Studera Membran biogenes med en luciferas-Based Reporter Gene Assay

Summary

Här beskriver vi rutiner för att studera förändringar i fagocytos-inducerad genuttryck med en luciferas-baserad reporter gen metod att använda Dual-GloTM luciferas analyssystem från Promega.

Abstract

Att studera samordningen av olika vägar lipid syntes under membranet biogenes det är bra att arbeta med ett experimentellt system där membranet biogenes sker snabbt och på ett inducible sätt. Vi har funnit att fagocytos av latex pärlor är praktiskt för dessa ändamål som celler snabbt syntetisera membran lipider för att fylla på membran pooler förlorade emballeringsmaterial under partikel omvälvning. Här beskriver vi rutiner för att studera förändringar i fagocytos-inducerad genuttryck med en luciferas-baserad reporter gen metod att använda Dual-Glo luciferas analyssystem från Promega.

Protocol

Cell Culture Stock kulturer med humana embryonala njur 293 (HEK293) celler odlas i 10-cm kultur rätter i "medium A", bestående av Dulbecco ändrade Eagles Medium (DMEM) kompletteras med en cocktail av antibiotika (100 enheter per ml penicillin och 100 mikrogram per ml streptomycin sulfat) och 10% fetalt bovint serum (FBS). För att ställa in celler för ett experiment, är mediet sugs bort, och cellerna tvättas två gånger med 5 ml fosfatbuffrad saltlösning (PBS) lösning. P…