधान को अन्य गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन, आंतों के वनस्पतियों को विनियमित करने के तंत्र और इसमें शामिल प्रभावी रसायनों में तल्लीन करना चाहिए।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
इस काम को सिचुआन प्रांत (2020YFS0539) के विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग की प्रमुख अनुसंधान एवं विकास परियोजनाओं द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alpha diversity analysis | Mothur 1.30.2 | ||
| AxyPrep deoxyribonucleic acid (DNA) gel extraction kit | Axygen Biosciences | AP-GX-50 | |
| Beta diversity analysis | Qiime 1.9.1 | ||
| Cryogenic refrigerator | Forma-86C ULT freezer | ||
| Desmodium caudatum | The Traditional Chinese Medicine Hospital of Beichuan Qiang Autonomous County | ||
| E.Z.N.A. soil kit | Omega Bio-tek | D5625-01 | |
| Illumina MiSeq Platform | Illumina Miseq PE300/NovaSeq PE250 | ||
| Multiskan Spectrum | spectraMax i3 | ||
| OTU clustering | Uparse 7.0.1090 | ||
| OTU statistics | Usearch 7.0 | ||
| PCR instrument | TransGen AP221-02 | ||
| PCR instrument | ABI GeneAmp 9700 | ||
| QuantiFluor-ST double-stranded DNA (dsDNA) system | Promega Corp. | ||
| Sequence classification annotation | RDP Classifier 2.11 | ||
| Sodium salicylate | Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd | 54-21-7 | |
| SPF rats | Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd | ||
| SPSS 18.0 | IBM |
References
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