Denne studien beskriver en rask og effektiv metode for cellekomponentanalyse av cerebrale blodpropper gjennom blodproppoppløsning, cellefarging og rutinemessig blodundersøkelse.
Cerebral trombose, en blodpropp i en cerebral arterie eller vene, er den vanligste typen hjerneinfarkt. Studien av cellekomponentene i cerebral blodpropp er viktig for diagnose, behandling og prognose. Imidlertid er de nåværende tilnærmingene til å studere cellekomponentene i blodproppene hovedsakelig basert på in situ-farging , noe som er uegnet for omfattende studier av cellekomponentene fordi cellene er tett pakket inn i blodproppene. Tidligere studier har vellykket isolert et fibrinolytisk enzym (sFE) fra Sipunculus nudus, som kan nedbryte den tverrbundne fibrin direkte og frigjøre cellekomponentene. Denne studien etablerte en omfattende metode basert på sFE for å studere cellekomponentene i cerebral trombus. Denne protokollen inkluderer blodproppoppløsning, cellefrigjøring, cellefarging og rutinemessig blodundersøkelse. Ifølge denne metoden kunne cellekomponentene studeres kvantitativt og kvalitativt. De representative resultatene av eksperimenter ved hjelp av denne metoden er vist.
Cerebrovaskulær sykdom er en av tre store sykdommer som kan true menneskers helse, blant annet iskemisk cerebrovaskulær sykdom står for mer enn 80%. Cerebral trombose og cerebral venetrombose er de mest bekymrede iskemiske cerebrovaskulære sykdommene i dag, hovedsakelig forårsaket av cerebrale blodpropper 1,2. Dersom behandlingen ikke gjøres riktig, vil den ha høy invaliditets- og dødelighet og høyt tilbakefall etter utskrivning3.
Nylig har et økende antall studier vist at cellekomponentene i cerebral blodpropp er tett korrelert med diagnosen, behandlingen og prognosen av cerebral trombose 4,5,6. Derfor er tilgjengeligheten av data om trombussammensetning, spesielt cellekomponentene, viktig for klinisk diagnose og behandling. Dessverre kan de tilgjengelige metodene ikke analysere blodproppkomponenten kvantitativt og kvalitativt. For eksempel kan Martius Scarlett Blue-basert in situ-farging bare studere de røde / hvite blodcellene i visse skiver av blodproppen7. Immunhistokjemi (IHC) basert in situ farging kan bare studere begrensede blodkomponenter av visse skiver av blodproppen ved hjelp av antistoffene8. De mikroskopiske bildebaserte metodene er bare opptatt av den spesifikke strukturen til blodproppen9. Dessuten er alle disse metodene arbeidskrevende og tidkrevende10. Hittil har prosedyrene for kvantitativt og kvalitativt studier av cerebrale trombiske cellekomponenter ikke blitt rapportert. Det er allment anerkjent at den tverrbundne fibrin tett pakker blodcellene i blodproppene11. Følgelig er den spesifikke nedbrytningen av det tverrbundne fibrin og frigjøring av de intakte cellene kritisk for nøyaktig analyse av cellekomponenter.
Tidligere arbeider isolerte et fibrinolytisk enzym fra Sipunculus nudus (sFE), som kan nedbryte fibrin spesifikt og raskt12. Her ble det foreslått en metode for å analysere cellekomponentene i hjernetrombi basert på den unike aktiviteten til sFE. Denne protokollen benyttet sFE til å nedbryte fibrin av blodpropper først og deretter analysert cellekomponentene ved Wrights farging og rutinemessig blodundersøkelse13,14. Ifølge denne metoden kan cellekomponentene i cerebral trombi studeres kvantitativt og kvalitativt. Denne enkle og effektive protokollen kan brukes for cellekomponentanalyse av andre blodpropper.
sFE er et fibrinolytisk middel som kan nedbryte fibrin direkte og effektivt12,16. Her ble sFE brukt til å nedbryte den tverrbundne fibrin av cerebrale blodpropper, frigjøre de lukkede cellene i blodproppene og analysere cellekomponentene i blodproppene kvalitativt og kvantitativt. Mikroskopidata og rutinemessig blodprøve tydet på at de lukkede cellene ble frigjort fra blodproppene. Videre ble celletyper og strukturer av de frigjorte cellene ikke påvirket sig…
The authors have nothing to disclose.
Denne forskningen ble finansiert av Science and Technology Bureau of Xiamen City (3502Z20227197), og Science and Technology Bureau of Fujian Province (nr. 2019J01070, No.2021Y0027).
Agglutination Reaction Plate | ROTEST | RTB-4003 | |
Auto Hematology Analyzer | SYSMEX | XNB2 | |
Automatic Vertical Pressure Steam Sterilizer | SANYO | MLS-3750 | |
Centrifuge Tube (1.5 mL) | Biosharp | BS-15-M | |
Clean bench | AIRTECH | BLB-1600 | |
Constant Temperature Incubator | JINGHONG | JHS-400 | |
Culture Dish (100 mm) | NEST | 704001 | |
DHG Series Heating and Drying Oven | SENXIN | DGG-9140AD | |
Electronic Analytical Balance | DENVER | TP-213 | |
Filter Membrane (0.22 µm) | Millex GP | SLGP033NK | |
Micro Refrigerated Centrifuge | Cence | H1650-W | |
Microscope Slides | CITOGLAS | 01-30253-50 | |
Milli-Q Reference | Millipore | Z00QSV0CN | |
Normal Saline | CISEN | H37022337 | |
Optical Microscope | Nikon | ECLIPSE E100 | |
Parafilm | Bemis | PM-996 | |
Phosphate-Buffered Saline | Beyotime | C0221A | |
Pipette Tip (1 mL ) | Axygene | T-1000XT-C | |
Pipette Tip (200 µL) | Axygene | T-200XT-C | |
Pipettor (1 mL) | Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
Pipettor (200 µL) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
Scalpel | MARTOR | 23111 | |
Small-sized Vortex Oscillator | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
Tweezer | Hystic | HKQS-180 | |
Wright Staining Solution | Beyotime | C0135-500ml |