एंटरोइड्स ऊतक शरीर क्रिया विज्ञान और पैथोफिज़ियोलॉजी, दवा विकास और पुनर्योजी चिकित्सा के अध्ययन के लिए एक उपन्यास मॉडल के रूप में उभर रहे हैं। यहां, हम एक गोजातीय प्राथमिक सेल 2 डी एंटरॉइड-व्युत्पन्न संस्कृति प्रणाली का वर्णन करते हैं जो प्रासंगिक ऊतक कोशिका प्रकारों के साथ सह-संस्कृति की अनुमति देता है। यह मॉडल गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल अनुसंधान मॉडलिंग के लिए एक अनुवाद संबंधी लाभ प्रदान करता है।
ऑर्गेनॉइड सेल कल्चर सिस्टम ऊतकों में देखी गई जटिलता को पुन: प्राप्त कर सकते हैं, जिससे उन्हें मेजबान-रोगज़नक़ इंटरैक्शन का अध्ययन करने, दवा प्रभावकारिता और विषाक्तता का मूल्यांकन करने और ऊतक बायोइंजीनियरिंग में उपयोगी बना दिया जा सकता है। हालांकि, वर्णित कारणों के लिए इन मॉडलों को लागू करना इन मॉडलों की त्रि-आयामी (3 डी) प्रकृति के कारण सीमित हो सकता है। उदाहरण के लिए, पाचन रोगों का अध्ययन करने के लिए 3 डी एंटॉइड कल्चर सिस्टम का उपयोग आंतों के लुमेन और इसके स्रावित पदार्थों की दुर्गमता के कारण चुनौतीपूर्ण है। दरअसल, रोगजनकों के साथ 3 डी ऑर्गेनोइड की उत्तेजना के लिए या तो ल्यूमिनल माइक्रोइंजेक्शन, 3 डी संरचना के यांत्रिक व्यवधान, या एपिकल-आउट एंटॉइड की पीढ़ी की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, इन ऑर्गेनोइड को प्रतिरक्षा और स्ट्रोमल कोशिकाओं के साथ सह-सुसंस्कृत नहीं किया जा सकता है, जो पैथोफिजियोलॉजिकल डायनेमिक्स में गहन यंत्रवत विश्लेषण को सीमित करता है। इसे दरकिनार करने के लिए, हमने एक गोजातीय प्राथमिक सेल द्वि-आयामी (2 डी) एंटॉइड-व्युत्पन्न मोनोलेयर संस्कृति प्रणाली को अनुकूलित किया, जिससे अन्य प्रासंगिक सेल प्रकारों के साथ सह-संस्कृति की अनुमति मिली। स्वस्थ वयस्क मवेशियों से अलग किए गए इलियल क्रिप्ट को 3 डी ऑर्गेनोइड उत्पन्न करने के लिए सुसंस्कृत किया गया था जो भविष्य में उपयोग के लिए क्रायोप्रिजर्व थे। पुनर्जीवित 3 डी एंटॉइड्स का उपयोग करके एक 2 डी मोनोलेयर बनाया गया था जो एकल कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए पारित और बाधित किया गया था, जो तहखाने झिल्ली निकालने-लेपित ट्रांसवेल सेल कल्चर आवेषण पर वरीयता प्राप्त थे, जिससे उनकी शिखर सतह उजागर हुई। आंतों की मोनोलेयर ध्रुवीयता, सेलुलर भेदभाव, और बाधा समारोह को इम्यूनोफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके और ट्रांसपीथेलियल विद्युत प्रतिरोध को मापने की विशेषता थी। मोनोलेयर की एपिकल सतह की उत्तेजना ने मोनोलेयर की अपेक्षित कार्यक्षमता का खुलासा किया, जैसा कि एपिकल और बेसल दोनों डिब्बों से साइटोकिन स्राव द्वारा प्रदर्शित किया गया है। वर्णित 2 डी एंटॉइड-व्युत्पन्न मोनोलेयर मॉडल मेजबान-रोगज़नक़ इंटरैक्शन और आंतों के शरीर विज्ञान, दवा विकास और पुनर्योजी चिकित्सा की जांच में बहुत अच्छा वादा करता है।
अनुसंधान में पशु मॉडल रोग पैथोफिज़ियोलॉजी और संक्रमण के दौरान मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की गतिशीलता की हमारी समझ को बढ़ाने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं और उपन्यास निवारक और चिकित्सीय रणनीतियों 1,2,3,4के विकास का समर्थन करते हैं। ये मॉडल जानवरों में अनुसंधान खोज और उन्नति का समर्थन करते हैं और मानव स्वास्थ्य अनुसंधान की प्रगति के लिए महत्वपूर्ण हैं। दशकों से, कृंतक मॉडल ने प्रतिरक्षा तंत्र और मानव रोगों 3,5,6,7 के लिए मौलिक जीव विज्ञान अनुसंधान में प्रगति को रेखांकित किया है। जबकि कृंतक मॉडल स्क्रीनिंग और प्रारंभिक विकास अनुसंधान में महत्वपूर्ण हैं, बड़े पशु मॉडल चिकित्सीय प्रभावकारिता और सुरक्षा परीक्षण 1,3,4,5 सहित प्रारंभिक खोज और बाद के विकास अध्ययनों दोनों में मानव रोगों के शोध में अधिक प्रासंगिक तुलना प्रदान करते हैं। पशुधन क्रिप्टोस्पोरिडिओसिस, साल्मोनेलोसिस, तपेदिक, श्वसन सिंकिटियल वायरस औरब्रुसेलोसिस 1,7,8 सहित कुछ बीमारियों के लिए मानव अनुप्रयोगों के लिए अधिक कुशल अनुवाद के लिए कृंतक मॉडल की तुलना में स्पष्ट लाभ प्रदान करता है। दरअसल, ये रोग और अन्य मवेशियों में अनायास विकसित होते हैं, जो मनुष्यों के लिए कई समान रोग रोगजनन और प्रतिरक्षा प्रक्रियाओं को साझा करते हैं, और एक बहिष्कृत आबादी के रूप में, मवेशी मानव प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने वाली आनुवंशिक और पर्यावरणीय विविधता की नकल करते हैं 5,8,9,10 . संक्रामक रोग अनुसंधान के लिए गोजातीय मॉडल के लाभों को पहले एक परिष्कृत संस्कृति प्रणाली को नियोजित करके और फिर विवो अध्ययन में चरणबद्ध तरीके से लागू करके अधिकतम किया जा सकता है। एक अत्यधिक जटिल गोजातीय व्युत्पन्न संस्कृति प्रणाली का प्रारंभिक उपयोग सफल अनुवाद और अनुप्रयुक्त अनुसंधान की संभावना में सुधार करते हुए जीवित पशु अध्ययन की संख्या को काफी कम कर सकता है। संस्कृति मॉडल को इष्टतम भविष्य कहनेवाला वैधता के लिए एक अंग स्तर पर रोग प्रक्रियाओं को पुन: व्यवस्थित करना चाहिए, देशी ऊतक माइक्रोएन्वायरमेंट को स्थानिक और कार्यात्मक रूप से बनाए रखना चाहिए।
म्यूकोसल प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया एक बहुआयामी प्रणाली है जिसमें गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल एंटरोसाइट्स और म्यूकोसल सतह11के नीचे स्थित प्रतिरक्षा कोशिकाओं की विविध आबादी द्वारा गठित एक अत्यधिक कुशल बाधा शामिल है। जीआई होमियोस्टेसिस को बनाए रखने और एंटरिक रोगजनकोंके खिलाफ प्रतिरक्षा सुरक्षा शुरू करने में संक्रमण के दौरान यह अत्यधिक जटिल प्रणाली महत्वपूर्ण है। एंटरोसाइट्स और अंतर्निहित जन्मजात प्रतिरक्षा कोशिकाओं के बीच संचार रोगजनक सूक्ष्मजीवों के खिलाफ सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के विकास की शुरुआत करता है। जैसे, संस्कृति प्रणालियों है कि जटिलता के अपने स्तर में तुलनात्मक हैं मेजबान आंत्र रोगज़नक़ बातचीत में एक इष्टतम जांच के लिए आवश्यक हैं और आंत्र शरीर क्रिया विज्ञान और दवा की खोज और विकास12,13 को समझने में अत्यधिक प्रभावी हैं. ऑर्गेनोइड एक मजबूत संस्कृति प्रणाली है जो मूल14,15 के ऊतक की वास्तुकला और कार्य जैसा दिखता है। इन मॉडलों की बहुकोशिकीयता विविध सेल आबादी की भूमिका और आंत्र स्वास्थ्य और रोग12,14 में शामिल सेलुलर बातचीत में जांच की अनुमति देता है. हालांकि, अनुसंधान में मानव-व्युत्पन्न ऑर्गेनॉइड मॉडल वर्तमान में मानव आंतों के उपकला कोशिकाओं की पर्याप्त मात्रा और लगातार गुणवत्ता और संस्कृति में सीमित सेल व्यवहार्यता प्राप्त करने की कठिनाई से सीमित हैं। अमर सेल लाइनों का उपयोग लगातार इन मॉडलों में समरूप संस्कृतियों की उच्च पैदावार प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है; हालांकि, रूपांतरित कोशिकाओं स्वाभाविक रूप से विविधता और गैर तब्दील उपकला कोशिकाओं16,17 की कार्यात्मक जटिलता की कमी. गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल रोगों और शरीर विज्ञान की जांच के लिए एक मॉडल के रूप में गोजातीय ऊतक से प्राप्त संस्कृतियों का उपयोग करने के फायदों में आसानी शामिल है जिसके साथ ऊतक के नमूने लगातार स्वस्थ दाताओं से प्राप्त किए जा सकते हैं, बेहतर सेल व्यवहार्यता, और अधिक सेलुलर विविधता केवल गैर-अमर ऊतक के साथ प्राप्त की जा सकती है। तुलनात्मक ऊतक ट्रांसक्रिप्टोमिक्स और आंतों के ऑर्गेनोइड के लक्षण वर्णन संरक्षित ऑर्थोलॉगस जीन और मनुष्यों और मवेशियों के बीच सेलुलर क्षमता में समानताएं प्रकट करते हैं18. इसलिए, एक गोजातीय ऑर्गेनोइड-व्युत्पन्न संस्कृति प्रणाली मानव आंतों के रोगों की जांच में फायदेमंद हो सकती है, जिसके निष्कर्ष आसानी से मानव चिकित्सा के लिए अनुवाद योग्य हैं।
यहां वर्णित प्रोटोकॉल एक गोजातीय एंटॉइड-व्युत्पन्न 2 डी प्राथमिक सेल संस्कृति प्रणाली का उपयोग करके एंटरिक रोगजनकों या यौगिकों और आंतों के शरीर विज्ञान के लिए मेजबान प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए एक प्रभावी मंच का विवरण देता है। 3 डी ऑर्गेनोइड के विपरीत, ट्रांसवेल आवेषण पर उत्पन्न 2 डी संस्कृति प्रणाली प्रतिरक्षा या स्ट्रोमल कोशिकाओं के साथ आंतों की कोशिकाओं की दोहरी संस्कृति की अनुमति देती है, जिससे ऊतक-स्तर की गतिशीलता में अध्ययन की अनुमति मिलती है। जैव चिकित्सा अनुसंधान, दवा विकास और प्रभावकारिता परीक्षण में अनुप्रयोगों के साथ, यह शारीरिक रूप से प्रासंगिक मॉडल मवेशियों और लोगों दोनों के स्वास्थ्य और उन्नति को समान रूप से लाभान्वित कर सकता है।
यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल आंतों शरीर क्रिया विज्ञान और आंत्र विकारों की जांच के लिए एक शारीरिक रूप से प्रासंगिक मॉडल का वर्णन करता है. कई शोध समूहों ने गोजातीय एंटॉइड संस्कृतियों की पीढ़ी का वर्णन किया है, जिसमें 2 डी मोनोलेयर 16,19,20,21,22,23,24 शामिल हैं। जबकि मोनोलेयर पीढ़ी तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण नहीं है, लगातार सफल संस्कृतियों को विकसित करने में कई-मिनट के कदम महत्वपूर्ण हैं। जैसे, प्रकाशित साहित्य में संक्षेप में वर्णित विधियों का उपयोग करके 2 डी मोनोलेयर्स की प्रजनन क्षमता एक शोधकर्ता नौसिखिए के लिए ऑर्गेनोइड के क्षेत्र में चुनौतीपूर्ण हो सकती है। यहां वर्णित प्रोटोकॉल इन प्रोटोकॉल और अन्य प्रजातियों में प्रकाशित लोगों से अनुकूलित है, जो ट्रांसवेल आवेषण पर मोनोलेयर पीढ़ी के लिए चरण-दर-चरण मार्गदर्शिका प्रदान करता है जो अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है।
इस के साथ साथ उल्लिखित प्रोटोकॉल आसानी से प्रयोगात्मक डिजाइन या अभिकर्मकों की उपलब्धता के विशिष्ट लक्ष्यों फिट करने के लिए संशोधित किया जा सकता है. दरअसल, इस प्रोटोकॉल के बाद, सफल संस्कृतियों एक कम सेल घनत्व (जैसे, 2.5 एक्स 104) या एफबीएस की अनुपस्थिति में, अन्य प्रकाशनों24 द्वारा वर्णित के रूप में एक कम सेल घनत्व पर monolayers बोने द्वारा प्राप्त किया जा सकता है. हालांकि, इन मापदंडों को बदलने के लिए एक संगम मोनोलेयर स्थापित करने के लिए एक बढ़ी हुई संस्कृति की आवश्यकता हो सकती है। जैसे, यदि प्रतिरक्षा कोशिकाओं के साथ सह-संस्कृति सहित अध्ययन डिजाइन के अभिन्न अंग अन्य कारक, प्रयोग के लिए एक विशिष्ट समय पाठ्यक्रम निर्धारित करते हैं, तो बीजारोपण घनत्व को आवश्यकतानुसार बदला जा सकता है। जबकि अन्य तहखाने झिल्ली योगों 3 डी enteroids और 2 डी monolayers उत्पन्न करने के लिए इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया एक के स्थान पर प्रतिस्थापित किया जा सकता है, इन इष्टतम तहखाने झिल्ली से मीडिया अनुपात निर्धारित करने के लिए कुछ अनुकूलन की आवश्यकता होगी.
वर्णित पद्धति में ट्रांसवेल आवेषण के आवेदन में पारंपरिक प्लास्टिकवेयर और 3 डी एंटॉइड संस्कृतियों पर मोनोलेयर विकास पर कई लाभ हैं। मानक टिशू कल्चर प्लेटों की तुलना में, मोनोलेयर संस्कृतियों के लिए ट्रांसवेल्स का उपयोग सेलुलर भेदभाव और संगठन को एक तरह से बढ़ावा देता है जो आंतों के क्रिप्ट14,25 के लिए समानता को बरकरार रखता है। आंतों के उपकला अवरोध शरीर में विषाक्त पदार्थों और सूक्ष्मजीवों के स्थानांतरण को रोकने में महत्वपूर्ण है, साथ ही साथ पोषक तत्वों के अवशोषण की सुविधा प्रदान करते हैं। जैसे, यह समझना महत्वपूर्ण है कि आंत की बाधा अखंडता स्वस्थ में कैसे कार्य करती है और आंतों के विकारों के दौरान या यौगिकों के जवाब में बदल जाती है। 3 डी enteroid संस्कृतियों के विपरीत, आंतों बाधा अखंडता का उद्देश्य मूल्यांकन संभव है जब transwells पर monolayers के संयोजन और TEER मापने, के रूप में यहाँ 14,25 में प्रदर्शन किया. ट्रांसवेल्स पर 2 डी मोनोलेयर उत्पन्न करना भी प्रतिरक्षा या स्ट्रोमल कोशिकाओं जैसे प्रासंगिक सेल प्रकारों के साथ दोहरी संस्कृति की अनुमति देता है। यह आंतों की कोशिकाओं और ऊतक माइक्रोएन्वायरमेंट की कोशिकाओं के बीच गंभीर रूप से महत्वपूर्ण क्रॉसस्टॉक को चिह्नित करने की अनुमति देता है, जिसे 3 डी संस्कृतियों के साथ प्राप्त नहीं किया जा सकता है। मोनोलेयर की शिखर सतह का एक्सपोजर न केवल रोगजनकों और यौगिकों और ल्यूमिनल उत्पादों के संग्रह के लिए प्रयोगात्मक जोखिम की अनुमति देता है, बल्कि आंतों के शरीर विज्ञान और रोग के अन्य पहलुओं में अध्ययन भी करता है, जिसमें आंतों के माइक्रोबायोटा और आणविक अवशोषण या परिवहन शरीर विज्ञान13 की जांच शामिल है। एपिकल और बेसल आंतों की सतहों पर स्वतंत्र नियंत्रण 3 डी एंटरॉइड मॉडल पर एक अलग लाभ है।
कई परीक्षण प्रयोगों के माध्यम से, हमने प्रोटोकॉल की सफलता में योगदान देने वाले प्रमुख चरणों की पहचान की। जबकि पूरे आंतों के ऊतकों के नमूनों को रात भर प्रशीतित किया जा सकता है और अगले दिन संसाधित किया जा सकता है, ऊतक पृथक्करण और क्रिप्ट टुकड़ा चरणों के अलगाव को पृथक क्रिप्ट अंशों के विघटन को रोकने के लिए तुरंत किया जाना चाहिए। पीबीएस वॉश को पूरा करने के बाद, वॉश मीडिया में क्रिप्ट को सेंट्रीफ्यूज करने से क्रिप्ट ब्रेकडाउन को रोकने में मदद मिल सकती है, जैसा कि चरण 2.3.10 में विस्तृत है। एंटॉइड्स को पास करते समय या मोनोलेयर गठन के लिए उनकी कटाई करते समय, बीएमई गुंबदों से एंटॉइड को अलग करना आवश्यक है। बीएमई को भंग करने में सहायता के लिए वॉश मीडिया बर्फ के ठंडे होना चाहिए। इसके विपरीत, पूर्व-गर्म TrypLE का उपयोग करना और सेल निलंबन को दो बार फ़िल्टर करना मोनोलेयर पीढ़ी के लिए आवश्यक एकल कोशिकाओं को बनाने में मदद कर सकता है। अंत में, मैन्युअल रूप से संख्या 8 के आकार में प्लेट पैंतरेबाज़ी समान रूप से ट्रांसवेल डालने पर एकल कोशिकाओं को फैलाने में मदद कर सकते हैं.
इस प्रोटोकॉल की एक महत्वपूर्ण सीमा यह है कि 2 डी मोनोलेयर्स एक परिपक्व होल्स्टीन स्टीयर (>2 वर्ष की आयु) से उत्पन्न एंटॉइड स्टॉक से उत्पादित किए गए थे। बछड़ों में परिपक्व जठरांत्र संबंधी मार्ग इष्टतम परिणाम उपज के लिए वर्णित प्रोटोकॉल के लिए मामूली संशोधनों की आवश्यकता हो सकती है. मवेशियों की नस्लों की आंतों के शरीर क्रिया विज्ञान में नस्ल-विशिष्ट अंतर साहित्य26 में वर्णित किया गया है। हालांकि यह अज्ञात है कि क्या ये अंतर एंटॉइड और बाद में मोनोलेयर पीढ़ी को प्रभावित कर सकते हैं, हमें संदेह है कि किसी भी अंतर के परिणामस्वरूप हमारे प्रोटोकॉल में केवल मामूली बदलाव होंगे। इसके अतिरिक्त, 2D संस्कृति मॉडल के कुछ अंतर्निहित नुकसान हैं। 3 डी enteroid मॉडल की तुलना में, 2 डी संस्कृतियों आंतों के ऊतकों वास्तुकला और सेलुलर विविधता के कुछ पहलुओं की कमी हो सकती है और प्रतिबंध और चुनौतियों 2 डी संस्कृति13 के प्रसार के साथ जुड़े पैदा कर सकते हैं. फिर भी, अध्ययनों से पता चलता है कि कुछ मोनोलेयर अपेक्षित क्रिप्ट संगठन27 का अनुकरण कर सकते हैं, और इनमें से कुछ सीमाओं को वायु-तरल इंटरफ़ेस के साथ 2 डी संस्कृतियों की स्थापना करके भी दूर किया जा सकता है। फिर भी, इस मॉडल की सीमाओं को यह निर्धारित करने के लिए पूरी तरह से विचार किया जाना चाहिए कि इसका आवेदन प्रयोगात्मक प्रश्न के लिए उपयुक्त है या नहीं।
यह प्रोटोकॉल एक अनुकूलित संस्कृति प्रणाली का वर्णन करता है जो गोजातीय इलियम से प्राप्त एंटॉइड का उपयोग करके गोजातीय जठरांत्र संबंधी मार्ग को मॉडल करता है ताकि ट्रांसवेल आवेषण पर मोनोलेयर बनाया जा सके। संक्रामक रोग अनुसंधान से लेकर दवा की खोज और पुनर्योजी चिकित्सा तक अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ, यह उच्च-थ्रूपुट संस्कृति प्रणाली निवारक और चिकित्सीय रणनीतियों के अभूतपूर्व विकास को जन्म दे सकती है जो पशु और मानव स्वास्थ्य के लिए पारस्परिक रूप से फायदेमंद हो सकती हैं।
The authors have nothing to disclose.
हम मिडवेस्टर्न यूनिवर्सिटी में सेलुलर और आणविक कोर सुविधा के उपयोग को स्वीकार करते हैं।
0.2 mL pipette tip | MidSci | PR-200RK-S | |
1 µm PET 24-well cell culture inserts | Corning | 353104 | |
1000 mL pipette tip | MidSci | PR-1250RK-S | |
22 G needle | Becton, Dickinson and Company | 305156 | |
24-well culture vessel | Corning | 353504 | |
40 μm cell strainer | Corning | 431750 | |
50 mL centrifuge tube | Fisher scientific | 14-955-240 | |
5-mL pipet tip | Fisher scientific | 30075307 | |
5 mL syringe | Becton, Dickinson and Company | 309647 | |
5 mL tube | Eppendorf | 30119401 | |
Anti-Cytokeratin -18 (C-04) | Abcam | AB668-1001 | |
B-27 supplement without vitamin A | Gibco | 12-587-010 | |
Belysa software | Luminex | 40-122 | Immunoassay curve fitting software |
Bovine serum albumin (BSA) | Fisher bioreagents | BP9704-100 | |
Caspofungin acetate | Selleckchem | S3073 | |
Cell lifter | Fisher Scientific | 08-100-241 | |
Chromogranin-A (E-5) | Santa Cruz Biotechnology | SC-271738 | |
Coverslips | Fisher scientific | 12-540-C | |
Cryovials | Neptune scientific | 3471.X | |
Cultrex Ultimatrix RGF BME | R&D Systems | BME001-05 | |
DAPI | MilliporeSigma | D9542-5MG | |
Dissecting scissors | VWR | 82027-588 | |
Dithiothreitol (DTT) solution | Thermo Scientific | FERR0861 | |
DMEM/ F-12 1.1 medium (with L-glutamine, without HEPES) | Cytiva | SH30271.01 | |
E-cadherin | Cell Signaling Technology | #3195 | |
Ethylenediaminetetraacetic acid | Fisher Scientific | BP2482500 | |
FBS | Corning | MT35070CV | |
Gentamicin | Gibco | 15710064 | |
Glass microscope slide | Fisher scientific | 12-550-07 | |
Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11001 | |
Goat anti-mouse Alexa Fluor 647 | Invitrogen | A21235 | |
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 555 | Invitrogen | A21428 | |
Hemacytometer | Bio-Rad | 1450015 | |
IntestiCult organoid Differentiation medium (Human) | StemCell Technologies | 100-0214 | |
IntestiCult organoid growth medium (Human) | StemCell Technologies | 0-6010 | |
Keyence BZ-X700 | Keyence | BZ-X700 | |
LY2157299 (Galunisertib) | Selleckchem | S2230 | |
MAGPIX system | Luminex | Magpix system | Compact multiplexing unit |
Microscope | Keyence | BZ-X700 | |
MILLIPLEX Bovine Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel | MilliporeSigma | BCYT1-33K | Bead-based multiplex assay |
Mr. Frosty container | Nalgene | 5100-0001 | |
Non-Enzymatic Cell Dissociation Solution | ATCC | 30-2103 | |
NutriFreeze D10 Cryopreservation Media | Biological Industries | 05-713-1B | |
Orbital shaking platform | Thermo Fisher | 88880021 | |
Pam3Csk4 | invivogen | tlrl-pms | |
Parafilm sealing film | dot scientific inc. | #HS234526C | |
Paraformaldehyde 16% solution | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
Phalloidin-FITC | R&D Systems | 5782/12U | |
Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP399-20 | |
Prolong Glass Antifade | Invitrogen | P36982 | |
Rabbit anti-human Lyzozyme (EC3.2.1.17) | Agilent technologies | A009902-2 | |
SB202190 (FHPI) | Selleckchem | S1077 | |
Shaking water bath | Thermo Fisher | MaxQ 7000 | |
Sodium Azide | VWR | BDH7465-2 | |
Streptomycin | Teknova | S6525 | |
Trypan Blue dye | Gibco | 15250-061 | |
TrypLE express enzyme | Life technologies | 12604013 | |
Tween 20 | Fisher Scientific | BP337 | |
Voltohmmeter | MilliporeSigma | Millicell ERS-2 | |
Y-27632 | Selleckchem | S1049 |