Подготовка и обслуживание Спинной корневой Ganglia Нейроны в отсеки культур
Summary
Здесь мы опишем технику подготовки и поддержания отсеки камеры для культивирования сенсорных нейронов спинного ганглиев корня.
Abstract
Нейроны расширить аксонального процессы, которые далеки от тела клетки к иннервируют тканях-мишенях, где целевая полученных факторов роста, необходимых для выживания нейронов и функции. Нейротрофинов специально обязаны поддерживать выживание и дифференциации иннервирующих сенсорных нейронов, но вопрос о том, как эти целевые полученных нейротрофинов сообщает тела клетки нейронов, иннервирующих была областью активных исследований на протяжении более 30 лет. Наиболее общепринятой моделью того, как нейротрофина сигналы достигают тела клетки предлагает сигнализации эндосомы нести этот сигнал ретроградно вдоль аксона. С целью изучения ретроградного транспорта, культуры система первоначально была разработана Робертом Campenot, в которых клетка тела изолированы от своих аксонов. Техника подготовки этих отсеки камеры для культивирования сенсорных нейронов повторяет селективной стимуляции нейронов терминалов, что происходит в естественных условиях после выпуска целевых полученных нейротрофинов. Ретроградная сигнализация событий, требующих дальнего микротрубочек зависящих транспортных ретроградной иметь важные последствия для лечения нейродегенеративных расстройств.
Protocol
Discussion
В этом видео, мы показали, как готовить и поддерживать отсеки камеры для использования в нейронах DRG культивирования. Было сделано правильно, эта система позволяет разделение тела клетки от аксона с целью изучения механизмов, посредством которых нейротрофинов сигнала на большие аксонов. Так как ж…
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить Катарина Cosker и Стефани Courchesne за полезные обсуждения.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
