灸実験プラットフォームは制限なくラットを固定することができ、ラットは覚醒状態で多ツボ灸を受けることができ、ラットの福祉を確保し、オペレーターの安全を保護し、治療効果を確保し、実験の効率を向上させます。
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方法論記事
慢性腎不全ラットの治療のためのハーブケーキ分離灸の使用
* These authors contributed equally
この記事について
サマリー
要約
臨床診療における灸の過程で、被験者は、灸灰の落下、皮膚の火傷、治療効果の低下などの問題を避けるために、安定した気分と快適な姿勢にある必要があります。このような問題は、ラットの灸実験にも存在します。臨床を模擬するためには、動物実験における実験器具、すなわち、ラットを固定し、灸治療を同期させた灸装置を導入することで、実験ラットを麻酔なしで静かに快適に灸治療を受けることができる必要があります。
私たちの研究グループは、ラット灸実験プラットフォームを設計しました。このデバイスは、支持ベースプレート、複数の固定コンポーネント、およびパーティション分割されたコンポーネントを備えた木の板で囲まれていました。このデバイスは、麻酔や火傷を避け、同時に背中の複数のツボを露出させることなく、ラットの灸の操作モードを達成することができます。この操作により、ラットやオペレーターの身体的および精神的損傷を回避できるため、研究効率が向上し、灸動物実験の開発と研究がさらに促進されます。
このデバイスはシンプルな構造で、操作と普及が簡単で、包括的かつ革新的に設計され、再利用可能で、主に灸に基づくラット実験に適しています。この記事では、主にラット灸用実験プラットフォームデバイスの構造、デバイスを使用した実験ラットでのハーブケーキ分離灸の基本的な手順を紹介し、慢性腎不全(CRF)のラットモデルの確立と代表的な実験結果について説明します。
概要
火を当てると灸が現れました。古代の医者は偶然に火を燃やす体の一部が不快感の症状を和らげることができることを発見しました。長期にわたる実践の末、主力の灸材1として「Artemisiae Argyi Folium」が徐々に選ばれていきました。灸は伝統的な中国医学の重要な要素の1つであり、伝統的な中国医学の煎じ薬やツボ鍼治療と並置すると、これら3つの主要な伝統的な漢方薬療法は多くの病気で広く使用されています。
中国の医師は、黄帝内京(黄帝の内古典)の時代には、病気の治療に灸をよく使用していました。Artemisiae Argyi Foliumは、経絡を温めて出血を止め、風邪を払拭し、痛みを和らげる機能を持つ漢方薬の一種です。これは、伝統的な漢方薬の外部治療に一般的に使用され、また、伝統的な漢方薬の煎じ薬の治療にも使用できます。灸は、灸などの薬剤を体表のツボに当てて燃焼させ、灸火の穏やかな熱と薬剤の効果を利用して病気を治療する外用療法2の一種です3。
一般的な治療法の1つとして、灸は臨床現場で広く使用されています。灸療法の継続的な拡大に伴い、灸のメカニズムを調査し、多くの動物実験を実施している研究が増えています4,5<....
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プロトコル
この計画は、雲南中医薬大学の動物管理ガイドラインに準拠しており、雲南中医薬大学の動物倫理委員会によって承認されています。実験動物福祉・倫理審査番号はR-062021G098です。
1. 灸実験台装置(図1)
注:ラットの後肢と前肢の間の距離とそれらの行動的および生理学的特性に基づいて、ラット灸実験プラットフォームデバイスを設計および構築しました。
- 灸装置のサイズ
- 反打たれた板材料と木の板を使用してデバイスを製造します。全体のサイズは長さ52cm×幅23.5cm×高さ64cmで、デバイスの底面面積は1222cm2です。
注:灸操作はこの高さのプラットフォームで行われ、ラットを落ち着かせることができます。
- 反打たれた板材料と木の板を使用してデバイスを製造します。全体のサイズは長さ52cm×幅23.5cm×高さ64cmで、デバイスの底面面積は1222cm2です。
- 灸装置のメインフレーム
- デバイス全体のベースを殴打防止ボード素材で作ります:ベースプレートは52 cm L x 23.5 cm Wで、表面は白いです。デバイス全体を安定させるために、底がデバイスの重量の大部分を占めていることを確認してください。
- デバイスの高架台を高さ60cmの無垢材で作ります。
注:これは機器全体のメインフレームであり、デバイス全体を....
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結果
腎臓の形態
図5からわかるように、他のグループと比較して、グループD(ハーブケーキ分離灸グループ)の腎臓のサイズ、色、およびテクスチャーは、正常グループのものにより近かった。モデルとロサルタンカリウム群の腎臓形態は、異なる程度の白色線維症を示しました。
腎臓の重さ
図6 は、グループAの左腎臓重量がグループBの体重と有意に異なることを示しており、CRFモデルが成功したことを示しています。グループ D の左腎臓重量は グループAのそれに近く、 グループB と グループC の左腎臓重量はグループ Dの重量と有意に異なっていました。
グ.......
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ディスカッション
臨床的には、鍼灸治療では、患者が落ち着いてリラックスし、過度の怒りや空腹を避け、「平和」を強調する必要があります。しかし、現在の鍼灸実験の実践は、依然として動物を結合することを前提としており、実験の本来の意図に反するだけでなく、臨床の実践にも適合していません。動物を縛りつけ、動物を怖がらせ、怒らせると、実験動物のアドレナリンやその他のホルモンが急速に増加し、実験結果に影響を与える22。鍼灸動物の実験手術中、実験の精度を確保し、動物の福祉を保護するために、これらの問題を緊急に解決する必要があります。灸はラットに大きな刺激効果をもたらし、その激しい気質と相まって、実験中にラットを安全かつ効果的に固定できない場合、オペレーターが怪我をしたり、病気のリスクを高めたり、実験データの精度に影響を与える可能性があります。治療時間が長く、治療期間が長いため、ハーブケーキ分離灸療法は、長期間の灸に耐えられる固定装置が必要です。本研究グループが発明したラット灸実験プラットフォームは、この困難を克服することができ、臨床現場により近づいています。
実験にあた.......
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開示事項
著者は、利益相反がないことを宣言します。ラット灸実験プラットフォームデバイスの特許番号はZL202320880924.Xです。
謝辞
この論文に対するHuang准教授とCui氏の厳格な指導とサポートに感謝します。この研究は、1.中国国立自然科学基金会(NSFC)、82160938、「TGF-β1によって媒介されるERKおよびSmadシグナル経路の相互作用効果からのケーキ分離灸を伴う腎間質性線維症に関するメカニズム研究の探索」。2.雲南省衛生委員会「2020ハイレベルTCMリザーブタレント」インキュベーションプロジェクト(雲尾TCM開発[2021] No.1);3.雲南省科学技術部-応用基礎研究共同漢方薬特別基金(No.2019FF002-022、No.202101AZ70001-286、No.202301AZ070001-030);4. 雲南省イノベーション チーム 鍼灸とトゥイナによる脳症の予防と治療 (2023)。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 0.5 mL ヘパリン リチウム生化学チューブ | 石家荘 Kangweishi Medical Equipment Co., Ltd | 220518 | 採血 |
| 0.9% 生理食塩水 | 昆明 南江製薬 Co., Ltd | /リンス | |
| 1.5 mL エッペンドルフ チューブ | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., Ltd | 12100024 | サブパッケージ |
| 2 mL 凍結保存チューブ | Baroque Biotechnology Co., LTD | 88-0151 | 包装された腎臓 |
| 4度;C冷蔵庫 | ハイアールグループ株式会社 | BCD-236WDGL | ストア |
| 5mLシリンジ | 四川省新世紀医療ポリマー製品株式会社 | 20211115 | 強制 |
| 50 mL遠心分離管 | Langeke Biotechnology Co., Ltd | CT-002-50A | パッケージ腎臓 |
| 12 G強制針 | 北京Zhongke Hengtian Technology Co.、Ltd. | 12#55mm | ガベージ |
| 96ウェルプレート | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | 11510 | タンパク質濃度の測定 |
| -80 °C冷凍庫 | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 991 | ストア |
| アデニン | 北京Boaotuo Technology Co., LTD | A0607 | 成形薬 |
| BCA開発者 | Biyuntian Biological Engineering Co., LTD | P0010 | タンパク質濃度の測定 |
| BCL-2タンパク質抗体試薬 | アブカム上海貿易有限公司 | ab196495 | ウエスタンブロット |
| カスパーゼ-3タンパク質抗体試薬 | Abcam Shanghai Trading Co., LTD | ab184787 | ウエスタンブロット |
| 化学発光イメージングシステム | Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd | 100240073 | タンパク質バンディングイメージング |
| 漢方薬粉末 | 雲南中医薬大学第2付属病院 | / | キュア |
| ダイレクトロードカラープレステインマーカー | 北京Kangrunchengyeバイオテクノロジー株式会社(GenStar) | M221 | ウエスタンブロット |
| 使い捨て血液収集針 | Liuyang Sanli医学科学技術開発有限公司 | YZB /国0411-2010 | サンプリング |
| 使い捨てヒト静脈血液サンプル収集容器 | Liuyang Sanli医療科学技術開発有限公司 | 20210901 | 血液サンプリング |
| DK-30 自動製氷機 | 河南兄弟計器機器 Co., LTD | SHDX0023 | 製氷 |
| ECL発光基板キット | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | BL520B | 露光フィルムの潜像を可視画像に変換する |
| 電子スケール | Shanghai Ran Hao Electronics Co., LTD | JCS-31002C | ラットの体重と腎臓重量を測定しました |
| 凍結ミクロトーム | サーモフィッシャーサイエンティフィック | HM525 NX | ミクロトーム |
| 全自動生化学分析装置 | 天津マイクロナノコアテクノロジー株式会社 | PV2112001Z02410305 | 腎機能試験 |
| ガス麻酔システム | 中市科技株式会社 | ZS-MV-1 | 麻酔 |
| グリシン | 北京曽猟宝科技有限公司 | Cat#G8200 | ランニングバッファー、ウェスタントランスファーバッファー |
| HE染色試薬 | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | G1120 | 染色 |
| 高タンパク飼料 | 江蘇相乗工学 生物工学有限公司 | XT19008 | |
| 供給 インテリジェント実験室 超純水機 | 重慶 huachuag 水処理工学有限公司 | 15L | ろ過 |
| 内部参照 β-actin | 江蘇秦科生物研究有限公司 | AF7018 | ウエスタンブロット |
| イソフルラン | 江蘇中武Beikang Pharmaceutical Co., Ltd | 20220701 | 麻酔 |
| 液体窒素 | 昆明ボタイドライアイス販売有限公司 | / | 腎臓組織凍結 |
| ロサルタンカリウム錠 | クシャープ&Dohme(中国)投資有限公司 | J20180054 | 硬化 |
| 低温高速ティッシュグラインダー | 漢Servicebio技術有限公司SKZ3F20200191 | ティッシュ研削 | |
| Maason染色キット | 北京Soleibao技術有限公司。 | G1340 | 染色 |
| メタノール | 広東省 Guanghua Sci-Tech Co., Ltd | 20220519 | ウェスタントランスファーバッファー |
| Mini-PROTEAN テトラ | ・ボール・ライフ・メディカル・プロダクツ(上海) Co., Ltd | 552BR 233193 | 電気泳動 |
| Moxa | 雲南中医薬大学第2付属病院 | / | キュ |
| ア・マルチスカン・スペクトラム・マイクロプレート・マイクロプレート・メーター | TECAN | Spark | タンパク質の吸光度と濃度が操作 |
| サミ | 張家港市 金豊鹿ナイフ切断工場 | 201118 | 皮膚を切断 |
| パラホルムアルデヒド | 北京 Lanjieke バイオテクノロジー株式会社 | BL539A | 固定組織 |
| PERK タンパク質抗体試薬 | 上海 普米バイオテクノロジー株式会社 (CST 中国代理店) | 3192 | ウェスタンブロット |
| 正型蛍光顕微鏡 | Carl Zeiss Suzhou Co.,Ltd. | 5446000456 | キャプチャ画像 |
| プレハブ接着剤 | Derun Cheng(北京)生物有限公司(ACE中国エージェント) | B230418 | ウエスタンブロット |
| タンパク質ヤギ抗ウサギLgG(H + L)、HRP共役 | 上海Dinran電子技術有限公司(TRAN) | HS101 | ウエスタンブロット |
| 粉砕機 | 合肥Rongzhida小型家電有限公司 | RS-FS1401 | 粉砕中国語医療用 |
| PVDFメンブレン | MerckMillipore Corporation | IPVH00010 | ウェスタンブロット |
| 冷蔵遠心分離機 | Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., Ltd | MIKRO 220R | 遠心分離機 |
| RIPA 溶解物 | Beijing Solaibao Technology Co., Ltd (Solarbio) | R0010 | 溶解組織 |
| サンプリング毛細血管 | 江蘇康建華 Medical Supplies Co., LTD | 20160157 | 内眼からの血液 |
| Scald 軟膏 (Zilian軟膏) | 雲南省立伝統的な中国医学病院 | / | からの火傷の治療に使用 |
| 広州斎国バイオテクノロジー株式会社(BIOFROXX) | 1172GR500 | 西洋ブロッキングバッファー | |
| 外科用ブレード | 上海医療機器株式会社 | JOBO10 | 開腎臓組織 |
| 外科用ナイフハンドル | 上海医療機器株式会社 | J11010 | 取付刃 |
| TS-200 オービタルシェーカー | 海門麒鐘製造有限公司 | TS-8S | ゲル固定 |
| Tween 80 | MedChemExpress | HY-Y1819 | TBST |
| ピンセットShanghai | Medical Equipment Co., Ltd | JD1050 | 灸を拾う |
| 動物用医薬品*マイクロコア腎機能試験ディスク | 天津マイクロナノコアテクノロジー株式会社 | 47031-35.5-0145-0227-62-220750 | 腎機能試験 |
参考文献
- Run-Ming, Y. The origin and development of Chinese acupuncture and moxibustion. Ancient Science of Life. 4 (4), 224-228 (1985).
- Zhang, Q. W. Moxibustion Theories of Different Schools. , China Press of Traditional Chinese Medicine. Beijing. (2016).
- Ren, H. W., Cai, D. J.
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再版と許可
