Bu video, besleyici, hücre koşullarda ve ne kadar besleyici sürekli geçit hESC hücre koşulları, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) büyümesini nasıl koruyacağınızı gösteriyor. HESC, Onay pluripotency immünofloresan mikroskobu ile besleyici, hücre koşullarda yetiştirilen da gösterilmiştir. 3 Bölüm 2
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
MEFS Matrigel 2 Matrigel üzerine MEFS Yarma hESC:
Bu makalede
Özet
Özet
Bu video MEF plakaları geçiş hESC nasıl fare embriyonik fibroblast besleyici hücre ücretsiz Matrigel plakaları (MEF) besleyici hücreler, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) nasıl büyümeye göstermektedir.
Protokol
hESC kültür günlük bakım
- hESC kültür ortamı, her 24 saatte bir değiştirilmesi gerekir. 4 ° C'de depolanan ES medya stok şişesi, gerekli (6 plaka başına ~ 20ml) çözüm miktarı 50ml şahin tüp içindeki yeri ve bir su banyosunda 37 ° C sıcak çıkarın. Medya ısındı sonra, nihai konsantrasyonu 10 ng 4 saklanan bFGF ° C ekleyin. 4 ° C, kullanımdan hemen sonra geri bFGF stok koy!
- 6 kuyucuğu çıkar ama medya 500μl ~. Girdap enkaz kaldırma için askıya alma kültürü çanak emin olun. BFGF hESC kültür ortamı iyice karıştırılır emin olun ve her bir kuyu için 6 plaka taze medya 3ml ekleyin. Inkübatör plaka geri koyun.
Matrigel ü....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu video nasıl geçit hESC MEF plakalardan besleyici, hücre Matrigel plakaları göstermektedir. Matrigel koloninin yoğunluğu MEFS olağan bölerek yoğunluğu kolonilerin daha yüksek olduğunu unutmayın. Ekim-4 ve SSEA-4, hESC pluripotency belirteçleri, immünofloresan boyaması ve mikroskobu veya flow sitometri besleyici-kültür koşullarında farklılaşmamış bir devlet hESC bakım onaylamak için ihtiyaç vardır.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Teitell laboratuar İnsan embriyonik kök hücre çalışmaları California Rejeneratif Tıp Enstitüsü (CIRM) tohum hibe RS1-00313 tarafından desteklenmektedir. Geniş, UCLA, özellikle Dr. Amander Clark, Dr Jerome Zack ve verdikleri destek için çalışmalarımız UCLA Broad Enstitüsü Kök Hücre Çekirdek Tesis üyeleri Rejeneratif Tıp ve Kök Hücre Araştırma Merkezi üyelerine teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reaktif | GIBCO, by Life Technologies | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reaktif | GIBCO, by Life Technologies | 11330-057 | |
| Esansiyel Olmayan Amino Asitler | Reaktif | GIBCO, by Life Technologies | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reaktif | GIBCO, by Life Technologies | 35050-061 | |
| DMEM | Reaktif | GIBCO, by Life Technologies | 11995-065 | |
| FBS | Reaktif | Clontech Laboratories | 631107 | |
| L-glutamin | Reaktif | GIBCO, by Life Technologies | 25030-081 | |
| BME | Reaktif | Fisher Scientific | BP176-100 | |
| bFGF | Reaktif | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Kollajenaz IV | Reaktif | GIBCO, by Life Technologies | 17104-019 | |
| Dispase | Reaktif | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penisilin / Streptomisin | Reaktif | GIBCO, by Life Technologies | 15140-122 | |
| Jelatin | Reaktif | Chemicon International | ES-006-B | |
| Matrigel | Reaktif | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antikoru | Reaktif | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phyc–erythrin Konjuge Fare IgG3 | Reaktif | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITC konjuge anti-tavşan IgG | Reaktif | Jackson ImmunoResearch | 715-095-152 |
Kaynaklar
- Thomson, J. amesA., Itskovitz-Eldor, J. oseph, Shapiro, S. anderS., Waknitz, M. ichelleA., Swiergiel, J. enniferJ., Marshall, V. ivienneS., Jones, J. effreyM. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts . Science. 282, 1145-1147 (1998).
- Xu, C. hunhui, Inokuma, M. argaretS., Denham, J. errod, Golds, K. athaleen, Kundu, P. ratima, Gold, J. osephD., Carpenter, M. elissaK.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
