Subclavia vene blodprøvetaking i bevisste rotter

Summary

Her presenterer vi en kombinasjon av effektive rotterestriksjoner og punkteringsmetoder i subklaviske vener som muliggjør rask, sikker og gjentatt blodoppsamling hos rotter uten bedøvelse.

Abstract

Det finnes flere etablerte metoder for å ta gjentatte blodprøver fra rotter, der de mest brukte metodene er lateral prøvetaking av haleårer uten bedøvelse og prøvetaking av halsvene med anestesi. Imidlertid krever de fleste av disse metodene hjelp og bedøvelsesutstyr og utgjør noen ganger vanskeligheter når det gjelder blodinnsamling eller dårlig kvalitet på blodprøver. I tillegg forbruker disse metodene for blodinnsamling betydelig tid og menneskelige ressurser når gjentatt blodprøvetaking er nødvendig for et stort antall rotter. Denne studien presenterer en teknikk for repeterende blodprøvetaking hos ikke-bedøvede rotter av en enkelt dyktig person. Meget tilfredsstillende blodprøver kan tas ved punktering av vena subclavia. Metoden viste en imponerende total suksessrate på 95%, med en mediantid på bare 2 minutter fra rottesikring til fullføring av blodinnsamling. Videre forårsaker det ingen skade på rottene å utføre påfølgende blodsamlinger innenfor det angitte området. Denne metoden er verdt å fremme for blodinnsamling, spesielt i store farmakokinetiske studier.

Introduction

Rotter er et av de vanligste forsøksdyrene, og det er mange måter å få tak i blodprøver på. For eksperimenter som involverer en enkelt blodsamling i sluttfasen, kan en tilstrekkelig mengde blod oppnås gjennom hjertepunktering eller abdominal aorta blodinnsamling¹. Noen studier krever imidlertid gjentatt blodinnsamling fra rotter for rutinemessig blod eller biokjemisk analyse, spesielt i farmakokinetikk- og toksikologiske studier, hvor gjentatt blodinnsamling er nødvendig for å bestemme absorpsjon, distribusjon og metabolisme av legemidler^.

For tiden, selv om blodinnsamling i halevene er den vanligste metoden for blodprøvetaking fra rotter, til tross for at det ikke krever anestesi, kan denne metoden være utfordrende for gjentatte samlinger, og volumet av blod som samles inn er relativt lite ^3,4. I tillegg, selv om blod kan samles fra saphenøse og penile årer, er mengden blod oppnådd begrenset, og anestesi kreves ^1,5. Videre gir blodprøver samlet fra submandibulær venøs plexus, samt sublinguale, jugular, og subclavian vener høyere kvalitet prøver, men vanligvis krever anestesi eller hjelp av flere individer 1,6,7,8,9. Endelig krever retro-orbital sinus / kanalblodinnsamling ikke bare anestesi, men kan også potensielt forårsake skade og stress for rotter⁹.

Kvaliteten på blodprøver som vanligvis oppnås fra store vener er generelt av høyeste standard¹. For tiden har noen studier funnet at kontinuerlig mikroprøvetaking gjennom halsvenen er en svært egnet metode for toksikologisk forskning hos rotter, selv om denne metoden vanligvis krever jugularveterisering 10,11,12. Derfor er det verdt å utforske hvordan man får blodprøver av høy kvalitet i samsvar med 3R-prinsippet for dyreforsøk uten kirurgisk inngrep. Hensikten med denne studien var å presentere en metode for effektivt å ekstrahere blod fra vena subclavia hos rotter. Denne teknikken muliggjør rask innsamling av tilfredsstillende prøver gjennom en enkeltpersonsprosedyre uten behov for anestesi.

Protocol

Denne studien fulgte retningslinjene som er skissert i den 8. utgaven av Veiledning for stell og bruk av forsøksdyr13. Forskningen mottok godkjenning fra etikkomiteen ved Lanzhou University Second Hospital og ble dokumentert i samsvar med The ARRIVE guidelines 2.014. Tolv friske Wistar-rotter (seks hanner som veide 290-330 g og seks hunner som veide 250-280 g) i alderen 12-16 uker ble innkvartert i GLP Animal Laboratory ved Lanzhou University i 3 dager før selve forsøket…

Representative Results

Plasmaprøver av høy kvalitet viser en blekgul nyanse, klarhet og gjennomsiktighet, uten rødt skjær eller koagulering, som vist i figur 2A. Figur 2B viser hemolyse (venstre side) eller koagulasjon (høyre side) som følge av henholdsvis feilaktige prosedyrer. I løpet av 96 blodinnsamlingsøkter innen 4 dager var gjennomsnittlig innsamlingstid for enkelt blod for gruppe A og B henholdsvis 119,87 ± 33,62 s og 123,28 ± 30,96 …

Discussion

Selv om blodinnsamling i halevene er den vanligste metoden for gjentatt blodprøvetaking hos rotter, kan den påvirkes av anestesimedisiner, og på grunn av den lille størrelsen på halevenen er mengden blod som kan samles inn i et enkelt tilfelle begrenset, noe som fører til en lengre blodinnsamlingsvarighet ^4,5. Selv om høyytelsesvæskekromatografi (HPLC) -tandem massespektrometri (MS / MS) -systemer kombinert med kapillær mikrosampling (CMS) av rottehaleå…

Materials

0.75% normal saline	Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd.	——	Prepared heparin sodium solution
1 mL Pasteur pipette	Biosharp	BS-XG-01-NS	Blood collection
1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm)	Shinva Medical Instrument Co.,Ltd.	0.45*12RWLB	Blood collection
1.5 mL Eppendorf tube	Biosharp	BS-15-M	Blood storage and collection
75% medical alcohol	Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.	——	Disinfection of rat blood collection site
Centrifuge tube holder	Biosharp	BS-05/15-SM60	——
Electronic scale	Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd.	JE1002	Weigh
Heparin sodium injection	Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.	——	Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL
Low temperature centrifuge	HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument  Co., Ltd.	H1750R	Separation of serum