私たちは、思春期のC57BL/6マウスに対して、男性と女性の両方で機能し、個別の青年期の曝露を可能にする加速社会的敗北ストレスモデルを開発しました。このモデルへの曝露は社会的回避を誘発しますが、敗北した雄と雌のマウスのサブセットでのみ行われます。
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この記事について
サマリー
要約
思春期の社会的逆境は蔓延しており、メンタルヘルスの軌道に悪影響を与える可能性があります。思春期の男性と女性のげっ歯類における社会的ストレスのモデル化は、進行中の脳の発達と行動結果への影響を理解するために必要です。慢性的な社会的敗北ストレスパラダイム(CSDS)は、成体の雄のげっ歯類がその領域に侵入する侵入者に対して示す攻撃的な行動を活用することにより、成体のC57BL/6雄マウスの社会的ストレスをモデル化するために広く使用されています。このパラダイムの利点は、敗北したマウスを、最後の敗北セッションの24時間後の社会的行動の個人差に基づいて、回復力のあるグループと感受性の高いグループに分類できることです。このモデルを青年期のC57BL/6マウスに実装することは、成体または青年期のマウスは通常、思春期初期の雄または雌のマウスを攻撃せず、思春期は寿命が短く、脆弱性の目立たない時間的ウィンドウを含むため、困難でした。この制限は、CSDSの加速バージョンを思春期の雄と雌のマウスに使用できるように適応させることで克服されました。この4日間のストレスパラダイムは、1日2回の物理的攻撃セッションを行い、C57BL/6のオスの成体を使用して、CD-1マウスの攻撃性を刺激し、オスまたはメスの思春期マウスを容易に攻撃します。このモデルは、思春期マウスの社会的敗北ストレスの加速化(AcSD)と呼ばれた。思春期のAcSDへの曝露は、オスとメスの両方で24時間後に社会的回避を誘発しますが、敗北したマウスのサブセットでのみ発生します。この脆弱性は、回復力のあるグループと影響を受けやすいグループ間のセッション間で攻撃の数が一貫しているにもかかわらず発生します。AcSDモデルは、思春期内の離散的な期間の曝露を可能にするのに十分短く、社会的回避行動の有無に応じてマウスを分離することができ、思春期のC57BL/6雌マウスの社会的敗北ストレスを研究するために利用可能な最初のモデルです。
概要
慢性的な社会的敗北ストレスパラダイムは、成人の出生後日(PND)>65人の雄のげっ歯類の社会的ストレスをモデル化するために広く使用されています。このパラダイムは、侵入者がその領域に侵入したときの成体のオスのげっ歯類の自然な攻撃的な行動に基づいています。このモデルは、ラット、ハムスター、およびマウス1,2,3,4,5,6,7,8,9を含むさまざまなげっ歯類の種で使用され、侵入者のげっ歯類が常駐のげっ歯類からの物理的な攻撃性の数分間を実験する約10日間続く心理的ストレスとの組み合わせで構成されています。2匹のげっ歯類は、感覚的な接触は可能にするが物理的な接触は許さない仕切りで区切られた、居住者の自宅のケージに留まる7。マウス実験において、最も一般的に使用される常駐/侵略者マウスは、引退したブ....
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プロトコル
実験手順は、カナダ動物管理協議会のガイドラインに従って行われ、マギル大学およびダグラス病院動物管理委員会によって承認されました(動物実験承認番号:2005-5084)。すべてのマウスは、温度および湿度が制御された(21-22°C;60%)コロニールームに収容され、ダグラスメンタルヘルス大学研究所のニューロフェノタイピングセンターで12時間の明暗サイクル(8:00にライトオン)されました。マウスは、実験中、餌と水 を自由に利用できました 。マウスは各実験条件にランダムに割り当てられました。実験動物は市販の供給源から入手しました( 資料表を参照)。 表2 は、各実験段階における動物の特徴をまとめたものです。合計489匹の思春期のC57BL/6Jマウス(雄259匹、雌230匹)を20の実験コホートで使用しました。
表2:各実験段階の動物被験者。 †これらの動物が重傷を負わなければ、プライミングに再利用することができます。 ‡これらの動物が重傷を負わなければ、AcSDの 期間中、ダグラス精神保健大学研究所のニューロフェノタイピングセンターでのプライミングに再利用できます。 ¶男性の実験については、 #
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結果
慢性社会的敗北ストレスモデルを用いて、青年期のC57BL/6雄マウス(PND 21)を用いて、合計4つの異なる実験を行った。しかし、このモデルは、青年期初期のC57BL/6マウスでの使用には重要な制限がありました。
思春期のC57BL/6マウスに必要な機器の改造
最初の制限は、社会的敗北装置に使用された機器が成体マウス用に設計されていたことであった。その大きさから、PND 21の思春期のC57BL/6マウスは、仕切りの穿孔を通過してアグレッサー側に向かうことができた。これにより、感覚的な接触の期間が中断されました。さらに、思春期のマウスは、鋼線のトップのバーを通って逃げることができました。そこで、マウスの逃げ道を防ぐための改造を行いました(図1)。ミシン目の径を1.1cmから0.6cmに変更し(図1B)、鋼線の上部をバー間の間隔が1.1cmから0.6cmの間隔のものに変更しました(図.......
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ディスカッション
CD-1マウスにおける一貫した攻撃的な行動
スクリーニング段階では、CD-1が示すすべての行動(追いかける、装着する行動、匂いを嗅ぐ、グルーミング、噛む)に注意し、AcSD用のCD-1マウスを選択する際には、これらの記録を綿密に追跡することが非常に重要です。思春期マウスと相互作用するCD-1マウスは、それを攻撃することなく、プライミング中に思春期マウスに対して攻撃性を発達させる可能性があります。対照的に、成体マウスを攻撃するが、思春期マウスには近づかないCD-1マウスは、おそらく思春期マウスに対して攻撃性を発達させないでしょう。
CD-1プライミングフェーズは、思春期のマウスに対して攻撃的な行動を発達させることを可能にします。したがって、行動の正確なレジスタを持つことは、マウスの選択にとって重要です。さらに、CD-1マウスが以前に敗北を経験している場合でも、新しい実験の前には常にCD-1マウスをスクリーニングすることが不可欠です。一部のCD-1マウスは、一定期間自宅のケージに邪魔されずに放置すると、思春期のマウスの攻撃を停止でき、他のマウスは.......
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開示事項
著者は何も開示していません。
謝辞
この研究は、カナダ健康研究所(CF助成金番号:MOP-74709;PJT 190045)、国立薬物乱用研究所(CF助成金番号:R01DA037911)、カナダ自然科学工学研究評議会(CF助成金番号:2982226)。Andrea Pantoja-Urbanは、メキシコのThe National Council for Humanities, Science and Technologies/Consejo Nacional de Humanidades, Ciencias y Tecnologías(CONAHCYT)とFRQNT-留学生のためのメリット奨学金プログラム(PBEEE)の支援を受けました。サミュエル・リチャーは、マギル大学の神経科学統合プログラムからの奨学金によって支援されました。フィギュアのイラストは、BioRender.com のテンプレートを使用して作成されました。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| C57BL/6 思春期マウス | 家で育種 | マウスは、ダグラスメンタルヘルス大学研究所のニューロフェノタイピングセンターで繁殖されました。 | |
| C57BL/6成体マウス | チャールズリバーラボラトリーズ | 株コード:027 | はPND>65に到着するように注文され、標準的なマウスケージにグループ収容されます(ケージあたり4匹)。 |
| C57BL/6J 思春期マウス | ジャクソンラボの | ひずみコード:000664;RRID:IMSR_JAX:000664 | マウスはPND 24に到着するように注文され、標準的なマウスケージにグループ収容されます(ケージごとに4匹のマウス)。 |
| CD-1マウス | チャールズリバー研究所 | 株コード:022 | マウスは、生後3ヶ月以上のブリーダーを引退し、全体にシングルで収容されました。 |
| 洗浄液 | Virox Animal Health | DIN 02537222 | Prevail:加速過酸化水素。除菌クリーナーと消臭剤。 |
| 透明な穴あきアクリルガラス仕切り | ダグラス病院製、カスタム | (w)×45.7cm(d)×22.23cm(h);直径0.6cmのミシン目。仕切りは穴が開いており、マウスのペア間の感覚的な接触は可能ですが、物理的な接触はありません。 | |
| 透明な長方形のラットケージ | アレンタウン | 24 cm (w) × 48.3 cm (d) × 22.23 (h). | |
| 寝具用コットンスクエア | Inotiv Envigo | T.6060 iso-BLOX | 2.5 cm x 2.5 cm。 |
| 硬質ウッドチップ寝具 | Inotiv Envigo | Teklad 7090、7115 | サニチップ寝具。 |
| 鋼線のトップを固定するための大きなバインダークリップステー | プル | アイテム#:132429、モデル#:24178-CA | 51 mm |
| 鋼線トップを固定するための中型バインダークリップ | アイテム#:132367、モデル#:24172-CA | 32 mm、ラットケージのカバー蓋が大きなクリップで閉じない場合 | |
| 軟膏ではありません)、2つの抗生物質と塩酸リドカイン | |||
| のスチールワイヤートップ | 24 cm (w) × 48 cm (d) グリル間の間隔 0.6 cm (w) | ||
| ワイヤーメッシュエンクロージャ | ジョンストン工業用プラスチック | 11 cm (w) × 6.8 cm (d) × 42 cm (h) カスタムオーダー; ソーシャルインタラクションテストアリーナごとに2つ プレカットクリアポリカーボネートで固定 | |
| ソーシャルインタラクションオープンフィールドアリーナ | PEXIGLAS | 45 cm (w) × 45 cm (d) × 49 cm (h), 不透明なアクリルガラス (プレキシガラス) からカスタムメイド | |
| ストップウォッチ | 敗北セッションのタイミング測定には | ||
| 赤外線ライト付きビデオカメラ | スワン | SRDVR-44580V | スワンカメラ - 4チャンネル1080pデジタルビデオレコーダー&2×PRO-T853 |
| ビデオ追跡ソフトウェア | Topscan | 2.0 Clever Systems株式会社 |
参考文献
- Miczek, K. A. A new test for aggression in rats without aversive stimulation: Differential effects of d-amphetamine and cocaine. Psychopharmacology. 60, 253-259 (1979).
- Kudryavtseva, N., Bakshtanovskaya, I., Koryakina, L. Social m....
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再版と許可
