골육종 모델 마우스에서 중국 전통 의학의 달인 공식에 대한 Gavage 전략
Summary
이 프로토콜은 골육종 마우스 모델의 Yiqi Jiedu 달인을 예로 들어 달인 공식 및 gavage 기술의 자세한 표준화 프로세스를 제공합니다. 동물 보호에 대해 설명하고 연구 데이터의 신뢰성을 개선하여 생체 내 달인 공식의 치료 효능 및 분자 메커니즘을 조사하기 위한 효과적인 전략을 제공합니다.
Abstract
달인 제형은 중국 전통 의학에서 가장 일반적으로 사용되는 제형이며 경구 투여에 의해 수천 년 동안 임상 실습에 적용되어 빠른 효과, 쉬운 흡수 및 환자의 특정 증후군에 따른 개별화된 치료가 특징입니다. 달인 공식의 품질은 중국 전통 의학의 임상 효능에 직접적인 책임이 있습니다. 따라서 달인 공식의 표준화 과정은 주관적인 요인으로 인한 달인 품질의 차이를 피하는 데 중요합니다. 한편, 임상실험의 한계로 인해 생쥐와 같이 인간 질병을 가진 작은 동물은 한의학의 달인 공식을 포함하여 다양한 중재의 치료 효능과 포괄적인 메커니즘을 탐구하기 위해 의학 연구에 자주 사용됩니다. 결과적으로, 중요한 경구 투여 방법으로서, 숙련된 위부 기술은 잠재적인 식도 손상 및 약물 유출을 방지하기 위해 특히 중요하며, 이는 각 모델 동물에 동일한 양의 약물이 투여되도록 보장하여 정확한 실험 결과를 이끌어 낼 것입니다. 또한, 동물 복지를 보호하고 사용되는 동물의 수를 최소화하기 위해 표준화된 달인 공식 제조 방법과 숙련된 개비 전략이 필요합니다. 여기에서는 골육종 마우스 모델에서 Yiqi Jiedu 달인을 예로 들어 달인 공식과 gavage 기술의 자세한 표준화 과정을 보고했습니다. 효능은 종양 부피에 의해 평가되었습니다. 이 프로토콜은 동물 보호를 극대화하고 연구 데이터의 신뢰성을 향상시켜 향후 중국 전통 의학에 대한 달인 공식의 치료 효능 및 분자 메커니즘을 조사하기 위한 효과적인 전략을 제공할 것입니다.
Introduction
달인 공식은 중국 전통 의학과 액체 의약 1,2의 가장 일반적으로 사용되는 제형입니다. 중국 전통 의학의 달인 공식은 약초를 물에 담근 후 물에 달인 다음 여과하여 찌꺼기를 버리는 방식으로 가공됩니다.
달인 제형은 특히 한의학의 증거 기반 치료의 특성에 따라 임상적 필요성에 따라 개별화될 수 있기 때문에 경구 투여를 통한 이 제형은 구체적이고 대체할 수 없는 장점으로 수천 년 동안 임상 실습에 적용되어 왔습니다 3,4. 달인 공식의 품질은 임상 효능과 직접적인 관련이 있습니다. 따라서 활성 성분이 최대한 추출되고 보호되도록 표준화된 달인 방법의 원칙에 따라 달인 공식을 준비해야 합니다3. 한편, 달인 준비가 된 의약품은 임상 실습에 사용되는 생 한약의 주요 형태입니다. 처방된 달인 준비가 된 의약품의 품질 표준 및 생산 방법은 중국 약전2의 규정을 준수해야 합니다. 또한, 처방된 달인 준비가 된 약은 찬물에 30분 이상 담가야 하며, 그 전에 특수 약제 냄비에 달여5. 연구에 따르면 대부분의 유효 성분은 두 번 달여서 추출할 수 있으며, 의료기관에서 한약의 달임실 관리 실무 강령에서도 달인을 두 번 하도록 규정하고 있습니다 4,6,7. 딱딱한 식감이나 강장제와 같은 특별한 한약재를 처방하는 경우 달인 시간을 연장하는 것이 좋습니다. 달인 제조법과 직접 접촉하는 달인 기구 및 보관 용기는 처방된 달인 준비가 된 약이 담겨있는 용기에서 시작하여 화학적으로 안정적이어야 하며 캐서롤, 세라믹, 유리 및 스테인리스 스틸과 같은 뚜껑이 있어야 합니다. 그러나 알루미늄 및 일반 플라스틱 제품은 사용해서는 안 되며, 철 및 기타 부식성 기구는 치료 효능을 감소시키고 심지어 해로운 영향을 미칠 수 있는 화학 반응을 피하기 위해 금지되어야 합니다 4,6,7.
임상 실험 수행의 한계로 인해 생쥐와 같은 인간 질병을 지닌 작은 동물은 의학 연구에서 종종 중국 전통 의학의 달인 공식을 포함한 다양한 중재의 치료 효능과 포괄적인 메커니즘을 탐구하는 데 사용됩니다 8,9; 그러나 인간과 달리 달인 공식은 매일 준비해야 하며, 함께 혼합해야 하며, 임상 실습에서 하루에 2번 신선하게 투여해야 합니다. 동물은 필요한 용량에 맞춰 자발적으로 약을 복용할 수 없으며, 현재 한의학과 관련된 대부분의 동물실험은 달인 공식의 위비지 기반 경구 투여입니다. 생체 내 동물 실험에 사용되는 달인 공식은 미리 준비하고, 분주하고, -20 °C에서 보관하고, 사용 직전에 해동해야합니다 3,4,10. 더욱이, 수준 이하의 동물 고정과 주사 바늘 조작은 불필요한 부상과 부정적인 감정의 위험을 증가시킵니다. 그러므로, 경구용 약물 전달의 중요한 방법으로서, 가능한 식도 손상 및 약물 유출을 피하기 위해 숙련된 위부 기술이 특히 중요하며, 따라서 정확한 실험 결과를 얻기 위해 각 모델 동물이 동일한 양의 처방된 생약을 받도록 합니다. 여기에서는 한의학의 달인 공식에 대한 개비지 프로토콜을 제공합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
중국 전통 의학에서 처방된 약초의 임상적 효능은 주로 투여된 용량 및 제형과 관련이 있습니다. 따라서 표준화된 달임 전략의 수립과 숙련된 관리 프로세스는 임상 실습뿐만 아니라 실험 결과의 신뢰성을 향상시키는 데 필요합니다.
이 연구에서 우리는 먼저 한약의 임상 실습에 사용되는 한약재의 표준화된 달임에 대한 자세한 전략을 제공하여 사람들이 과학적으로 달인 약…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
현재 연구는 (1) 국립자연과학재단(81973877 및 82174408), (2) 중국 국가 중점 R&D 프로그램(2020YFE0201600), (3) 상하이 최우선 연구 센터 건설 프로젝트(2022ZZ01009), (4) 병원 TCM 준비의 산업 전환을 위한 상하이 협력 혁신 센터, (5) 상하이 중의약 대학 예산 내 연구 프로젝트(2021LK047)의 보조금으로 지원됩니다.
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
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