Detta protokoll beskriver en enkel anordning som efterliknar Dings rollmetod, etablerar en råttmodell av skelettmuskelskada och använder hematoxylin-eosinfärgning för att observera patologin hos skadad vävnad och enzymkopplad immunadsorberande analys för att upptäcka förändringar i serumskademarkörer.
Dings rollmetod är en av de mest använda manipulationerna i traditionella kinesiska massagekliniker (Tuina) och en av de mest inflytelserika samtida Tuina-manipulationerna i Kina. Den är baserad på den traditionella rullningsmetoden som vanligtvis används i zen-genren med ett finger och kallas Dings rullningsmetod. På grund av dess antiinflammatoriska och blodcirkulationsfrämjande effekter har Dings rullningsmetod goda terapeutiska effekter på myopati. På grund av det stora kraftområdet som appliceras på mänsklig hud är Dings rullningsmetod utmanande att utföra på försöksdjur med små hudområden, såsom råttor och kaniner. Dessutom skiljer sig styrkan hos Tuina applicerad på människokroppen från den som appliceras på försöksdjur, så det kan hända att styrkan är för hög eller för låg för att uppnå den terapeutiska effekten av Tuina under experimentet. Detta experiment syftar till att skapa en enkel massageapparat som är lämplig för råttor baserat på Dings rullande manipulationsparametrar (styrka, frekvens, Tuina-varaktighet). Enheten kan standardisera manipulation i djurförsök och minska variationen i Tuina-kraften som appliceras på olika djur på grund av subjektiva faktorer. En råttmodell av notexin-inducerad skelettmuskelskada etablerades, och plasmaskademarkörerna kreatinkinas (CK) och fettsyrabindande protein 3 (FABP3) användes för att bedöma den terapeutiska effekten av Tuina på skelettmuskelskada. Resultaten visade att denna Tuina-massageapparat kunde minska nivåerna av CK- och FABP3-uttryck och bromsa graden av skelettmuskelskada. Därför bidrar Tuina-massageapparaten som beskrivs här, som efterliknar Dings rullningsmetod, till att standardisera Tuina-manipulation i experimentell forskning och är till stor hjälp för efterföljande forskning om Tuinas molekylära mekanism för myopati.
Muskelskador är vanliga traumatiska skador i det kliniska och dagliga livet, orsakade av yttre slag (kontusioner) eller kronisk överbelastning av muskelfibrer (stammar) etc., vilket resulterar i muskeldysfunktion och smärta, som till och med allvarligt påverkar patientens livskvalitet1. Att påbörja rehabilitering så tidigt som möjligt efter en akut belastningsskada är nyckeln till att minska tiden för återgång till idrott2 och för att minska smärta 3,4. I modern västerländsk medicin följer klinisk första hjälpen för muskelskador principerna vila, is, kompression och höjning (RICE) för att stoppa skadlig blödning i muskelvävnaden5 och icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel för att lindra smärta6. Upptäckten av nya terapier som exosomer7 och vävnadsteknik8 blev potentiella behandlingsstrategier för skelettmuskelsjukdomar, vilket kompenserade för tidigare farmakologiska behandlingars brister. Men det kan också öka behandlingskostnaderna för patienterna, vilket sätter dem under enorm ekonomisk press9. Därför rekommenderas alternativa och kompletterande terapier för behandling av muskuloskeletala problem10. Tuina används i stor utsträckning kliniskt i Kina som en traditionell medicinsk metod och är populär bland patienter för sin effektivitet och färre biverkningar. Tuina-terapi för muskuloskeletala sjukdomar kan lindra smärta och förbättra funktionen11,12,13. Ding Jifeng, en berömd Tuina-utövare från Shanghai, grundade Dings kastmetod14. Det är en unik rullnings- och krossteknik med ett stort kraftområde, enhetlig och skonsam kraft och intensiv penetration.
Olika djurmodeller är baserade på olika etiologier. De har för- och nackdelar, och valet av korrekta och lämpliga djurmodeller är av stor betydelse för grundläggande experiment, som hjälper till att förstå de cellulära och molekylära signalvägarna för regenerering och reparation efter skelettmuskelskada för att utveckla nya terapier för behandling av skelettmuskelsjukdomar. Kemiskt inducerade modeller av muskelskada används i stor utsträckning, med injektioner av skelettmuskulatur som orsakar myofibernekros och producerar regenererade områden som effektivt kan regenerera inom 2 veckor15. Både notexin och bupivakain kan orsaka muskelskador. Notexin kan dock orsaka allvarligare myotoxiska skador på skelettmuskulaturen än bupivakain, och den naturliga funktionella återhämtningen är relativt långsammare16. Läkemedel intramuskulär formsprutning tar inte bara mindre tid utan har också kontrollerade effekter och omfattning av skelettmuskelskada. Denna kvantifierbara kontroll gör det mindre svårt att lyckas med gjutningen15,17.
Inflammatorisk respons är en essentiell biologisk respons som har studerats utförligt i samband med myopati18,19. I de tidiga stadierna av skelettmuskelskada stör myofibernekros lokal muskelhomeostas, och många inflammatoriska celler infiltrerar skadestället och utsöndrar många proinflammatoriska cytokiner19. Kreatinkinas (CK) är en traditionell serumbiomarkör för bedömning av skelettmuskelskada. Den saknar dock vävnadsspecificitet20 och sensitivitet21, vilket begränsar dess förmåga att bedöma omfattningen av läkemedelsinducerad muskelskada och indirekt rapportera omfattningen av muskelåterhämtning efter skada. Nya biomarkörer, inklusive fettsyrabindande protein 3 (FABP3), har nyligen visat relativt hög vävnadsspecificitet och känslighet i gnagarmodeller av skelettmuskelskada. FABP3 är en familj av bindande proteiner som främst uttrycks i hjärt- och skelettmuskelceller och är inblandade i fettsyrametabolism, transport och signalering22. Därför valde vi en kombination av två biomarkörer, CK och FABP3, för att bedöma omfattningen av notexin-inducerad skelettmuskelskada och återhämtning efter behandling.
Hos gnagare är musklerna grunda och hudområdet är litet, vilket också avgör att de olika parametrarna för massage hos gnagare inte kommer att vara desamma som hos människor, såsom vid djurterapi, massageterapeuten bör behandla dem med mindre kraft med Dings rullningsmetod, och kanske inte bidrar till denna teknik på grund av det skadade områdets lilla storlek, vilket i slutändan kan leda till en minskning av massagens effektivitet. Därför använde experimentet den rullande massageapparaten som gjorts internt, som överensstämmer med egenskaperna hos Dings rullmetod, för att ingripa och utvärdera den terapeutiska effekten av den notexin-inducerade skelettmuskelskademodellen hos råttor, vilket hjälper till att standardisera parametrarna för Tuina i experimentella djurstudier för att grundligt undersöka den molekylära verkningsmekanismen för Tuina, en traditionell kinesisk medicinbehandlingsmetod, på muskuloskeletala sjukdomar.
Här beskrev vi ett protokoll för Tuina-behandling av skelettmuskelskada hos råtta och analyserade sedan graden av skelettmuskelskada efter behandling för att verifiera metodens effektivitet. Framför allt kan modeller för skelettmuskelskada på råtta, inklusive men inte begränsat till läkemedelsinduktion (notexin, bupivakain)16, trubbig kontusion 26, kross 27 och ischemi reperfusion28, användas med Tuina. Genom HE-fä…
The authors have nothing to disclose.
Denna forskning stöddes av bidrag från National Natural Science Foundation of China (Grant Nos.82174521), innovationsprojekt för doktorander vid Hunan University of Chinese Medicine (2022CX109)
1 mL syringe | JIANGXI FENGLIN | 20220521 | |
1.5 microtubes | Servicebio | EP-150X-J | |
15 mL centrifuge tube | Servicebio | EP-1501-J | |
30G needle | CONPUVON | 220318 | |
5 mL blood collection tube | Servicebio | QX0023 | |
Acrylic handle | Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd | 65643645 | |
Adjustment splint | CREROMEM | 20220729 | |
Cotton Swab | INOHV | 22080215 | |
Enzyme-labeled Instrument | Rayto | RT-6100 | |
Ethanol | INOHV | 211106 | |
Fork holder | Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd | JL001 | |
Hair removal cream | Veet, France | LOTC190922002 | |
Hematoxylin dyeing solution set | Wuhan Google Biotech | G1005 | |
Imaging system | Nikon, Japan | Nikon DS-U3 | |
IODOPHOR disfecting solution | Hale&Hearty | 20221205 | |
Light microscope | Nikon, Japan | Nikon Eclipse E100 | |
Limit baffle | CREROMEM | 20220724 | |
Notexin | Latoxan S.A.S. | L8104-100UG | |
Pentobarbital sodium | Merck KGaA | P3761 | |
Rat creatine kinase (CK) ELISA kit | LunChangShuoBiotech | YD-35237 | |
Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit | LunChangShuoBiotech | YD-35730 | |
Rubber roller | Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd | 202207 | |
Screw | Weiyan Hardware | B05Z122 | |
Sprague Dawley rats | Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co. | SYXK2019-0009 | |
Spring | Bingzhang Hardware | TH001 | |
Surgical blade | Covetrus | #23 | |
Weigh controller | Iyoys | HY-XSQ |