Denne protokollen beskriver en enkel enhet som etterligner Dings rullemetode, etablerer en rottemodell for skjelettmuskelskade og bruker hematoksylin-eosinfarging for å observere patologien til skadet vev og enzymbundet immunosorbentanalyse for å oppdage endringer i serumskademarkører.
Dings rullemetode er en av de mest brukte manipulasjonene i tradisjonelle kinesiske massasjeklinikker (Tuina) og en av de mest innflytelsesrike moderne Tuina-manipulasjonene i Kina. Den er basert på den tradisjonelle rullemetoden som vanligvis brukes i enfinger Zen-sjangeren og heter Dings rullemetode. På grunn av sine antiinflammatoriske og blodsirkulasjonsfremmende effekter, har Dings rullemetode lydterapeutiske effekter på myopati. På grunn av det store kraftområdet som påføres menneskelig hud, er Dings rullemetode utfordrende å utføre på forsøksdyr med små hudområder, som rotter og kaniner. I tillegg er styrken til Tuina påført menneskekroppen forskjellig fra den som brukes på forsøksdyr, så det kan hende at styrken er for høy eller for lav til å oppnå den terapeutiske effekten av Tuina under forsøket. Dette eksperimentet tar sikte på å skape en enkel massasjeapparat egnet for rotter basert på Dings rullende manipulasjonsparametere (styrke, frekvens, Tuina-varighet). Enheten kan standardisere manipulering i dyreforsøk og redusere variasjonen i Tuina-kraft som brukes på forskjellige dyr på grunn av subjektive faktorer. En rottemodell av ikke-eksinindusert skjelettmuskelskade ble etablert, og plasmaskademarkørene kreatinkinase (CK) og fettsyrebindende protein 3 (FABP3) ble brukt for å vurdere den terapeutiske effekten av Tuina på skjelettmuskelskade. Resultatene viste at denne Tuina-massøren kunne redusere nivåene av CK- og FABP3-uttrykk og redusere graden av skjelettmuskelskade. Derfor bidrar Tuina-massøren beskrevet her, som etterligner Dings rullemetode, til standardisering av Tuina-manipulasjon i eksperimentell forskning og er til stor hjelp for senere forskning på den molekylære mekanismen til Tuina for myopati.
Muskelskader er vanlige traumatiske skader i klinisk og dagligliv, forårsaket av ytre slag (kontusjoner) eller kronisk overbelastning av muskelfibre (stammer), etc., noe som resulterer i muskeldysfunksjon og smerte, selv alvorlig påvirker pasientens livskvalitet1. Å starte rehabilitering så tidlig som mulig etter en akutt belastningsskade er nøkkelen til å redusere tiden for å komme tilbake til idrett2 og for å redusere smerte 3,4. I moderne vestlig medisin følger klinisk førstehjelp for muskelskader prinsippene om hvile, is, kompresjon og høyde (RICE) for å stoppe skadelig blødning i muskelvevet5 og ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler for å lindre smerte6. Oppdagelsen av nye terapier som eksosomer7 og vevsteknikk8 ble potensielle behandlingsstrategier for skjelettmuskelsykdommer, og kompenserte for tidligere farmakologiske behandlingers mangler. Det kan imidlertid også øke behandlingskostnadene for pasienter, og sette dem under enormt økonomisk press9. Derfor anbefales alternative og komplementære terapier for behandling av muskel- og skjelettplager10. Tuina er mye brukt klinisk i Kina som en tradisjonell medisinsk metode og er populær blant pasienter for sin effekt og færre bivirkninger. Tuinaterapi for muskel- og skjelettlidelser kan lindre smerter og forbedre funksjonen11,12,13. Mr. Ding Jifeng, en berømt Shanghai Tuina-utøver, grunnla Dings rullemetode14. Det er en unik rulle- og knuseteknikk med et stort kraftområde, jevn og mild kraft og intens penetrasjon.
Ulike dyremodeller er basert på forskjellige etiologier. De har fordeler og ulemper, og valg av riktige og hensiktsmessige dyremodeller er av stor betydning for grunnleggende eksperimenter, som bidrar til å forstå de cellulære og molekylære signalveiene for regenerering og reparasjon etter skjelettmuskelskade for å utvikle nye terapier for behandling av skjelettmuskelsykdommer. Kjemisk induserte modeller av muskelskade er mye brukt, med injeksjoner av skjelettmuskulatur som forårsaker myofibernekrose og produserer regenererte områder som effektivt kan regenerere innen 2 uker15. Både notexin og bupivakain kan forårsake muskelskader. Notexin kan imidlertid forårsake mer alvorlig myotoksisk skade på skjelettmuskulatur enn bupivakain, og naturlig funksjonell restitusjon er relativt langsommere16. Drug intramuskulær sprøytestøping tar ikke bare mindre tid, men har også kontrollerte effekter og omfang av skjelettmuskulaturskader. Denne kvantifiserbare kontrollen gjør vellykket støping mindre vanskelig15,17.
Inflammatorisk respons er en viktig biologisk respons som har blitt grundig studert i sammenheng med myopati18,19. I de tidlige stadiene av skjelettmuskelskade forstyrrer myofibernekrose lokal muskelhomeostase, og mange inflammatoriske celler infiltrerer skadestedet og utskiller mange proinflammatoriske cytokiner19. Kreatinkinase (CK) er en tradisjonell serumbiomarkør for vurdering av skjelettmuskelskade. Imidlertid mangler den vevsspesifisitet20 og sensitivitet21, noe som begrenser evnen til å vurdere omfanget av legemiddelindusert muskelskade og indirekte rapportere omfanget av muskelgjenoppretting etter skade. Nye biomarkører, inkludert fettsyrebindende protein 3 (FABP3), har nylig vist relativt høy vevsspesifisitet og følsomhet i gnagermodeller av skjelettmuskelskade. FABP3 er en familie av bindende proteiner uttrykt primært i hjerte- og skjelettmuskelceller og involvert i fettsyremetabolisme, transport og signalering22. Derfor valgte vi en kombinasjon av to biomarkører, CK og FABP3, for å vurdere omfanget av noteksinindusert skjelettmuskelskade og restitusjon etter behandling.
Hos gnagere er musklene grunne, og hudområdet er lite, noe som også bestemmer at de forskjellige parametrene for massasje hos gnagere ikke vil være de samme som hos mennesker, for eksempel i dyreterapi, bør massasjeterapeuten behandle dem med mindre kraft ved hjelp av Dings rullemetode, og kan ikke bidra til driften av denne teknikken på grunn av den lille størrelsen på det skadede området, som til slutt kan føre til en reduksjon i effektiviteten av massasjen. Derfor benyttet eksperimentet den rullende massøren laget internt, som samsvarer med egenskapene til Dings rullemetode, for å gripe inn og evaluere den terapeutiske effekten av den notexininduserte skjelettmuskelskademodellen hos rotter, noe som bidrar til å standardisere parametrene til Tuina i eksperimentelle dyreforsøk for å undersøke den molekylære virkningsmekanismen til Tuina, en tradisjonell kinesisk medisin behandlingsmetode, på muskuloskeletale sykdommer.
Her beskrev vi en protokoll for Tuina-behandling av skjelettmuskelskade hos rotter og analyserte deretter graden av skjelettmuskelskade etter behandling for å verifisere effektiviteten av metoden. Spesielt kan modeller for skjelettmuskelskader hos rotter, inkludert, men ikke begrenset til, legemiddelinduksjon (notexin, bupivakain)16, stump kontusjon 26, knus 27 og iskemi-reperfusjon28, interveneres med Tuina. Gjennom HE-fargi…
The authors have nothing to disclose.
Denne forskningen ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation of China (Grant Nos.82174521), Innovasjonsprosjekt for studenter ved Hunan University of Chinese Medicine (2022CX109)
1 mL syringe | JIANGXI FENGLIN | 20220521 | |
1.5 microtubes | Servicebio | EP-150X-J | |
15 mL centrifuge tube | Servicebio | EP-1501-J | |
30G needle | CONPUVON | 220318 | |
5 mL blood collection tube | Servicebio | QX0023 | |
Acrylic handle | Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd | 65643645 | |
Adjustment splint | CREROMEM | 20220729 | |
Cotton Swab | INOHV | 22080215 | |
Enzyme-labeled Instrument | Rayto | RT-6100 | |
Ethanol | INOHV | 211106 | |
Fork holder | Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd | JL001 | |
Hair removal cream | Veet, France | LOTC190922002 | |
Hematoxylin dyeing solution set | Wuhan Google Biotech | G1005 | |
Imaging system | Nikon, Japan | Nikon DS-U3 | |
IODOPHOR disfecting solution | Hale&Hearty | 20221205 | |
Light microscope | Nikon, Japan | Nikon Eclipse E100 | |
Limit baffle | CREROMEM | 20220724 | |
Notexin | Latoxan S.A.S. | L8104-100UG | |
Pentobarbital sodium | Merck KGaA | P3761 | |
Rat creatine kinase (CK) ELISA kit | LunChangShuoBiotech | YD-35237 | |
Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit | LunChangShuoBiotech | YD-35730 | |
Rubber roller | Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd | 202207 | |
Screw | Weiyan Hardware | B05Z122 | |
Sprague Dawley rats | Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co. | SYXK2019-0009 | |
Spring | Bingzhang Hardware | TH001 | |
Surgical blade | Covetrus | #23 | |
Weigh controller | Iyoys | HY-XSQ |