Method Article

ראשי ניתק דופמין במוח התיכון Cell תרבויות מן ילודים מכרסמים

DOI:

10.3791/820

November 5th, 2008

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ראשי ניתק הדופמין במוח התיכון בתרביות תאים מאפשרים ללמוד את המאפיינים presynaptic של נוירונים דופמין. הם יכולים לשמש כדי לפקח בזמן אמת שחרור הדופמין קינטיקה של חלבונים / רמות ה-mRNA של הרגולטורים של exocytosis דופמין. כאן, אנו מראים לך איך לייצר מן התרבויות הללו בילודים מכרסמים.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

היכולת ליצור תרביות תאים העיקרי של נוירונים דופמין מאפשר ללמוד את המאפיינים presynaptic של נוירונים דופמין במנותק קלט מערכתית ממקומות אחרים במוח. במעבדה שלנו, אנו משתמשים אלו נוירונים להעריך קינטיקה שחרור הדופמין באמצעות סיבי פחמן amperometry, כמו גם רמות הביטוי של גנים הקשורים לדופמין חלבונים באמצעות PCR כמותי ו immunocytochemistry. בסרטון הזה, אנו מראים לך איך אנחנו מייצרים אלה תרבויות מן בילודים מכרסמים.

התהליך כולל מספר שלבים, כולל ציפוי של האסטרוציטים גליה קליפת המוח, את מיזוג של תרבות התקשורת העצבית על ידי תא המצע גליה, דיסקציה של המוח התיכון בילודים, את מערכת העיכול, מיצוי ציפוי של נוירונים דופאמין תוספת של גורמים neurotrophic ל להבטיח את הישרדות התא.

יישומים מתאימים להכנת כזה כוללים electrophysiology, immunocytochemistry, PCR כמותי, מיקרוסקופיה וידאו (כלומר, של איחוי בזמן אמת שלפוחי עם קרום התא), הכדאיות מבחני תא מסכי toxicological אחרים.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההכנה שקדמו תרבות

הערה: ** ותאי גלייה חייב להיות מצופה היטב מראש, כך שיש להם זמן להתרבות ולכסות את החלק התחתון של המנות. עבור עכברים עם הרקע הגנטי טיפוסיות או ניסיוני, הקפד להתאים לתרבויות גליה ואת עצבי במונחים של גנוטיפ.

הערה: ** 1-7 ימים לפני הניתוח, להכין מדיום העצבית טריים להחליף את מדיום גלייה את הכלים עם 2ml.

הערה: ** ביום שלפני הניתוח, את הפריטים הבאים צריכים להישאר תחת אור UV לילה:

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השיטות שתוארו כאן לאפשר רזולוציה נאה של תכונות מורפולוגיות neurochemical של נוירונים דופמין מרכזית אחרת הם לא זמינים מערכתית או גישת vivo.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

העבודה נתמכה על ידי DK065872 (ENP), קרן משפחת סמית פרס הצטיינות במחקר ביו (ENP), F31 DA023760 (BMG, ENP) ו P30 NS047243 (Tufts המרכז Neuroscience Research).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

חומרים הכלולים בטקסט פרוטוקול.

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats. FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).
  2. Pothos, E. N. Regulation of dopamine....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Primary Dopamine NeuronsMidbrain DissectionGlial Cell CultureNeuronal PlatingCarbon Fiber AmperometryQuantitative PCRImmunocytochemistryGDNF TreatmentFDU InhibitionSterile Technique

Related Articles