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Artigo de método

Papel das células T CD4 na encefalomielite autoimune experimental remitente-recorrente

863 visualizações

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DOI:

10.3791/66553

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19 de janeiro de 2024

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* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Um modelo experimental de encefalomielite autoimune (EAE) em camundongos foi empregado para investigar o papel das células T CD4 na fase inicial e na recidiva da EAE sob a perspectiva da fase de ativação e função do efeito imunológico.

Resumo

A esclerose múltipla (EM) é uma doença autoimune caracterizada pela infiltração de células imunes e desmielinização no sistema nervoso central (SNC). A encefalomielite autoimune experimental (EAE) serve como um modelo animal prototípico para o estudo da EM. Neste estudo, objetivamos investigar o papel das células T CD4 na iniciação e recidiva da EAE, com foco na fase de ativação e resposta imune. Para criar o modelo de camundongos EAE, camundongos fêmeas foram imunizados com glicoproteína de oligodendrócitos de mielina (MOG)35-55 emulsionada com adjuvante de Freund completo (CFA). Os escores clínicos foram avaliados diariamente e os resultados demonstraram que os camundongos do grupo EAE exibiram um padrão clássico de remitência-recorrente. A análise da coloração de hematoxilina-eosina (H&E) e luxol fast blue (LFB) revelou infiltração significativa de células inflamatórias no SNC e desmielinização em camundongos EAE. Em relação à fase de ativação, tanto as células T efetoras CD4+CD69+ (Teff) quanto as células T de memória efetora CD4+CD44+CD62L- (Tem) podem contribuir para o início da EAE, no entanto, o estágio de recidiva provavelmente foi dominado pelas células Tem CD4+CD44+CD62L-. Além disso, em termos de função imunológica, as células T (Th)1 auxiliares estão envolvidas principalmente no início do EAE. No entanto, as células Th1 e Th17 contribuem para o estágio de recidiva, e a função imunossupressora das células T reguladoras (Treg) foi inibida durante o processo patológico da EAE.

Introdução

A esclerose múltipla (EM) é uma doença autoimune que se caracteriza pela infiltração do sistema nervoso central (SNC) com células imunes e desmielinização 1,2. Um estudo recente mostrou que é a doença incapacitante mais comum que afeta os jovens, com sua incidência aumentando continuamente em todo o mundo3. A encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo animal prototípico para EM que simula muitos aspectos da fase inflamatória da EM humana4. Do ponto de vista das funções imunológicas, as células T CD4 iniciais que ain....

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Protocolo

Um total de 18 camundongos C57BL/6J fêmeas com idades entre seis e oito semanas foram divididos aleatoriamente em um grupo controle (n = 6) e um grupo EAE (n = 12) para este estudo. Os ratos foram comprados no centro de experimentos com animais da Universidade Médica de Ningxia. Os ratos foram alojados em uma sala com temperatura e umidade controladas com um ciclo claro/escuro de 12 horas e livre acesso a água doce e alimentos. A aprovação ética foi obtida do Comitê de Ética em Animais Experimentais da Universidade Médica de Ningxia antes do início do estudo.

1. Desenvolvimento de EAE remitente recorr....

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Resultados

Avaliação de escores clínicos
Como mostrado na Figura 1, os camundongos do grupo controle não apresentaram nenhum sintoma clínico. Os camundongos do grupo EAE, que foram imunizados com MOG35-55, apresentaram paralisia da cauda aproximadamente 12 dias após a imunização. No dia 16, os sintomas atingiram paralisia completa dos membros posteriores (definida como estágio de pico, pico). Depois disso, os sintomas foram gradualmente remitidos. Os sintomas clínicos dos camundongo.......

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Discussão

A SM é a doença desmielinizante autoimune mais prevalente do SNC, que afeta milhões de pessoas em todo o mundo17. O EAE é o modelo animal típico para simular as características clínico-patológicas da SM18. Estudos têm demonstrado que indivíduos com SM apresentam comprometimento cognitivo e outras incapacidades devido à degeneração de axônios e neurônios no SNC 19,20,21.

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pela Fundação de Ciências Naturais de Ningxia (2022AAC03601 e 2023AAC02087) e pela Fundação de Pesquisa da Universidade Médica de Ningxia (XM2019052). Obrigado pelo apoio do Centro de Pesquisa em Ciência e Tecnologia Médica da Universidade Médica de Ningxia.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Evaporador para máquina de anestesiaNorvap20-17368
  IsofluranoSigma-Aldrich (Xangai) Trading Co.Ltd.
70 μ filtro de células mXIYAN Co.,Ltd.15-1070
Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45 AnticorpoBiolegend103128
APC anti-mouse CD4 AnticorpoBiolegend100616
Contador automático de célulasJiangsu JIMBIO technology Co., LTDJIMBIO iCyta S2
BD* Cytometric Bead Array (CBA) Mouse Th1 / Th2 / Th17 CBA KitBD Biosciences560485
Biotina anti-rato CD16 / 32 AnticorpoBiolegend101303
Violeta brilhante 510 anti-rato CD69 AnticorpoBiolegend104532
BV786 Rato Anti-Rato CD62L (MEL-14)BD Pharmingen563109
Coluna Tissue & Kit de extração de proteína celularShanghai Epizyme Biomedical Technology Co., LtdPC201Plus
Completo Adjuvante de FreundSigma-Aldrich (Xangai) Co.Ltd de Negociação. 
SLCH4887 DesidratadorDIAPATHDonatello Seringa
esterilizada descartável (1 mL)Yikang Group210820
Seringa esterilizada descartável (2,5 mL)Yikang Group210820
Seringa esterilizada descartável (5 mL)Yikang Group210820
Máquina de tingimentoDIAPATHGiotto
Máquina de encaixotamentoWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5
EtanolSCRC100092683
Fetal Soro BovinoProcell Life Science& Tecnologia Co., Ltd.FSP500
FITC Hamster Anti-Mouse CD3e (145-2C11)BD Pharmingen553062
Citômetro de fluxoBecton, Dickinson and CompanyFACSCelesta
Citômetro de fluxoBecton, Dickinson and CompanyAccuri C6
Flow Jo softwareBD Biosciences10.8.1
Plataforma congeladaWuhan Junjie Electronics Co., Ltd JB-L5
Lâmina de vidroServicebioG6004
HE conjunto de solução de coranteServicebioG1003
Solução de hematoxilina-eosinaServicebioG1002
Centrífuga refrigerada de alta velocidadeThermo Fisher ScientificMogafugo8R
Sistema de imagemNikonNIKON DS-U3
Kit de coloração azul rápida LuxolServicebioG1030
Ms CD44 BV421 IM7BD Pharmingen564970
Mycobacterium tuberculosis H37RABD Pharmingen231141
Glicoproteína de oligodendrócitos de mielina (MOG35-55)AnaSpecAS-60130-1
Goma neutraSCRC10004160
OrganizadorKEDEEde
LeicaRM2016
P7208
Fosfato tampolado solução salinaServicebioG4202
Pipeta 0,5-10 μ LDLAB Scientific7010101004
Pipeta 100-1000 μ LDLAB Scientific7010101014
Pipeta 20-200 μ LDLAB Scientific7010101009
RPMI-1640Procell Ciências da Vida & Tecnologia Co., Ltd.Válvula em
TGuangdong Kanghua Medical Co., LTDA06
Espalhador de tecidoZhejiang Kehua Instrument Co., LtdKD-P
NikonNIKON ECLIPSE E100
XyleneSCRC10023418
792632 Fatiador patologia GFL-230 de labotaria de forno KD-P Toxina de coqueluche de Bordetella pertussis Sigma-Aldrich (Xangai) Trading Co.Ltd. PM150110 Microscópio óptico vertical

Referências

  1. Swanberg, K., et al. Multiple sclerosis diagnosis and phenotype identification by multivariate classification of in vivo frontal cortex metabolite profiles. Sci Rep. 12 (1), 13888(2022).
  2. Zahoor, I., et al.

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Reimpressões e permissões

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