عبارة في الدماغ : تشريح العين الرئيسيات

يبدأ هذا الإجراء برأس جيد الانتشار. مع إزالة الدماغ ، يتم بعد ذلك استخراج مقل العيون وتوصيلها. يتم إزالة الأنسجة بعد ذلك ، تتم إزالة عدسة القرنية والصلبة والخلط الزجاجي بعناية ، مما يؤدي إلى تحرير شبكية العين.

يتم وضع شبكية العين بشكل مسطح على شريحة زجاجية ، ويتم التخلص من الفكاهة الزجاجية المتبقية. ثم يتم أخذ عينات Iso Dentrix وحمايتها بالتبريد. مرحبا ، أنا الدكتور مارك بيرك من مختبر علوم الأعصاب البصرية في كلية البصريات بجامعة مونتريال.

مرحبا ، أنا الدكتورة شاهين زور ، أيضا من مختبر علوم الأعصاب البصرية في كلية البصريات بجامعة مونتريال. مرحبا ، أنا الدكتور تيتو ، مدير مختبر علم الأعصاب البصري في كلية البصريات ، جامعة مونتريال. سنعرض لك اليوم إجراء لتشريح شبكية الرئيسيات غير البشرية.

نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة الجوانب المختلفة لتنظيم الشبكية في التطور الطبيعي واستجابة للتدخلات التنموية. لذلك دعونا نبدأ. ابدأ هذا البروتوكول برأس الرئيسيات ، الذي قمت بنقله سابقا.

حسنا ، مع مثبت مثل ألدهيد Paraform ، يتم حصاد شبكية العين المراد تشريحها هنا من vervet. لضمان الحفاظ على العين ، يمكن حقن مثبت مثل الألدهيد الطالي أسفل العدسة مباشرة. يجب تخزين الرأس في مثبت أو PBS قبل الانتقال إلى استرداد مقل العيون لتسهيل الوصول إلى مقلة العين.

أولا ، قم بإزالة الدماغ. لعرض هذا الإجراء ، راجع مقالتنا الأخيرة في JoVE التي تشرح دماغ الرئيسيات غير البشرية في الفضاء التجسيمي. مع إزالة الدماغ ، يكون عظم المدار الرقيق الجدران واضحا بسهولة.

استخدم العظام لتقطيع جدار المدار ببطء. استخدم مشرطا لقطع عضلات العين وإزالة النسيج الضام من مقلة العين. أخيرا ، قم بقطع العصب البصري بعناية لإطلاق مقلة العين من التجويف المداري.

الآن بعد أن تم تحرير مقلة العين ، يمكن إزالة شبكية العين لإزالة شبكية العين ، أولا ، ضع العين في طبق بتري مملوء ب PBS لمنع شبكية العين من الجفاف. ابدأ بإزالة القرنية. استخدم زوجا من مقص الزنبرك واقطع الصلبة بالقرب من محيط القرنية على مستوى أورا سيراتا.

باستخدام الملقط ، قم بإزالة العدسة. أخيرا ، لإزالة شبكية العين من الصلبة. استخدم فرشاة الرسم والملقط والمقص الربيعي.

افصل الشبكية عن الصلبة ثم اقطع الصلبة بالمقص. يجب على المرء إجراء هذه العملية بزيادات صغيرة لتجنب إتلاف أنسجة الشبكية أو تمزيقها. لا يتم فصل الصلبة بسهولة عن العصب البصري المتبقي.

لذا قم بقص الصلبة بعناية حول العصب البصري. تحافظ شبكية العين على شكلها المنحني. قم بإزالة الخلط الزجاجي الشبيه بالهلام في كتلة.

شبكية العين جاهزة الآن للتركيب وأخذ العينات. من أجل تسطيح شبكية العين على شريحة ، قم بعمل عدة قطع شعاعية بشفرة مشرط. استخدم ورق الترشيح العادي وفرشاة الرسم لإزالة الفكاهة الزجاجية المتبقية.

من الضروري أن تكون لطيفا أثناء تنفيذ هذه الخطوة لأنها تكشف عن طبقة الخلايا العقدية الشبكية. تحقق مما إذا كان العصب البصري لا يزال متصلا بالقرص البصري. استخدم شفرة مشرط ومقص زنبركي لإزالة العصب البصري دون تمزيق شبكية العين.

الآن قم بتركيب شبكية العين بشكل مسطح على شريحة مجهر زجاجي مقاس بوصتين في ثلاث بوصات مع طبقة عقدية شبكية بعيدا عن الشريحة. تظهر النقرة الآن كرقعة مظلمة في الاتجاه البطني الصدغي من القرص البصري. لفحص طبقة الخلايا العقدية الشبكية ، قد تحتاج الظهارة المصطبغة إلى إزالتها أو تبييضها.

استخدم فرشاة الرسم لإزالة بعض الظهارة المصطبغة برفق. لاحظ أن هذه الطريقة تميل إلى إتلاف طبقة المستقبلات الضوئية. يتطلب فحص توزيع الخلايا ومورفولوجيا كل طبقة في جميع أنحاء شبكية العين أخذ عينات متساوية القياس من شبكية العين.

ابدأ بتركيب شبكية العين بشكل مسطح على شريحة وأضف PBS للحفاظ على رطوبة شبكية العين. ثم قطع قطع صغيرة من الأنسجة على مسافة متساوية من القرص البصري في الاتجاهات الأنفية والزمنية والعلوية والسفلية. يمكن الآن تقسيم هذه القطع المقطوعة في المستوى الإكليلي باستخدام اهتزاز ناظم البرد أو ميكروتوم فائق.

اعتمادا على سؤال البحث. لتقسيم ناظم البرد ، يجب أن تكون القطع محمية بالتبريد في 30٪ من السكروز في مخزن الفوسفات طوال الليل عند أربع درجات مئوية. بعد الحضانة الليلية ، قم بتجميد قطع الشبكية في وسط تركيب على الثلج الجاف.

استخدم ناظم البرد لإنتاج أقسام رقيقة تصل إلى أربعة ميكرون. في مختبرنا ، نقوم بشكل روتيني بإجراء الكيمياء المناعية على شبكية العين المقطعة بالتبريد. في هذه الحالة ، نحن مهتمون بكثافة iso لمستقبلات القنب في شبكية الرئيسيات.

ندرس أيضا آثار التعرض للإيثانول قبل الولادة على النظام البصري للرئيسيات. تحقيقا لهذه الغاية ، نحن مهتمون بكثافة الخلايا وسمك الطبقة في النقرة وفي شبكية العين المحيطية. لتحقيق ذلك ، قمنا بتضمين قطع من شبكية العين في شريحة epon عند 700 نانومتر على ميكروتوم فائق وصمة عار مع 1٪ toine. أزرق.

لقد أوضحنا لك للتو كيفية تشريح شبكية العين الرئيسية عند القيام بهذا الإجراء. من المهم أن تتذكر عدم إتلاف العقد الشبكية أو طبقة الخلية أو طبقات المستقبلات الضوئية. هذا كل شيء.

شكرا على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجاربك.