Co-actine sédimentation Assay; pour l'analyse des Binding Protein à F-actine
Summary
Les protéines se lient à l'actine filamenteuse (F-actine) grâce à des modules distincts actine contraignant. Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure de co-sédimentation actine, qui est un test in vitro couramment utilisées pour analyser les protéines ou des domaines spécifiques qui se lient F-actine.
Abstract
Le cytosquelette d'actine dans la cellule est un réseau de filaments d'actine qui permet le mouvement des cellules et des processus cellulaires, et qui génère des tensions et aide à maintenir la forme cellulaire. Bien que le cytosquelette d'actine est une structure rigide, il est une structure dynamique qui est constamment remodelage. Un certain nombre de protéines peuvent se lier au cytosquelette d'actine. La liaison d'une protéine particulière à la F-actine est souvent souhaité pour soutenir la cellule observations biologiques ou pour mieux comprendre les processus dynamiques dues au remodelage du cytosquelette d'actine. L'actine co-sédimentation dosage est un dosage in vitro couramment utilisées pour analyser la liaison de protéines spécifiques ou de domaines protéiques avec F-actine. Les principes de base de l'analyse implique une incubation de la protéine d'intérêt (pleine longueur ou le domaine d') avec F-actine, étape d'ultracentrifugation à granulés de F-actine et l'analyse de la protéine co-sédimente avec F-actine. L'actine co-sédimentation dosages peuvent être conçus en conséquence de mesurer les affinités de liaison et des dosages d'actine concurrence.
Protocol
Discussion
L'actine co-sédimentation est un simple test in vitro pour analyser les protéines se liant à specfic F-actine. Dans cette vidéo, nous démontrons un exemple de comment une simple co-actine de sédimentation peut être effectuée. Nous montrons comment préparer la F-actine, préparer la protéine à tester et à la procédure de l'actine de co-sédimentation. Un certain nombre de points doivent être considérés lors de la réalisation d'actine co-sédimentation des dosages. Par exemple, les composants du tampon pour l'…
Acknowledgements
Merci au Dr Praveen Kumar dans le laboratoire de Wittman à l'UCSF pour le film de l'actine dans des cellules HaCaT.
References
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