دوبامين الدماغ المتوسط الابتدائي الثقافات الخلية فصلها تسمح لدراسة خصائص الخلايا العصبية من قبل المشبكي الدوبامين. يمكن استخدامها لرصد الوقت الحقيقي الحركية الإفراج الدوبامين والبروتين / مرنا مستويات الدوبامين إيماس من المنظمين. هنا ، ونحن تبين لكم كيف تولد هذه الثقافات من الولدان القوارض.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الدماغ المتوسط الدوبامين الابتدائي الثقافات خلية ينفصل عن الولدان القوارض
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
القدرة على خلق ثقافات الخلية الأولية الدوبامين من الخلايا العصبية يسمح لدراسة خصائص الخلايا العصبية من قبل المشبكي الدوبامين في عزلة عن غيرها من المدخلات المنهجية في الدماغ. في المختبر ، ونحن نستخدم هذه الخلايا العصبية الحركية لتقييم إطلاق الدوبامين باستخدام الكربون amperometry الألياف ، فضلا عن مستويات التعبير عن الجينات والبروتينات ذات الصلة الدوبامين باستخدام PCR الكمي وكيمياء سيتولوجية مناعية. في هذا الفيديو ، ونحن تبين لكم كيف تولد هذه الثقافات من الولدان القوارض.
وتنطوي العملية على عدة خطوات ، بما في ذلك الطلاء من الخلايا النجمية الدبقية القشرية ، وتكييف وسائل الإعلام للثقافة العصبية خلية الركيزة الدبقية ، وتشريح الدماغ المتوسط في حديثي الولادة ، والهضم ، واستخراج والطلاء الدوبامين من الخلايا العصبية وإضافة إلى عوامل عصبية ضمان بقاء الخلية.
التطبيقات المناسبة لإعداد مثل هذه تشمل الكهربية ، كيمياء سيتولوجية مناعية ، PCR الكمي ، المجهري الفيديو (أي من الانصهار حويصلي في الوقت الحقيقي مع غشاء البلازما) ، وبقاء الخلية المقايسات شاشات السمية الأخرى.
البروتوكول
إعداد يسبق الثقافة
ملاحظة : يجب أن يكون مطلي ** الخلايا الدبقية في وقت مبكر بحيث يكون لديهم الوقت لتتكاثر وتغطية الجزء السفلي من الأطباق. بالنسبة للفئران مع الخلفية الوراثية شاذة أو التجريبية ، للتأكد من تطابق الثقافات الدبقية والخلايا العصبية من حيث التركيب الوراثي.
ملاحظة : ** 1-7 أيام قبل التشريح ، وإعداد المتوسطة الخلايا العصبية الجديدة واستبدال المتوسطة الدبقية في الأطباق مع 2ml.
ملاحظة : ** وفي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وصفت وسائل تسمح للقرار هنا غرامة من الميزات المورفولوجية والكيميائية العصبية الدوبامين من الخلايا العصبية المركزية التي هي على خلاف ذلك غير متوفرة في نهج النظامية أو في الجسم الحي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وكان يؤيد العمل DK065872 (ENP) ، ومؤسسة عائلة سميث جائزة التميز في البحوث الطبية الحيوية (ENP) ، F31 DA023760 (BMG ، ENP) وP30 NS047243 (تافتس مركز أبحاث العلوم العصبية).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
وشملت المواد في نص البروتوكول.
المراجع
- Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats. FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).
- Pothos, E. N. Regulation of dopamine....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
