Homarus атепсапиз стоматогастральных нервной системы Dissection

Процедуру выделения желудочной нервной системы ST от омара можно разделить на две части: грубую и тонкую вскрытие. В этом видео рассказывается о тонком вскрытии соматической желудочной нервной системы от желудка, включая стеатожелудочный ганглий, называемый STG, и комиссуральные ганглии, называемые шестеренками. По сути, нервы и ганглии должны быть отделены от окружающих тканей, начиная с изоляции ЦГС, за которой следует изоляция St G. Результатом этой процедуры является систематическая нервная система желудка, выдержанная в чашке, готовой к использованию для различных исследований, направленных на функцию нервной системы.

Здравствуйте, я Аннализа Тобин из лаборатории доктора Евы Мартир на биологическом факультете Университета Брандейса. Привет, я Хиллари Берман, тоже из Martyr Lab. Сегодня мы покажем вам протокол выделения соматической желудочной нервной системы от желудка омара homarus Americana, чтобы увидеть, как был удален желудок.

Пожалуйста, ознакомьтесь с нашим сопроводительным видеопротоколом в JoVE. Мы используем эту процедуру в нашей лаборатории для изучения функции нейронов в малых нейронных цепях в создании ритмичного поведения. Итак, приступим.

Для начала необходимо подготовить желудок омара, чтобы увидеть, как это достигается. Посмотрите прилагаемое видео пивника, и Тобин сначала ориентирует блюдо так, чтобы внутренний конец, который находится у губы, был от вас, а задний конец был обращен к вам. Эта часть процедуры начинается с более точного закрепления препарата.

Прижмите пищевод с каждой стороны губы и, при необходимости, переставьте другие штифты, размещенные во время грубого вскрытия, чтобы живот лежал ровно. А затем удалите гиподерму, сначала захватив ее возле ГМ, две ГМ, три мышцы, отделив ее от этих мышц и аккуратно потянув в переднем направлении. Отделите гиподерму от основного жира, перерезав любые соединения вокруг центральной артерии, которая охватывает часть соматической желудочной нервной системы, оставьте гиподерму нетронутой.

В радиусе примерно 0,5 сантиметра от соматического желудочного ганглия, который находится между мышцами GM one B, разделенная гиподерма теперь может быть отрезана. Следующим шагом является отделение мозга от подлежащих тканей. Начните с определения двух больших коммисных нервов, которые выступают двусторонне от передней части мозга к коммис-ганглиям в передней части желудка.

Оставив эти нервы нетронутыми, аккуратно поднимите мозг с помощью щипцов и разрежьте так, чтобы отделить мозг от остальной ткани. Будьте осторожны при этом, так как соматический желудочный нерв находится под мозгом и должен быть неповрежденным. Чтобы отделить комиссуральные ганглии от окружающих тканей, сначала найдите их, пройдя по одному из коммических нервов к ганглию.

Теперь определите ION и SON. Эти нервы должны оставаться неповрежденными. Каждый коммис ганглий будет иметь множество нервов, расходящихся наружу.

Вырезаем большинство из них, кроме ION и SON. И оставьте один дополнительный нерв, чтобы удерживать ганглий на месте, пока вы заканчиваете вскрытие. Теперь таким же образом найдите и обрежьте нервы от другого ганглия коммиса.

Далее очистите ION и SON от латерального к медиальному. Оставьте губной нерв нетронутым, чтобы закрепить препарат на животе. Пищеводный ганглий находится на пересечении с пересечением iOS.

Вы можете очистить его ниже, захватив нижний желудочковый нерв и направив его вверх, чтобы разрезать внизу. Следующим этапом является отделение СТГ от окружающих тканей. STG находится внутри артерии, которая проходит между мышцами GM one B и вниз до GM two a B мышцами.

Ищите перерезанный конец артерии рядом с ГМ. Две мышцы AB тянут артерию вверх и внутрь, чтобы обнажить DVN. Продолжайте подтягиваться до оставшейся гиподермы.

После отделения артерия может быть обрезана до уровня, где она соприкасается с оставшейся гиподермой. Теперь отрежьте мышечный лоскут, который располагался в роструме омара. Далее поднимите вверх гиподерму над артерией.

Артерия создает туннель внутри жира. Поместите одно лезвие ножниц внутрь артерии и разрежьте мышцу над ней.

Убедитесь, что вы видите DVN во время резки, чтобы быть уверенным, что вы в безопасности. Над STG продолжайте разрез спереди вдоль артерии. Когда вы будете резать над STG, вы сможете увидеть, как STN исходит спереди от STG и погружается вниз в мышцу.

Продолжайте резать спереди, чтобы полностью отделить мышцу над STG. Удалите все ткани от STN. Теперь можно приступать к выделению нескольких других нервов.

Следующими нервами, которые отделяются от окружающих тканей, являются AGNs. Даже если вы не планируете записывать с A GN, вам понадобится ее часть, чтобы прижать ганглий. Чтобы лучше увидеть AGNs, удалите оставшуюся гиподерму и тонкий слой нижележащей мышцы, расположенный сразу за STG.

Найдите темный туннель в жировой и мышечной массе по обе стороны от палочки DVN, одно лезвие ножниц внутри туннеля и разрежьте ткань над нервом. Продолжайте резать в поперечном направлении вслед за нервом, чтобы изолировать его. Пары миллиметров достаточно для закрепления ганглия, но обнажайте не менее пяти миллиметров A GN, если планируете вести запись с него.

Отделите GN от мышцы, которую он иннервирует, перерезав соединения. А теперь повторите этот процесс с другой стороны, чтобы изолировать другой A GN. После того, как оба AGN будут рассечены, разрежьте все мышцы и ткани, соединяющие STG с животом. Затем изолируйте M vns.

Они представляют собой двустороннюю пару небольших нервов, ответвляющихся от ЛВН и проходящих латерально под жировой тканью. Используйте ножницы или два щипца, чтобы разрезать жир с одной стороны DVN рядом с тем местом, где он разветвляется на две LVN. Здесь вы далеко от М ВНС и не рискнете их резать.

Поднимите жировую прослойку и загляните под нее в поисках маленького нерва. M VNS запускает среду латерально, прямо позади уровня GM одной мышцы B. Удалите слой жира над MVN, оставив нерв пока нетронутым, чтобы он не запутался.

Вы отрежете его боковой конец и любые прикрепления к M VNS в конце вскрытия нервной системы. Повторите процесс с другой стороны, чтобы изолировать другой MVN. Следующими в очереди на изоляцию являются LVN в задних нервах.

Начиная с ответвления LVN в горизонтальном направлении от DVN. Следуйте за LVN, срезав жир над ней. В зависимости от препарата, иногда может быть оттянут весь жировой слой над нервом.

Продолжайте показывать LVN до того момента, когда PSN ответвляется. Теперь найдите PYN. Это нерв, идущий сзади над порами.

Снимите тонкую пленку, покрывающую эту область. Изолируйте PYN, разрезав небольшую часть пор, прикрепленную к банке PYN. Затем осторожно поднимите участок pric и отрежьте ткань с обеих сторон PYN, пока не дойдете до ветви, которая прикрепляется к PDN.

Продолжайте изолировать нерв PDNA, идущий сзади к мышце-расширителю. Сначала разрежьте небольшой участок мышцы расширения, прикрепленной к PDN. Затем осторожно приподнимает мышечный участок с расширением прика.

Отрежьте ткань по обе стороны от PDN, пока не дойдете до ветви, которая прикрепляется к PYN. Теперь найдите вентральную LVN, которая соединяет PYN и PDN с LVN, в точке треугольной ветви, где PYN и PDN соединяются с вентральной LVN, изолируют любой небольшой участок нерва, который ответвляется от вентральной LVN, такой как VPLN. Это будет использоваться в качестве ручки для потягивания за подфюзеляжный подъем LVN на ручке.

Отрежьте ткань по обе стороны от вентральной ЛЖН, работая в переднем направлении, пока не дойдете до точки, где ПСН ответвляется. Теперь вы успешно рассекли задние нервы на одной стороне желудка. Теперь изолируйте ЛВН и задние нервы с другой стороны.

Полностью отделите LVN от желудка. Потяните за PSN и разрежьте все ткани и нервы, прикрепленные к LVN и вентральной LVN, за исключением PDN и PYN. Повторите этот процесс с другой стороны.

Далее отрежьте боковой конец каждого MVN. Поднимите боковой конец и разрежьте все крепления к MVN на переднем конце. Отрежьте все прикрепления к коммуникативным ганглиям и перережьте губные нервы с каждой стороны.

Визуально просканируйте соматическую нервную систему желудка, чтобы определить, а затем вырезать любые дополнительные прикрепления к ткани желудка. И как только вы перережете все соединения, вы сможете ухватиться за передний конец обоих коммисных нервов над коммис-ганглиями, снять соматическую желудочную нервную систему с желудка и переместить ее к краю посуды. При этом отрежьте все дополнительные насадки, чтобы освободить нервную систему.

Вскрытие завершено. Начните с приготовления блюда согар, к которому будет привязана нервная система. Тщательно разотрите немного ткани желудка по поверхности согара в небольшой посуде.

Это уменьшит гидрофобность согара, так что солевой раствор будет равномерно распределяться по блюду. Промойте и наполните сигару охлажденным парусником. Перенесите нервную систему на приготовленное блюдо согар, взяв за передние концы обоих коммис нервов.

Поднимаем нервную систему из большой посуды и закладываем ее в маленькую посуду. Чтобы зажать нервную систему, используйте комбинацию мелких булавок и более тонких булавок. Сначала отрежьте вольфрамовую проволоку, убедитесь, что препарат находится тыльной стороной вверх, убедившись, что нижний желудочковый нерв направлен в сторону от силгарда.

Теперь удалите мозг и прижмите коммис нервы. Осторожно потяните нервную систему завязанным и плоским, потянув каждый из PSN сзади и в сторону и прижав их вниз. Затем удалите мышцу-расширитель P из ПНС и зафиксируйте эти нервы.

Затем удалите пилорический сегмент из ГИН и прикрепите ГИНы. Наконец, определите все оставшиеся изолированные нервы, такие как губные нервы, mvns и AGNs. Следующим шагом является делист S st.

G. Во-первых, убедитесь, что S st G плоско прилегает к S защите и удерживается тау боковыми AGN. Передняя STN и задняя DVN организуют освещение таким образом, чтобы обеспечить визуализацию аксонов внутри DVN. Затем с помощью маленькой булавки или тонкой вольфрамовой иглы.

Сделайте небольшое неглубокое отверстие в оболочке вокруг DVN, прямо позади STG. Протяните иглу через окрашенный DVN дорсальный участок к аксонам, чтобы создать горизонтальный разрыв в нервной оболочке. Теперь возьмите лоскут нервного влагалища позади STG, потяните его вперед и разрежьте, чтобы удалить влагалище с дорсальной стороны STG.

После снятия оболочки препарат готов к экспериментам при условии, что препарат охлаждается при температуре примерно от четырех до 15 градусов Цельсия. Было отмечено, что этот препарат остается экспериментально стабильным в течение пяти дней. Неповрежденная желудочная нервная система Сато должна быть прижата Т к защитной тарелке Syl

Как показано, нервы должны быть свободны от повреждений и доступны для внеклеточных записей. Клеточные тела интактного STG должны быть видимыми и доступными для внутриклеточной регистрации. Мы только что показали вам, как изолировать соматическую нервную систему желудка омара Homa Americana.

При проведении этого вскрытия важно хорошо ознакомиться с анатомией, чтобы не повредить ткани и нервы. Кроме того, очень важно поддерживать прохладную температуру препарата от четырех до 15 градусов по Цельсию. Этого можно легко достичь во время вскрытия, заменив солевой раствор каждые полчаса на холодный солевой раствор, который вы храните в холодильнике при температуре четыре градуса Цельсия, когда препарат остается прохладным.

Он жизнеспособен от нескольких часов до нескольких дней. Вот и все. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.