Studeren Membraan Biogenese met een Luciferase-Based Reporter Gene test

Summary

Hier beschrijven we de procedures voor het bestuderen van veranderingen in de fagocytose-geïnduceerde genexpressie met een luciferase-based reportergen benadering met behulp van de Dual-GloTM Luciferase Assay System van Promega.

Abstract

De studie van de coördinatie van de verschillende lipiden synthese wegen tijdens membraan biogenese is het nuttig om te werken met een experimenteel systeem waarbij membraan biogenese treedt snel op en in een induceerbare manier. We hebben ontdekt dat fagocytose van latex bolletjes is praktisch voor deze doeleinden als cellen snel synthetiseren membraanlipiden tot membraan zwembaden verloren als verpakkingsmateriaal tijdens deeltje verzwelging te vullen. Hier beschrijven we de procedures voor het bestuderen van veranderingen in de fagocytose-geïnduceerde genexpressie met een luciferase-based reportergen benadering met behulp van de Dual-Glo Luciferase Assay System van Promega.

Protocol

Cel Cultuur Stock culturen van humane embryonale nier 293 (HEK293) cellen worden gekweekt in 10-cm cultuur gerechten in 'medium A', bestaande uit Medium Dulbecco's Modified Eagle's (DMEM) aangevuld met een cocktail van antibiotica (100 eenheden per ml penicilline en 100 ug per ml streptomycine sulfaat) en 10% foetaal bovine serum (FBS). Voor het instellen van cellen voor een experiment, het medium afgezogen en de cellen worden gewassen twee keer met 5 ml fosfaat gebufferde zoutoplossi…