العدلة عزل بروتوكول
Summary
العدلات هي من بين الخلايا الأولى للوصول في موقع رد الفعل المناعي للالتهابات ، وخضعت للدراسة وظائفها وآليات على نطاق واسع في المختبر. نظهر متدرجة الكثافة الطريقة المعيارية الفصل لعزل العدلات الإنسان من الدم الكامل باستخدام وسائل الإعلام فصل متاحة تجاريا.
Abstract
المحببة النوى العدلة (PMN) هي الكريات البيض الأكثر وفرة في البشر وبين الخلايا الأولى للوصول في موقع رد الفعل المناعي للالتهابات. نظرا لدورها الرئيسي في الالتهاب ، وتدرس على نطاق واسع وظائف العدلات مثل الحركة والإنتاج خلوى ، البلعمة ، ومكافحة الأورام الخلية. لتوصيف وظائف محددة من العدلات ، وهي طريقة نظيفة وسريعة وموثوقة للفصل بينها وبين غيرها من خلايا الدم غير المرغوب فيه في الدراسات المختبرية ، وخصوصا العدلات قصيرة الأمد ويجب استخدامها خلال 2-4 ساعات من جمعها. هنا ، علينا أن نظهر متدرجة الكثافة الطريقة المعيارية الفصل لعزل العدلات الإنسان من الدم الكامل باستخدام وسائل الإعلام المتاحة تجاريا الانفصال التي هي مزيج من الصوديوم وmetrizoate ديكستران 500. الإجراء يتكون من طبقات الدم كله على مدى الانحدار متوسطة الكثافة ، الطرد المركزي ، والفصل بين طبقة العدلة ، وتحلل من الكريات الحمراء المتبقية. ثم يتم غسل الخلايا ، وعدها ، ومعلق في المخزن الى التركيز المطلوب. عندما يقوم بشكل صحيح ، وقد تبين هذا الأسلوب لعينات من محصول> العدلات 95 ٪ مع بقاء> 95 ٪.
Protocol
Discussion
يتم استخدام أسلوب التدرج كثافة الفصل لعزل العدلات الإنسان من الدم الكامل باستخدام مزيج من الصوديوم وmetrizoate ديكستران 500. ويستند هذا الأسلوب على طريقة فصل الكريات البيضاء وحيدة النواة التي Boyum (1968) الذي تم تعديله من قبل لفصل العدلة فيرانتي وثونغ (1980).
بعد ج?…
Acknowledgements
بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة HL56621 R01.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lymphocyte Poly(R) | Reagent | Cedarlane Labs | PolymorphprepTM can be used as an alternative | |
| Hank’s Balanced Salt Solution without Calcium Chloride | Reagent | Invitrogen Gibco | ||
| Human Serum Albumin | Reagent | ZLB Bioplasma | ||
| Red Cell Lysis Buffer | Reagent | Roche Diagnostics | ||
| Centrifuge | Tool | |||
| Vortexer | Tool | |||
| Pasteur Pipettes and bulb | Tool | |||
| PolymorphprepTM | Reagent | Axis-Shield PoC | Alternative reagent to Lymphocyte-Poly (R) | |
| Syringe Filter | Other | Millipore | SLGV033RS | Millex-GV, 0.22 µm, PVDF, 33 mm, gamma-sterilizable |
| Hank’s Balance Salt Solution with Calcium Chloride | Reagent | Invitrogen Gibco |
References
- Boyum, A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand. J. Clin. Invest. 21, 77-83 (1968).
- England, J. M., Rowan, R. M. The assignment of values to fresh blood used for calibrating automated blood cell counters. Clin. Lab. Haemat. 10, 203-212 (1988).
- Garcia, A. Comparison of two leukocyte extraction methods for cytomegalovirus antigenemia assay. J. Clin. Microbiol. 34, 182-184 (1996).
- Ferrante, A., Thong, Y. H. Optimal conditions for simultaneous purification of mononuclear and polymorphonuclear leucocytes from human peripheral blood by the Ficoll-Hypaque method. J. Immunol. Methods. 36, 109-109 (1980).
